PEI在于可以應(yīng)用于體內(nèi)試驗(yàn)。當(dāng)初試驗(yàn)經(jīng)費(fèi)很有限,被逼無奈只能放棄脂質(zhì)體2000,選擇PEI,以至于相當(dāng)長的時(shí)間內(nèi),轉(zhuǎn)染試驗(yàn)都不順利。下面是幾點(diǎn)關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染的注意要點(diǎn):1.PEI的使用量可以參照脂質(zhì)體2000的說明書,所用質(zhì)粒盡量去內(nèi)2.轉(zhuǎn)染時(shí),一定要把PEI+DMEM加入到質(zhì)粒+DMEM中,順序不可錯(cuò),輕微混勻,靜止20min3.轉(zhuǎn)染后4小時(shí),一定要換液!換含有FBS的完全培養(yǎng)液!因?yàn)镻EI對細(xì)胞毒性太大4.如果后續(xù)試驗(yàn)涉及到穩(wěn)定篩選,建議把血清濃度適當(dāng)提高。PS:事實(shí)證明,PEI是可行的,已經(jīng)做出穩(wěn)定細(xì)胞系了。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)的信息,可咨詢上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司!哪個(gè)品牌的GMP等級的PEI轉(zhuǎn)染試劑比較好?進(jìn)口PEI轉(zhuǎn)染試劑蛋白產(chǎn)量
準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí),請用圓底聚丙烯管,例如Falcon5mL/14mL離心管。轉(zhuǎn)染細(xì)胞:直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí),去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染3h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。更多關(guān)于Polysciences產(chǎn)品,歡迎咨詢上海曼博生物!SigmaPEI轉(zhuǎn)染試劑作用原理PEI轉(zhuǎn)染試劑有沒有毒性?
細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)是生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室中常規(guī)的研究手段,目的是把外源基因、蛋白或者小分子導(dǎo)入到靶細(xì)胞內(nèi)。目前主要有三種主流方法:生物轉(zhuǎn)染,物理轉(zhuǎn)染和化學(xué)轉(zhuǎn)染。其中生物轉(zhuǎn)染主要是利用病毒等微生物作為基因?qū)胼d體,以慢病毒、腺病毒和腺相關(guān)病毒等常見,其侵染效率可以達(dá)到90%以上,但常因安全性等問題,很多實(shí)驗(yàn)室對其敬而遠(yuǎn)之。物理轉(zhuǎn)染主要包括顯微注射、電穿孔和基因,無論哪一種都需要特定的設(shè)備,且一分錢一分貨,性能好的價(jià)格也都很性感。
Polysciences是一家化學(xué)品制造公司,產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于各個(gè)科研領(lǐng)域。公司成立于1961年,起初為電子顯微鏡提供納米級樣本制備方案,幫助科學(xué)家揭示未知領(lǐng)域。上海曼博生物是Polysciences官方授權(quán)du jia代理商,更多關(guān)于轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)問題,歡迎咨詢上海曼博生物!
注意事項(xiàng)質(zhì)粒質(zhì)量:請務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級無內(nèi)質(zhì)粒(推薦使用QIAGEN或者M(jìn)N公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒)。通過260nm光吸收測定DNA濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi))。如有可能,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。細(xì)胞條件:使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞。確保培養(yǎng)基沒有被細(xì)菌、或支原體污染。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞,請?jiān)谵D(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細(xì)胞。使用PEI轉(zhuǎn)染試劑的殘留檢測方法怎么開發(fā)?
對于某些類型的細(xì)胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細(xì)胞,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當(dāng)降低鋪板密度,以確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細(xì)胞,可適當(dāng)降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞,但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。Polysciences 是一家化學(xué)品制造公司,產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于各個(gè)科研領(lǐng)域。公司成立于1961年,起初為電子顯微鏡提供納米級樣本制備方案,幫助科學(xué)家揭示未知領(lǐng)域。PEI轉(zhuǎn)染對復(fù)合物孵化的時(shí)間是有要求的,一般建議5-20分鐘之間。四川PEI轉(zhuǎn)染試劑市場報(bào)價(jià)
PEI轉(zhuǎn)染試劑的工作原理是什么?進(jìn)口PEI轉(zhuǎn)染試劑蛋白產(chǎn)量
抗體藥物研發(fā)客戶提供小眾創(chuàng)新產(chǎn)品,包括從Researchgrade到cGMP等級的無動(dòng)物源培養(yǎng)基質(zhì),轉(zhuǎn)染試劑、病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)試劑、基因編輯工具等產(chǎn)品和定制服務(wù),支持ATMP(AdvanceTherapyMedicinalProducts)藥物研發(fā)從R&D到Clinicaltrial以及后期商業(yè)化的無縫轉(zhuǎn)化;以及提供藥物開發(fā)和探索的抗體文庫定制和商業(yè)授權(quán)靈活的CHO工程細(xì)胞株以支持抗體藥物的商業(yè)化生產(chǎn),以此希望幫助國內(nèi)科研工作者快速地接觸世界范圍內(nèi)的技術(shù),分享研發(fā)工具進(jìn)步帶來的技術(shù)紅利,終為細(xì)胞、基因產(chǎn)業(yè)以及再生醫(yī)學(xué)行業(yè)等乃至整個(gè)生命科學(xué)行業(yè)賦能!更多關(guān)于轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品問題,歡迎咨詢上海曼博生物!進(jìn)口PEI轉(zhuǎn)染試劑蛋白產(chǎn)量
上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司成立于2019-02-15,同時(shí)啟動(dòng)了以PL Bioscienc,Quan-Lab,Polysciences,Sirion Biote,CN-Bio,Dharmacon,Horizon,Pfenex,Visual Prote為主的血小板裂解液,WB自動(dòng)孵育系統(tǒng),微流控器官芯片,藍(lán)牙無線標(biāo)簽機(jī)產(chǎn)業(yè)布局。業(yè)務(wù)涵蓋了血小板裂解液,WB自動(dòng)孵育系統(tǒng),微流控器官芯片,藍(lán)牙無線標(biāo)簽機(jī)等諸多領(lǐng)域,尤其血小板裂解液,WB自動(dòng)孵育系統(tǒng),微流控器官芯片,藍(lán)牙無線標(biāo)簽機(jī)中具有強(qiáng)勁優(yōu)勢,完成了一大批具特色和時(shí)代特征的醫(yī)藥健康項(xiàng)目;同時(shí)在設(shè)計(jì)原創(chuàng)、科技創(chuàng)新、標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范等方面推動(dòng)行業(yè)發(fā)展。同時(shí),企業(yè)針對用戶,在血小板裂解液,WB自動(dòng)孵育系統(tǒng),微流控器官芯片,藍(lán)牙無線標(biāo)簽機(jī)等幾大領(lǐng)域,提供更多、更豐富的醫(yī)藥健康產(chǎn)品,進(jìn)一步為全國更多單位和企業(yè)提供更具針對性的醫(yī)藥健康服務(wù)。公司坐落于自由貿(mào)易試驗(yàn)區(qū)達(dá)爾文路16幢104室,業(yè)務(wù)覆蓋于全國多個(gè)省市和地區(qū)。持續(xù)多年業(yè)務(wù)創(chuàng)收,進(jìn)一步為當(dāng)?shù)亟?jīng)濟(jì)、社會(huì)協(xié)調(diào)發(fā)展做出了貢獻(xiàn)。