化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)的優(yōu)勢(shì)1.靈敏度高:靈敏度高是化學(xué)發(fā)光免疫分析關(guān)鍵的優(yōu)越性?;瘜W(xué)發(fā)光免疫分析能夠檢出放射性免疫分析和酶聯(lián)免疫分析等方法無法檢出的物質(zhì),對(duì)疾病的早期診斷具有十分重要的意義。2.寬的線性動(dòng)力學(xué)范圍:發(fā)光強(qiáng)度在4-6個(gè)量級(jí)之間,與測(cè)定物質(zhì)濃度間呈線性關(guān)系。這與顯色酶聯(lián)免疫分析吸光度(OD值)2.0的范圍相比,優(yōu)勢(shì)明顯。雖然同位素放射免疫也有較寬的線性動(dòng)力學(xué)范圍,但是放射性限制其應(yīng)用。3.光信號(hào)持續(xù)時(shí)間長(zhǎng):化學(xué)發(fā)光免疫分析的光信號(hào)持續(xù)時(shí)間可達(dá)數(shù)小時(shí)甚至一tian,簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作及測(cè)量。4.分析方法簡(jiǎn)便快速:絕大多數(shù)分析測(cè)定jin需加入一種試劑(或符合制劑)的一步模式。5.結(jié)果穩(wěn)定、誤差?。簶颖颈旧戆l(fā)光,不需要額外光源,避免了外來因素的干擾(光源穩(wěn)定性、光散射、光波選擇器),分析結(jié)果穩(wěn)定可靠。6.安全性好及使用期長(zhǎng):到目前為止還未發(fā)現(xiàn)化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑的危害性;另外這些試劑穩(wěn)定,保存期可達(dá)一年之久。CCK-8試劑盒可以用于生物活性因子的活性檢測(cè),抗**藥物的篩選,細(xì)胞增值的測(cè)定??偪寡趸芰z測(cè)試劑盒
ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí),受檢標(biāo)本(測(cè)定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。 ELISA可用于測(cè)定抗原,也可用于測(cè)定抗體。Glycerol-3-phosphate Dehydrogenase Assay示蹤試劑盒中所使用的熒光探針具有極低細(xì)胞毒性和無生物活性的特點(diǎn)。
每種試劑都有其佳反應(yīng)模式,其中溫度和溫育時(shí)間控制是重要因素。因孵育溫度高,反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng),會(huì)造成整板本底高,陽性率高。溫育般用濕盒或水浴,ELISA試劑盒反應(yīng)板不宜疊放,以保證各板溫度都能迅速平衡,為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋。作為記錄測(cè)定結(jié)果的儀器,酶標(biāo)儀的性能穩(wěn)定與否,決定結(jié)果的可靠度。先酶標(biāo)儀應(yīng)定期進(jìn)行保養(yǎng),對(duì)濾光片要定期校正;其次酶標(biāo)儀波長(zhǎng)設(shè)置要正確,好使用雙波長(zhǎng),個(gè)檢測(cè)波長(zhǎng),個(gè)參比波長(zhǎng),以消除微孔板底部劃痕、不平、指印或液面高度差異造成的光干擾。此外,在用酶標(biāo)儀讀數(shù)時(shí)好先擦試微孔板底部并壓平板條。由于各種酶標(biāo)儀性能有所不同,使用中應(yīng)詳細(xì)閱讀說明書。
常用的病毒載體有腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒。逆轉(zhuǎn)錄病毒載體只能感ran分裂期細(xì)胞,而且容量有限,腺病毒一般不能整合到染色體上,只能進(jìn)行瞬時(shí)感ran。與其它逆轉(zhuǎn)錄病毒相比,慢病毒(LV)具有可以感ran非分裂期細(xì)胞、容納外源性基因片段大,可以長(zhǎng)期表達(dá)等xian zhu優(yōu)點(diǎn)。慢病毒不產(chǎn)生任何有效的細(xì)胞免疫應(yīng)答,可作為一種體外基因運(yùn)輸?shù)墓ぞ?。慢病毒載體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因表達(dá)能持續(xù)數(shù)月,且無可觀察到的病理學(xué)現(xiàn)象。慢病毒包裝系統(tǒng)一般由慢病毒表達(dá)載體和慢病毒包裝載體組成。而慢病毒包裝質(zhì)??商峁┧械霓D(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒,需要利用表達(dá)載體和包裝質(zhì)粒同時(shí)共轉(zhuǎn)染細(xì)胞,在細(xì)胞中進(jìn)行病毒的包裝,包裝好的假病毒顆粒分泌到細(xì)胞外的培養(yǎng)基中,離心取得上清液后,可以直接用于宿主細(xì)胞的感ran。慢病毒包裝系統(tǒng)一般都是三質(zhì)?;蛩馁|(zhì)粒包裝系統(tǒng)。其中四質(zhì)粒系統(tǒng)比三質(zhì)粒系統(tǒng)在生物安全性上更好一些,所以應(yīng)用較多。使用ELISA讀數(shù)器對(duì)溶解的甲臜產(chǎn)物進(jìn)行分光光度計(jì)量化。
其局限性:① ELISA數(shù)據(jù)不能提供單個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生因子的能力和頻率;②因受刺激細(xì)胞群的細(xì)胞因子產(chǎn)生是短暫的,并且不同細(xì)胞因子基因的表達(dá)動(dòng)力學(xué)可以變化,故可能需要在幾個(gè)時(shí)間點(diǎn)收集測(cè)試樣品以更好地表征實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或培養(yǎng)細(xì)胞群的細(xì)胞因子產(chǎn)生。③在任何一個(gè)時(shí)間點(diǎn)測(cè)量的細(xì)胞因子蛋白濃度可能反映細(xì)胞因子分泌,細(xì)胞因子攝取的并發(fā)過程。通過細(xì)胞和細(xì)胞因子蛋白降解。由于這些過程,測(cè)量的細(xì)胞因子蛋白水平可能xian zhu低估細(xì)胞的實(shí)際細(xì)胞因子產(chǎn)生潛力。④試劑不統(tǒng)一,標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一,故定量不準(zhǔn)確等。驗(yàn)證miRNA對(duì)靶基因的調(diào)控是否真正的存在,*常用的方法就是熒光素酶報(bào)告基因。埃博拉試劑盒
MTT法又稱MTT比色法,是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法??偪寡趸芰z測(cè)試劑盒
微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(MicrosatelliteInstability,MSI),是指由于在DNA復(fù)制時(shí)插入或缺失突變引起的微衛(wèi)星(Microsatellite,MS)序列長(zhǎng)度改變的現(xiàn)象,常由錯(cuò)配修復(fù)功能(Mismatchrepair,MMR)缺陷引起。MS序列,是一些短而重復(fù)的DNA序列,一般由1~6個(gè)核苷酸組成,串聯(lián)重復(fù)排列,常見類型為雙堿基CA/GA/GT或單堿基A/T等。MS序列可以位于基因的重要非編碼區(qū),也可以位于基因的編碼區(qū),多態(tài)性分布于整個(gè)基因組,個(gè)體差異大。MSI現(xiàn)象于1993年被Jacobs等人在結(jié)直腸ai中*先發(fā)現(xiàn)。隨著針對(duì)MSI的研究深入,發(fā)現(xiàn)MSI現(xiàn)象不止存在于結(jié)直腸ai,在子宮內(nèi)膜ai、胃ai、小腸腺ai、胰腺ai、肝膽**、卵巢ai、宮頸ai、乳腺ai等實(shí)體瘤中均有發(fā)生??偪寡趸芰z測(cè)試劑盒
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1、原代細(xì)胞:ScienCell(中國(guó)區(qū)正規(guī)一級(jí)代理)人源和動(dòng)物源各種原代細(xì)胞。
2、培養(yǎng)基:原代細(xì)胞**低血清、無血清、無異源蛋白無動(dòng)物成分培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞培養(yǎng)試劑:胎牛血清、原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞生長(zhǎng)因子、ELISA試劑盒、定量PCR芯片試劑盒、DNA/RNA及細(xì)胞裂解物等。
4、細(xì)胞系(株):種類豐富(1000余種),已通過STR鑒定;提供細(xì)胞株完全培養(yǎng)基。
5、自研產(chǎn)品:支原體檢測(cè)/qing除試劑盒、端粒酶檢測(cè)試劑盒、人源/動(dòng)物源ELISA試劑盒等系列產(chǎn)品。
6、技術(shù)服務(wù):綠/紅色熒光蛋白標(biāo)記、熒光素酶標(biāo)記、慢bing毒介導(dǎo)基因沉默或過表達(dá)及穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建,細(xì)菌基因敲除、細(xì)胞基因敲除、小鼠基因敲除、血管生成功能學(xué)實(shí)驗(yàn)。