MSCs在添加10%血小板裂解液和不同濃度肝素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)7天,隨后使用MTT法評估增殖。脂肪組織源性間充質干細胞(AT-MSC)和骨髓源性間充質干細胞(BM-MSC)培養(yǎng)的過程中,如果使用的UFH濃度低于0.61IU/mL或者使用Enoxaparin(LMWH)濃度低于0.024mg/mL(2.4IU/mL)時培養(yǎng)液均呈現(xiàn)凝膠狀態(tài)(灰色背景),而肝素濃度過高則對細胞增殖的負面影響明顯且以劑量依賴的方式提高。備注肝素濃度單位換算:肝素濃度國際單位(IU)衡量,1IU國際單位是指在規(guī)定的條件下,將1ml全血延長凝血3分鐘所需的量:1mg大約相當于100IU的肝素。 血小板裂解液是由富含血小板的血漿純化萃取而成,包含很多不同的細胞生長因子.賽多利斯血小板裂解液等級
血小板中含有很多不同的細胞生長因子,包括PDGF,VEGF,EGF等,實踐證明,血小板分泌的細胞生長因子能夠對多種細胞起到支持生長的作用,可以完全替代胎牛血清(FBS)甚至于在支持一些細胞培養(yǎng)的效果上優(yōu)于FBS。本產品是將多人份濃縮血小板混合后裂解而成,產品均一性好,經過了嚴格安全性有效性質量檢控。人血小板裂解液能夠支持包括間充質干細胞成骨分化,成脂分化,造血干細胞以及誘導性多能干細胞的生長等。是這些細胞公認的動物源血清替代品。 GMP等級血小板裂解液的主要成分用血液里的血小板濃縮物反復冷凍、解凍和超聲處理可制備成人血小板裂解液。
間充質間質細胞(MSCs)體外擴增的培養(yǎng)基一般添加胎牛血清FBS,但是考慮到異種傳染及免疫反應的風險,監(jiān)管機構并不鼓勵使用。人血小板裂解液除了不存在異種免疫反應或牛病原體傳染的風險,有助于增強間充質干細胞的擴增,也相對容易地根據良好的生產規(guī)范程序生產,并已用于臨床應用,因此現(xiàn)如很多資料顯示血小板裂解液已被證明是擴增MSCs一種非常有效的FBS替代方法(參考文獻1)。 血小板裂解液由血漿組成,含有纖維蛋白原和凝血因子,對于一般細胞培養(yǎng)中涉及的含鈣培養(yǎng)基來說通常需要加入抗凝劑(常用肝素、Rivaroxaban利伐沙班、argatroban阿加曲班等)來防止凝膠形成,其中肝素較為常用。
使用胎牛血清(FBS)和MSC的離體擴增其他動物衍生的已氣餒由監(jiān)管機構,以減少發(fā)送朊病毒和其他動物傳染病的危險,并且避免在所述異種免疫反應主辦。然而,由于缺乏FBS制劑標準化導致細胞培養(yǎng)性能不一致性和FBS生產已經到來,因為動物福利問題很初提出血小板裂解液(PL)作為動物血清的替代物,用于由Doucet等人體外擴增MSC。包含在PL的生物活性分子和生長因子支持的MSC從骨髓(BM)導出的膨脹,臍帶血(UCB),和脂肪組織(AT),與FBS相比顯示出有利的結果。此外,間充質干擴大了與PL-富集介質已被用于zhiliao患有jisu難治性急性移植物抗宿主?。℅VHD)造血干細胞移植后患者和患有幾種骨科疾病的患者,主要是中度至重度的膝關節(jié)骨性關節(jié)炎。 血小板裂解液是由富含血小板的血漿純化萃取而成,包含很多不同的細胞生長因子。
ELAREMPrime人血小板裂解液是面向未來需求的先進的細胞培養(yǎng)解決方案?;谌搜“宓慕洕鷮嵒莸募毎L促進劑可實現(xiàn)從動物血清添加劑到無異種細胞培養(yǎng)條件的簡單轉換。每批ELAREMPrime均由大量血小板單位生產,以比較大限度地減少批次間的差異。ELAREMPrime支持細胞擴增,無需批間測試即可提供一致的試驗結果。ELAREMPrime只供體外實驗和研究使用(RUO),該產品不適合直接用于人類或動物用途。有關安全預防措施,請參閱相應的SDS。推薦用于與FBS相比,ELAREMPrime人血小板裂解液支持間充質干細胞(MSC)的細胞生長性能,而不會丟失表型。非靈長類細胞系的體外繁殖和維持需要根據具體情況進行測試和優(yōu)化。 血小板裂解液中的沉淀在使用前需要過濾掉么?灝洋血小板裂解液的組成
用血液里的血小板濃縮物反復解凍和超聲處理可制備成人血小板裂解液.賽多利斯血小板裂解液等級
在解凍的ELAREMPrime血小板裂解液中可能會形成不溶性顆粒。顆粒形成不會影響細胞培養(yǎng)性能。如果完全細胞培養(yǎng)基中出現(xiàn)凝結或不溶性顆粒,建議在ELAREMPrime血小板裂解液在基礎培養(yǎng)基中稀釋后使用0.22μm過濾器過濾完全培養(yǎng)基。過濾不會影響細胞生長性能(經過MSC測試)。但是,不建議對100%濃縮的ELAREMPrime血小板裂解液進行過濾。避免多次凍融循環(huán)ELAREMPrime血小板裂解液,可以很大限度地減少微粒的形成。無菌性ELAREMPrime血小板裂解液經過無菌處理。微生物培養(yǎng)測試為陰性。質量控制測試在經過認證的測試實驗室進行。 賽多利斯血小板裂解液等級
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