在解凍的ELAREMPrime血小板裂解液中可能會形成不溶性顆粒。顆粒形成不會影響細胞培養(yǎng)性能。如果完全細胞培養(yǎng)基中出現(xiàn)凝結(jié)或不溶性顆粒,建議在ELAREMPrime血小板裂解液在基礎培養(yǎng)基中稀釋后使用0.22μm過濾器過濾完全培養(yǎng)基。過濾不會影響細胞生長性能(經(jīng)過MSC測試)。但是,不建議對100%濃縮的ELAREMPrime血小板裂解液進行過濾。避免多次凍融循環(huán)ELAREMPrime血小板裂解液,可以很大限度地減少微粒的形成。無菌性ELAREMPrime血小板裂解液經(jīng)過無菌處理。微生物培養(yǎng)測試為陰性。質(zhì)量控制測試在經(jīng)過認證的測試實驗室進行。GMP等級的血小板裂解液不含動物源成分的。灝洋血小板裂解液添加肝素的目的
細胞zhiliao的生產(chǎn)是一項費時又昂貴的工程。優(yōu)化生產(chǎn)工藝通常會涉及優(yōu)化培養(yǎng)參數(shù)去減少時間、降低成本,同時提供呈現(xiàn)預期療效的表型。細胞增長所需的培養(yǎng)基補充劑也是整個細胞生產(chǎn)工藝中的一個較關(guān)鍵的因素。胎牛血清(FBS)一直以來被作為是細胞培養(yǎng)的常用補充劑,但因涉及倫理和安全問題,如今從加工過的血液中提取的人源培養(yǎng)基補充劑已經(jīng)得到越來越多的使用。血小板因其在血栓形成中的作用而聞名,很近,血小板被認為是傷口部位再生過程的關(guān)鍵介質(zhì)。血小板裂解過程中釋放的生長因子和細胞因子可調(diào)節(jié)局部免疫應答,并啟動局部組織的加速恢復(圖1)??紤]到血小板在人類生物學中這些作用,也就不難理解為什么處理過的血小板裂解液能夠給細胞培養(yǎng)基提供可靠的促生長特性了。達科為血小板裂解液肝素怎么加用血液里的血小板濃縮物反復冷凍/解凍和超聲處理可制備成人血小板裂解液。
間充質(zhì)間質(zhì)細胞(MSCs)體外擴增的培養(yǎng)基一般添加胎牛血清FBS,但是考慮到異種ganran及免疫反應的風險,監(jiān)管機構(gòu)并不鼓勵使用。人血小板裂解液除了不存在異種免疫反應或牛病原體ganran的風險,有助于增強間充質(zhì)干細胞的擴增,也相對容易地根據(jù)良好的生產(chǎn)規(guī)范程序生產(chǎn),并已用于臨床應用,因此現(xiàn)如很多資料顯示血小板裂解液已被證明是擴增MSCs一種非常有效的FBS替代方法(參考文獻1)。血小板裂解液由血漿組成,含有纖維蛋白原和凝血因子,對于一般細胞培養(yǎng)中涉及的含鈣培養(yǎng)基來說通常需要加入抗凝劑(常用肝素、Rivaroxaban利伐沙班、argatroban阿加曲班等)來防止凝膠形成,其中肝素很為常用。
血小板中含有很多不同的細胞生長因子,包括PDGF,VEGF,EGF等,實踐證明,血小板分泌的細胞生長因子能夠?qū)Χ喾N細胞起到支持生長的作用,可以完全替代胎牛血清(FBS)甚至于在支持一些細胞培養(yǎng)的效果上優(yōu)于FBS。本產(chǎn)品是將多人份濃縮血小板混合后裂解而成,產(chǎn)品均一性好,經(jīng)過了嚴格安全性有效性質(zhì)量檢控。人血小板裂解液能夠支持包括間充質(zhì)干細胞成骨分化,成脂分化,造血干細胞以及誘導性多能干細胞的生長等。是這些細胞公認的動物源血清替代品。國產(chǎn)的血小板裂解液好用嗎?
本發(fā)明涉及細胞生物學領(lǐng)域,特別涉及一種血小板裂解液的制備方法及其應用,用于替代動物來源的血清,為間充質(zhì)干細胞擴增和生產(chǎn)提供的營養(yǎng)。該制備方法包括:將血小板在20~24℃振蕩保存1~5d,采用反復凍融法和超聲法進行處理,離心,收集上清液,去除纖維蛋白,獲得血小板裂解液.本發(fā)明提供的血小板裂解液的制備方法可明顯提高血小板裂解液中細胞因子含量,且可進行細胞因子的定量平衡,有利于減少產(chǎn)品批間的差異,可達到穩(wěn)定的促進人源性細胞生長的作用。用血液里的血小板濃縮物反復冷凍,解凍和超聲處理可制備成人血小板裂解液。Elitecell血小板裂解液的組成
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Sextonh的PL血小板裂解液產(chǎn)品接收時處于干冰運輸?shù)睦鋬鰻顟B(tài)。收到hPL產(chǎn)品后,建議客戶立即將產(chǎn)品儲存在-20°C的環(huán)境中。Sexton有數(shù)據(jù)支持運輸期間短時間的干冰保存對產(chǎn)品性能(包括pH值、滲透壓、總蛋白和細胞生長)沒有顯著影響。SextonhPL產(chǎn)品的解凍應按照Sexton產(chǎn)品說明文件中的建議使用37°C水浴進行。Sexton不建議使用4°C冰箱或室溫解凍方法,因為這些做法尚未經(jīng)過測試或作為任何內(nèi)部驗證的一部分。已知使用冰箱或室溫解凍會導致更高水平的纖維蛋白/纖維蛋白原碎片,并可能導致產(chǎn)品性能下降。37°C水浴是Sexton用于所有批次放行測試的內(nèi)部解凍方法,也是與SextonhPL產(chǎn)品相關(guān)的所有驗證的解凍方法。灝洋血小板裂解液添加肝素的目的
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