PolyplusPEI轉染試劑蛋白產(chǎn)量

來源: 發(fā)布時間:2023-08-05

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對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。血清兼容PEI轉染試劑授權代理商PEI轉染試劑主要成分是什么呢?

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方法:1.細胞分盤:通過胰酶消化收集細胞,用適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養(yǎng)皿上(根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿,使細胞貼壁后所占總面積達到培養(yǎng)皿面積的70-90%)。根據(jù)細胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當細胞貼壁完全后即可開始轉染。轉染前換入2mL預熱的無血清培養(yǎng)基。2.制備PEI-DNA混合物:以60mm組織培養(yǎng)皿用420μL反應總體積為例。準備兩支1.5mL離心管,一管將質(zhì)粒DNA(總量2-8μg為佳)加入240μLHBS中,混勻。另一管中則用HBS將100μM的PEI儲存液稀釋成10μM,充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中,充分混勻后室溫靜置20-30min。將這420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養(yǎng)基中,輕輕搖動平皿混勻,置于含5%~7%CO2的37℃溫箱孵育。注:每次用100μM的PEI儲存液前都需要先將其充分混勻,保證所取的濃度一致。3.培養(yǎng)6-10h后更換為37℃預熱的含有血清的培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng),16h左右可以觀測到報告基因的表達。更多關于PEI轉染試劑相關產(chǎn)品問題,歡迎咨詢上海曼博生物!

Polysciences是一家化學品制造公司,產(chǎn)品廣泛應用于各個科研領域。公司成立于1961年,起初為電子顯微鏡提供納米級樣本制備方案,幫助科學家揭示未知領域。隨后,開拓了在病理(組織研究)應用產(chǎn)品,使組織除了石蠟包埋外,還能夠包埋在塑料塊中;開發(fā)染料和染色劑,以實現(xiàn)更好的樣品觀測方式。與government合作,開發(fā)了用于診斷試劑盒應的聚合物微球。與美國國家cancer中心合作,開發(fā)天然產(chǎn)物分離和純化產(chǎn)品,并用于紫杉醇的初步臨床試驗。繼而開發(fā)出超順磁珠,用于DNA、蛋白質(zhì)和肽的研究。Polysciences的高純度單體和聚合物產(chǎn)品在醫(yī)療器械中有許多應用,并不斷開發(fā)和增強其性能。近期業(yè)務擴展到電子產(chǎn)品,Polysciences的精密微粒子產(chǎn)品拓展了納米技術應用中測量精度。公司秉承為應用而研發(fā),目前已擁有超過3000種產(chǎn)品。PolysciencesInc.致力于提供先進的技術、制造能力和技術支持,幫助客戶實現(xiàn)他們的目標。上海曼博生物是Polysciences官方授權du jia代理商,更多關于轉染試劑相關問題,歡迎咨詢上海曼博生物!上海曼博生物是Polysciences官方授權du jia代理商,更多關于轉染試劑相關問題,歡迎咨詢上海曼博生物!用PEI轉染試劑時出現(xiàn)沉淀什么原因?

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注意事項質(zhì)粒質(zhì)量:請務必使用高質(zhì)量轉染級無內(nèi)質(zhì)粒(推薦使用QIAGEN或者MN公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒)。通過260nm光吸收測定DNA濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應該在1.8~2.0的范圍之內(nèi))。如有可能,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。細胞條件:使用適當保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保培養(yǎng)基沒有被細菌、或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞,請在轉染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細胞。更多關于PEI轉染試劑相關產(chǎn)品問題,歡迎咨詢上海曼博生物!PEI轉染試劑的工作原理是什么?化學合成PEI轉染試劑轉染步驟

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細胞轉染實驗是生物醫(yī)學實驗室中常規(guī)的研究手段,目的是把外源基因、蛋白或者小分子導入到靶細胞內(nèi)。目前主要有三種主流方法:生物轉染,物理轉染和化學轉染。其中生物轉染主要是利用病毒等微生物作為基因?qū)胼d體,以慢病毒、腺病毒和腺相關病毒等常見,其侵染效率可以達到90%以上,但常因安全性等問題,很多實驗室對其敬而遠之。物理轉染主要包括顯微注射、電穿孔和基因,無論哪一種都需要特定的設備,且一分錢一分貨,性能好的價格也都相對較高。更多關于PEI轉染試劑,歡迎咨詢上海曼博生物!PolyplusPEI轉染試劑蛋白產(chǎn)量