Recombinant Cynomolgus IL-2R beta/CD122 Protein

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2024-07-17

pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是一種經(jīng)過(guò)改造的高活性Tn5轉(zhuǎn)座酶,與ProteinA融合,形成一種新型融合酶,應(yīng)用于CUT&Tag技術(shù)中,用于研究蛋白質(zhì)與基因組DNA的相互作用。這種融合酶具備以下特點(diǎn):1.**高活性**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是超高活性的突變形式,體外轉(zhuǎn)座效率比野生型高1000倍。2.**ProteinA融合**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的N端結(jié)構(gòu)域?yàn)镻roteinA的一部分,可以與免疫球蛋白的Fc區(qū)相互作用,特別是與大多數(shù)哺乳動(dòng)物的IgG結(jié)合。3.**Tn5轉(zhuǎn)座酶活性**:C端結(jié)構(gòu)域?yàn)門(mén)n5轉(zhuǎn)座酶,能夠特異性識(shí)別轉(zhuǎn)座子兩端反向重復(fù)的ME序列(MosaicEnd),并在形成轉(zhuǎn)座復(fù)合體后隨機(jī)插入靶DNA中。4.**應(yīng)用廣**:適用于CUT&Tag技術(shù)、高通量測(cè)序建庫(kù)、ATAC-seq等,特別適用于早期胚胎發(fā)育、干細(xì)胞、以及表觀遺傳學(xué)等研究領(lǐng)域。5.**操作簡(jiǎn)便**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的使用簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)步驟,可以在一步反應(yīng)中實(shí)現(xiàn)DNA片段化和接頭連接,從細(xì)胞到二代測(cè)序文庫(kù)的轉(zhuǎn)化過(guò)程需9小時(shí)。6.**低細(xì)胞投入量**:CUT&Tag技術(shù)允許從低至60個(gè)細(xì)胞的樣本中獲得結(jié)果,甚至可以應(yīng)用于單細(xì)胞水平的研究。7.**高質(zhì)量結(jié)果**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的使用可以保證DNA片段化,同時(shí)獲得的蛋白純度高、核酸殘留低??缒さ鞍椎目缒^(qū)域的相互作用是連接膜外環(huán)境與細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的重要渠道。Recombinant Cynomolgus IL-2R beta/CD122 Protein,His Tag

Recombinant Cynomolgus IL-2R beta/CD122 Protein,His Tag,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

5'DNA腺苷?;噭┖械膯尾椒磻?yīng)是一種高效的酶促反應(yīng),用于在DNA分子的5'端添加一個(gè)腺苷酸(AMP)基團(tuán)。這個(gè)過(guò)程通常涉及以下步驟:1.**準(zhǔn)備反應(yīng)混合物**:-根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū),將所需的5'磷酸化的單鏈DNA(ssDNA或pDNA)、MthRNA連接酶(或其他腺苷?;福TP和相應(yīng)的緩沖液按比例混合。2.**孵育反應(yīng)**:-將混合好的反應(yīng)體系在指定的溫度(通常是65℃)下孵育一定的時(shí)間,以允許酶將ATP中的AMP部分轉(zhuǎn)移到DNA的5'端。3.**酶失活**:-反應(yīng)完成后,通常在85℃孵育5分鐘以失活腺苷?;?,這一步是為了防止后續(xù)的去腺苷?;F(xiàn)象,確保反應(yīng)的穩(wěn)定性。4.**產(chǎn)物收集**:-由于轉(zhuǎn)化效率高,通常不需要進(jìn)行凝膠純化步驟??梢酝ㄟ^(guò)乙醇沉淀等方法收集腺苷?;蟮腄NA產(chǎn)物。5.**產(chǎn)物應(yīng)用**:-收集的腺苷?;疍NA可以直接用于后續(xù)的克隆、測(cè)序、連接或其他分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。6.**注意事項(xiàng)**:-確保所有操作在無(wú)RNA酶和無(wú)DNA酶的環(huán)境中進(jìn)行,以避免污染。-使用時(shí)需注意反應(yīng)體系的準(zhǔn)確性,確保底物、酶和ATP的比例適當(dāng)。單步反應(yīng)的優(yōu)勢(shì)在于簡(jiǎn)化了操作流程,減少了樣品處理的復(fù)雜性,并且由于高轉(zhuǎn)化效率,避免了耗時(shí)的純化步驟,從而節(jié)省了時(shí)間和成本。Recombinant Cynomolgus IL-2R beta/CD122 Protein,His Tag跨膜蛋白的表達(dá)與制備需要采用合適的表達(dá)載體、宿主細(xì)胞、培養(yǎng)條件和純化工藝等方法,優(yōu)化表達(dá)和純化過(guò)程。

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1st Strand cDNA Synthesis Kit(RNase H-)的逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程是將RNA模板轉(zhuǎn)換成cDNA的過(guò)程。這個(gè)過(guò)程通常包括以下幾個(gè)步驟:模板RNA的準(zhǔn)備:確保RNA模板的質(zhì)量和純度,可能需要使用DNase I來(lái)去除RNA樣品中的DNA污染。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系的配制:根據(jù)試劑盒的說(shuō)明,將RNA模板、引物(如Oligo(dT)、隨機(jī)六聚體或基因特異性引物)、dNTPs、逆轉(zhuǎn)錄酶和緩沖液等組分混合在一起。逆轉(zhuǎn)錄酶的啟用:如果需要,可能要將反應(yīng)體系預(yù)熱到一定溫度以達(dá)到逆轉(zhuǎn)錄酶。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng):在適宜的條件下,逆轉(zhuǎn)錄酶會(huì)根據(jù)RNA模板合成一條互補(bǔ)的DNA鏈。這個(gè)過(guò)程通常在一定的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行,以保證酶的活性和反應(yīng)的效率。反應(yīng)的終止:逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)完成后,通常通過(guò)加熱到較高溫度來(lái)終止反應(yīng),以防止cDNA的進(jìn)一步合成。產(chǎn)物的純化:合成的cDNA可能需要通過(guò)某些方法(如柱層析或沉淀)進(jìn)行純化,以去除未反應(yīng)的dNTPs、RNA模板和酶等。cDNA的檢測(cè)和應(yīng)用:合成的cDNA可以用于后續(xù)的PCR、qPCR、克隆、測(cè)序等實(shí)驗(yàn)。

dNTPMix(脫氧核苷酸三磷酸混合溶液)的穩(wěn)定性是進(jìn)行PCR和其他DNA合成實(shí)驗(yàn)時(shí)的重要因素。以下是一些關(guān)于dNTPMix穩(wěn)定性的關(guān)鍵點(diǎn):1.**儲(chǔ)存條件**:dNTPMix應(yīng)儲(chǔ)存在-20°C的條件下,以保持其穩(wěn)定性和活性。2.**避免反復(fù)凍融**:dNTPMix應(yīng)避免多次凍融,因?yàn)檫@可能會(huì)影響其穩(wěn)定性。3.**使用頻率**:如果使用頻率較高,使用后應(yīng)以-20°C儲(chǔ)存。4.**長(zhǎng)期儲(chǔ)存**:對(duì)于長(zhǎng)期儲(chǔ)存或使用頻率較低的情況,建議將dNTPMix儲(chǔ)存在-70°C以保持好的狀態(tài)。5.**質(zhì)量控制**:dNTPMix應(yīng)不含DNase和RNase,以避免DNA或RNA的降解。6.**純度**:dNTPMix的純度通?!?9%(HPLC檢測(cè)),確保了其在實(shí)驗(yàn)中的可靠性。7.**pH調(diào)節(jié)**:dNTPMix通常用超純水配制,并通過(guò)高純度NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至約7.0,以保持其穩(wěn)定性。8.**有效期**:在適當(dāng)?shù)膬?chǔ)存條件下,dNTPMix的有效期通常為2年或更長(zhǎng)時(shí)間。9.**使用注意事項(xiàng)**:使用dNTPMix時(shí),應(yīng)穿戴適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)室防護(hù)裝備,如實(shí)驗(yàn)服和一次性手套,以確保操作安全。酵母重組表達(dá)N-糖苷酶F(PNGase F)是一種通過(guò)酵母重組表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)的酶。

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磁珠法質(zhì)粒小量抽提試劑盒是一種利用磁性納米分離技術(shù)和細(xì)菌細(xì)胞的SDS堿裂解法從菌體中提取高質(zhì)量質(zhì)粒DNA的實(shí)驗(yàn)工具。以下是一些關(guān)于磁珠法質(zhì)粒小量抽提試劑盒的關(guān)鍵信息:1.**操作簡(jiǎn)便性**:-操作快速簡(jiǎn)單,可以在60分鐘內(nèi)完成96個(gè)不同樣品的提取,實(shí)現(xiàn)質(zhì)粒提取的高通量化和自動(dòng)化。2.**高純度和高產(chǎn)量**:-抽提得到的質(zhì)粒純度高,OD260/OD280比值一般為1.8~1.9之間,OD260/OD230比值大于2.0,可以直接用于轉(zhuǎn)化、DNA測(cè)序、PCR和酶切等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。3.**試劑盒組件**:-包含BufferMP1、BufferMP2、BufferMP3、PureMagBeads、BufferMPB、TEBuffer(pH8.0)、RNaseA等組分。4.**應(yīng)用范圍**:-適用于從大腸桿菌中抽提小量質(zhì)粒,所得質(zhì)??芍苯佑糜诩?xì)胞轉(zhuǎn)染、DNA測(cè)序、PCR等實(shí)驗(yàn)。5.**效率和純度**:-與同類(lèi)產(chǎn)品相比,提取效率更高,獲得質(zhì)粒的純度更高;與柱式法相比,可減少離心次數(shù),獲得完整性更好的質(zhì)粒。6.**注意事項(xiàng)**:-例如,SgMagBeads需要充分洗滌和干燥,以保證無(wú)乙醇?xì)埩?,并且在吸取上清時(shí)避免吸入SgMagBeads。7.**保存條件**:-室溫保存,有效期一年。磁珠長(zhǎng)期不使用時(shí),可以4℃保存以延長(zhǎng)保存時(shí)間。

在蛋白質(zhì)的晶體學(xué)研究中,去除糖鏈可以幫助獲得去糖基化的蛋白質(zhì),這有助于更清晰地解析蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)。Cre重組酶

通過(guò)使用PNGase F去除糖蛋白上的糖鏈,可以確定蛋白質(zhì)是否發(fā)生糖基化,以及糖基化位點(diǎn)。Recombinant Cynomolgus IL-2R beta/CD122 Protein,His Tag

dITP(脫氧肌苷三磷酸)在PCR(聚合酶鏈反應(yīng))擴(kuò)增中的應(yīng)用是特定和有限的。以下是dITP在PCR擴(kuò)增中的一些關(guān)鍵點(diǎn):1.**PCR擴(kuò)增中的使用**:dITP可以在某些類(lèi)型的PCR中替代部分dGTP,特別是在使用某些特殊的DNA聚合酶時(shí),例如那些不具有校正(proofreading)功能的酶。2.**替代比例**:在PCR中,dITP通常不能完全替代dGTP,因?yàn)檫@樣做可能會(huì)抑制PCR擴(kuò)增反應(yīng)。通常推薦在PCR反應(yīng)中使用10%的dITP來(lái)代替dGTP。3.**特殊DNA聚合酶**:某些高保真DNA聚合酶,如碧云天生產(chǎn)的Q6U?高保真DNA聚合酶,可以與dITP一起使用,以提高PCR擴(kuò)增的特異性和效率。4.**dNTP/dITP混合物**:在一些PCR應(yīng)用中,會(huì)使用dNTP/dITP混合物,其中包含2.5mM每種dNTP加上0.25mM的dITP,以?xún)?yōu)化擴(kuò)增條件。5.**PCR反應(yīng)條件**:dITP的使用可能需要優(yōu)化PCR反應(yīng)條件,包括退火溫度、Mg2+濃度和循環(huán)次數(shù)。6.**穩(wěn)定性和儲(chǔ)存**:dITP溶液應(yīng)儲(chǔ)存在-20°C或更低的溫度下,以保持其穩(wěn)定性。使用時(shí)應(yīng)避免多次凍融,以防止降解。7.**安全性和專(zhuān)業(yè)性**:dITP和其他PCR組分應(yīng)由專(zhuān)業(yè)人員用于科研目的,不應(yīng)在臨床診斷中使用。Recombinant Cynomolgus IL-2R beta/CD122 Protein,His Tag