寵物PCR技術(shù)在動物疫病檢測的應(yīng)用

說PCR儀(尤其是實時熒光PCR儀)是動物診斷工具的中流砥柱毫不為過。然而，即時、快速和準(zhǔn)確的檢測是廣大獸醫(yī)站和養(yǎng)殖場對檢測儀器更高的訴求。面對傳染性疾病，用戶對便攜、易操作、準(zhǔn)確性高、成本相對低廉的檢測設(shè)備需求更為迫切。事實上，以微流控芯片作為耗材，搭配后端定量PCR的檢測在臨床檢測領(lǐng)域已有成型產(chǎn)品——即巧亦捷全自動薄膜微流控快速核酸檢測一體機。它實現(xiàn)了從核酸提取、PCR擴增、熒光檢測全流程自動化芯片內(nèi)完成，樣本進，結(jié)果出，檢測時間短，全程無需專業(yè)技術(shù)人員參與，可實現(xiàn)基于病癥的多項目聯(lián)檢，特別適合寵物醫(yī)院、獸醫(yī)站、養(yǎng)殖場等現(xiàn)場快檢應(yīng)用場景。無論是豬瘟、藍(lán)耳、牛鼻支、牛腹瀉等畜禽類傳染性疾病都可利用巧亦捷核酸一體機進行準(zhǔn)確診斷。寵物PCR技術(shù)在動物疫病檢測的應(yīng)用

無論是由病毒、細(xì)菌，還是原蟲、寄生蟲等引起的犬貓傳染性疾病都可利用巧亦捷核酸一體機進行診斷。即使存在于患犬或患貓體內(nèi)極少量的病原微生物，巧亦捷核酸一體機采用的PCR技術(shù)也能對病原微生物進行上百萬倍的復(fù)制，從而達(dá)到可以被檢出的濃度，因此巧亦捷核酸一體機能對犬貓傳染病進行準(zhǔn)確、高效的診。例如貓鼻氣管炎是由貓皰疹病毒引起的一類貓上呼吸道疾病，當(dāng)貓傳染皰疹病毒后，會表現(xiàn)出一系列的上呼吸道癥狀，但臨床尚未有成熟的快速檢測方法，用巧亦捷核酸一體機則可以快速準(zhǔn)確的得出結(jié)果。江蘇PCR熒光檢測傳染病診斷也類似于刑偵，就是在患者的樣本中查找引起癥狀的元兇——病原微生物。

巧亦捷核酸檢測一體機能“穩(wěn)、準(zhǔn)、快”的檢測出禽病。以犬瘟為例，CDV經(jīng)由鼻、咽和上呼吸道侵入機體后首先在其附近的淋巴結(jié)和扁挑體中增殖，動物表現(xiàn)為ZUI初的體溫升高和白細(xì)胞減少(主要是淋巴細(xì)胞減少)。傳染第、一周會出現(xiàn)病毒血癥，通過血液循環(huán)，CDV散布到全身的淋巴器1官、骨髓和上皮結(jié)構(gòu)的固有膜，身體的所有分泌物中開始向外排毒。因此在病毒傳染初期是無法在眼鼻分泌物中采集到病毒的，即便有少量病毒存在，膠體金試紙板也很難檢測出正確的結(jié)果。這是由于膠體金試紙板上包被的抗體需要和特異抗原結(jié)合后再和預(yù)先包被的二抗結(jié)合才能顯示結(jié)果，這其中需要的抗原（病毒）量較多。而PCR檢測是將抗原進行擴增，只要存在抗原就可以通過特異性引物進行擴增，產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳，可見到預(yù)期大小的DNA條帶出現(xiàn)，從而對病原體的基因組片段作出鑒定。因此，我們更推薦獸醫(yī)師們使用巧亦捷核酸檢測一體機。

巧亦捷核酸檢測一體機有以下幾點優(yōu)勢：1）、靈敏度高，顯1著縮短窗口期，解決了潛伏期檢測不出的問題。由于PCR的檢測域遠(yuǎn)比測試紙廣，在機體帶毒的早期階段（潛伏期），雖然病毒快速繁殖，但是測試卡卻無法檢出，巧亦捷核酸一體機就不存在潛伏期檢測不出的問題；2）、特異性好:巧亦捷使用熒光探針技術(shù)，幾乎沒有方法學(xué)的假陽性；可直接揭示病原體的存在；3）、檢測所需樣本量少：只要少量的血液（0.2cc），少量的口鼻分泌物，就可以做出多個疾病項目；4）、用于體檢篩查：特別是體弱或者老年動物，定期的體檢篩查顯得格外的重要，使用巧亦捷核酸一體機可協(xié)助醫(yī)師早期發(fā)現(xiàn)疾病，把疾病消滅在早期階段，延長寵物的壽命，從而提高從寵物福利；5）、用于鑒別診斷：當(dāng)臨床上出現(xiàn)類似癥狀的疾病時，核酸一體機可協(xié)助醫(yī)師做出準(zhǔn)確的診斷，提高臨床的診斷率和治、愈率。無論是由病毒、細(xì)菌，還是原蟲、寄生蟲等引起的犬貓傳染性疾病都可利用巧亦捷核酸一體機進行診斷。

巧亦捷核酸一體機采用的TaqMan探針法介紹：TaqMan探針法是具有高度特異性的定量PCR技術(shù)。它的工作原理是在PCR反應(yīng)體系中存在一對PCR引物和一條探針，探針的5′端標(biāo)記有報告基團，3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團，探針只與模板特異結(jié)合，其結(jié)合位點在兩條引物之間。當(dāng)探針完整的時候，報告基團的熒光能量被淬滅基團吸收，所以儀器搜集不到信號，隨著反應(yīng)的進展，Taq酶遇到探針，利用3′→5′外切核酸酶的活性把探針切斷，導(dǎo)致報告基團的熒光能量不能被淬滅基團吸收，產(chǎn)生了熒光信號，因此信號的強度就代、表了模板DNA的拷貝數(shù)。巧亦捷核算檢測一體機從樣本處理開始，所有檢測項目可在30-60分鐘完成，自動生成報告，檢測效率極大提高。寵物PCR技術(shù)在動物疫病檢測的應(yīng)用

巧亦捷以薄膜微流控技術(shù)為依托，實現(xiàn)分子診斷在臨床應(yīng)用端的場景邊界的拓展創(chuàng)新。寵物PCR技術(shù)在動物疫病檢測的應(yīng)用

巧亦捷核酸一體機采用的探針法熒光PCR與常規(guī)PCR的不同之處在于：在上、下游引物外還加入了具有序列特異性的探針（探針本身具有熒光標(biāo)記），該探針根據(jù)需要擴增的靶序列設(shè)計因此只能與待檢測序列結(jié)合，與染料法相比提高了實驗的特異性。目前市場上的探針主要種類有：TaqMan、MolecularBeacon、Scorpions、Hybirdization等，其中以TaqMan探針應(yīng)用寬泛。TaqMan探針的結(jié)構(gòu)：長度與普通PCR引物類似，大約20bp左右。在5’與3’端各標(biāo)記有一個熒光基團，5’的熒光基團稱為報告基團（Report），3’的熒光基團稱為淬滅基團（Quencher）。TaqMan探針的性能：在探針結(jié)構(gòu)完整的情況下用特定的波長激發(fā)報告基團，由于報告基團與淬滅基團的空間位置很近，因此報告基團能夠通過FRET（FluorescenceResonanceEnergyTransfer）將接受的能量轉(zhuǎn)移到淬滅基團，使后者以發(fā)射熒光或熱量的方式釋放能量，而報告基團并不發(fā)射特定波長的熒光信號。寵物PCR技術(shù)在動物疫病檢測的應(yīng)用