In vivoPEI轉染試劑常見問題

細胞轉染實驗是生物醫(yī)學實驗室中常規(guī)的研究手段，目的是把外源基因、蛋白或者小分子導入到靶細胞內。目前主要有三種主流方法：生物轉染，物理轉染和化學轉染。其中生物轉染主要是利用病毒等微生物作為基因導入載體，以慢病毒、腺病毒和腺相關病毒等常見，其侵染效率可以達到90%以上，但常因安全性等問題，很多實驗室對其敬而遠之。物理轉染主要包括顯微注射、電穿孔和基因，無論哪一種都需要特定的設備，且一分錢一分貨，性能好的價格也都很性感。PEI轉染試劑不含動物源成分。In vivoPEI轉染試劑常見問題

注意事項質粒質量：請務必使用高質量轉染級無內質粒（推薦使用QIAGEN或者MN公司去內質粒提取試劑盒）。通過260nm光吸收測定DNA濃度，260nm/280nm比值確定DNA純度（比值應該在1.8~2.0的范圍之內）。如有可能，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質粒的完整性。細胞條件：使用適當保存和經常傳代的健康細胞。確保培養(yǎng)基沒有被細菌、或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞，請在轉染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細胞。PolysciencesPEI轉染試劑中國代理權PEI轉染試劑用什么溶劑配制？

穩(wěn)定轉染方法1.接種細胞：轉染前，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。調整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比，每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉染時，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復合物。轉染1.5h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。

穩(wěn)定轉染方法1.接種細胞：轉染前一晚，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。調整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比，每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉染時，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復合物。轉染1.5h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。做PEI轉染時出現(xiàn)沉淀什么原因？

PEI在于可以應用于體內試驗。當初試驗經費很有限，被逼無奈只能放棄脂質體2000，選擇PEI，以至于相當長的時間內，轉染試驗都不順利。下面是幾點關于PEI轉染的注意要點：1. PEI的使用量可以參照脂質體2000的說明書，所用質粒盡量去內2. 轉染時，一定要把PEI+DMEM加入到質粒+DMEM中，順序不可錯，輕微混勻，靜止20 min3. 轉染后4小時，一定要換液！換含有FBS的完全培養(yǎng)液！因為PEI對細胞毒性太大4. 如果后續(xù)試驗涉及到穩(wěn)定篩選，建議把血清濃度適當提高。線性的和分支的PEI轉染試劑哪個好？SigmaPEI轉染試劑優(yōu)化要素

PEI轉染試劑的穩(wěn)定性如何？In vivoPEI轉染試劑常見問題

接種細胞：轉染前，用膠原酶消化細胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。調整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，總體積如表1所示，每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。準備DNA-PEI復合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如Falcon5mL/14mL離心管。轉染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉染時，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復合物。轉染3h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。孵育細胞和分析結果：在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉染后快7h即可檢測到轉入基因的表達。請自行確定檢測時間。In vivoPEI轉染試劑常見問題

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