In vivoPEI轉染試劑中國代理權

注意事項質(zhì)粒質(zhì)量：請務必使用高質(zhì)量轉染級無內(nèi)質(zhì)粒（推薦使用QIAGEN或者MN公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒）。通過260nm光吸收測定DNA濃度，260nm/280nm比值確定DNA純度（比值應該在1.8~2.0的范圍之內(nèi)）。如有可能，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。細胞條件：使用適當保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保培養(yǎng)基沒有被細菌、或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞，請在轉染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細胞。更多關于PEI轉染試劑相關產(chǎn)品問題，歡迎咨詢上海曼博生物！用PEI轉染試劑時出現(xiàn)沉淀是為什么？In vivoPEI轉染試劑中國代理權

瞬時轉染方法1.接種細胞：轉染前一晚，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管。更多關于PEI轉染試劑相關的產(chǎn)品信息，歡迎咨詢上海曼博生物！福建cGMP級PEI轉染試劑Polysciences PEI轉染試劑中國區(qū)代理是哪家公司？

瞬時轉染方法：1.接種細胞：轉染前一晚，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉染時，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復合物。轉染1.5h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。4.孵育細胞和分析結果：在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉染后5h即可檢測到轉入基因的表達。請自行確定適合檢測時間。

注意事項質(zhì)粒質(zhì)量：請務必使用高質(zhì)量轉染級無內(nèi)質(zhì)粒（推薦使用QIAGEN或者MN公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒）。通過260nm光吸收測定DNA濃度，260nm/280nm比值確定DNA純度（比值應該在1.8~2.0的范圍之內(nèi)）。如有可能，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。細胞條件：使用適當保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保培養(yǎng)基沒有被細菌、或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞，請在轉染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細胞。更多關于轉染試劑相關問題，歡迎咨詢上海曼博生物！用PEI轉染試劑時一般和DNA的比例是多少？

穩(wěn)定轉染方法：

1.接種細胞：轉染前，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。

2.準備DNA-PEI復合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比，每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管。

3.轉染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉染時，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復合物。轉染1.5h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。

4.孵育細胞和分析結果：在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉染后5h即可檢測到轉入基因的表達。

歡迎咨詢PEI產(chǎn)品！ 哪個品牌的PEI轉染試劑不含動物源成分？線性PEI轉染試劑運輸方式

有哪些品牌的PEI轉染試劑？In vivoPEI轉染試劑中國代理權

1、對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞，在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板，可適當降低鋪板密度，以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。

2、對于接觸抑制敏感的細胞，可適當降低鋪板密度。

3、即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI復合物仍能轉染細胞，但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。 In vivoPEI轉染試劑中國代理權