慢病毒構(gòu)建型糖尿病細胞模型廠家技術(shù)指導(dǎo)

Human Cell Design 開發(fā)了創(chuàng)新且安全的人類β細胞系生產(chǎn)方法。首先，將每個轉(zhuǎn)導(dǎo)的人類胎兒胰腺芽移植到 2 或 3 只 SCID 小鼠的腎被膜下，因為該部位是人類胰腺發(fā)育的允許部位。在 6 到 8 個月內(nèi)，所有移植的小鼠都發(fā)生了原發(fā)性胰島素瘤，這導(dǎo)致它們的血糖水平下降。與其他胰腺移植相比，原發(fā)性胰島素瘤是高度血管化的。然后將原發(fā)性胰島素瘤中這些高度血管化的區(qū)域分離，用在大鼠胰島素啟動子控制下表達 hTERT 的慢病毒進行轉(zhuǎn)導(dǎo)，并移植到其他 SCID 小鼠中。這些小鼠在 2 至 3 個月內(nèi)出現(xiàn)低血糖，胰島素陽性細胞大量擴增。這種體內(nèi)擴增有助于維持大量增殖的胰島素細胞，并允許定義允許的培養(yǎng)條件，在這種條件下，可以在體外建立永生化細胞系。Human Cell Design（HCD）開發(fā)了一種用于在人類胎兒組織中使用靶向Zhong Liu產(chǎn)生功能的人類β細胞系。在胰島素啟動子的控制下，用表達 SV40LT 的慢病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)人類胎兒胰腺芽。怎么開展糖尿病研究？慢病毒構(gòu)建型糖尿病細胞模型廠家技術(shù)指導(dǎo)

人源胰島B細胞模型對于與胰島相關(guān)的代謝疾病研究，包括糖尿病，糖尿病炎癥， 針對GLP-1R的Exendin4等類似藥物開發(fā)有重要作用。通過干細胞誘導(dǎo)B細胞產(chǎn)生的胰島B細胞存在純度較低，缺乏成熟胰島B細胞功能等問題。通過捐贈組織的胰腺B細胞提取，存在供應(yīng)量較低，明顯批次效應(yīng)，耗時較長等問題。使用糖尿病動物模型進行研究會比糖尿病細胞模型成本更高昂，周期更長。Human cell design 構(gòu)建了EndoC-BH1,En-doC-BH3, EndoC-βH5, GLTx EndoC-βH5 , HLA-A2 EndoC-βH5等一系列的胰島B細胞模型。即用型功能性B細胞糖尿病細胞模型操作手冊糖尿病細胞模型可用于脂毒性胰島B細胞測試。

糖尿病患者的數(shù)量不斷增長，凸顯了對生理相關(guān)且易于獲得的人類胰腺β細胞模型的需求，這些模型可以加速對疾病機制的理解和新藥的開發(fā)，在糖尿病研究方面具有巨大潛力。EndoC-βH5細胞是EndoC-bH人類胰腺β細胞家族中較新一代的細胞，EndoC-βH5細胞聚集并形成球體，這些球體是大小和形狀均質(zhì)。EndoC-βH5細胞可直接作為冷凍驗證的功能性人類β細胞使用，因此可以隨時使用。EndoC-βH5細胞在迄今為止測試的所有功能測定中均表現(xiàn)良好，且表現(xiàn)出強大的標準化和批次間的再現(xiàn)性，可以進行可靠的數(shù)據(jù)解釋。細胞以劑量依賴性方式響應(yīng)葡萄糖而分泌胰島素，并且腸jiang xue tang素進一步增強葡萄糖刺激的胰島素分泌。

在胰島細胞刺激中，基礎(chǔ)和高D-葡萄糖條件之間的刺激指數(shù)為11.6±1.8。通過應(yīng)用不引起胰島素分泌的L-葡萄糖(20mM)或完全阻斷D-葡萄糖誘導(dǎo)的鉀通道開放劑二氮嗪(100mM)，驗證了胰島素分泌對D-葡萄糖的特異性。胰島素分泌以D-葡萄糖濃度依賴性方式增加，從0mMD-葡萄糖時的68.827.3增加到16.7mMD-葡萄糖時的679.2±39.5ng/h/10⁶細胞。胰島素分泌增加Zui快的是5.5至8mMD-葡萄糖，分別有204.7±51.3和414.9±94.8ng/h/10⁶細胞。Human cell design 構(gòu)建了EndoC-BH1,En-doC-BH3, EndoC-βH5, GLTx EndoC-βH5 , HLA-A2 EndoC-βH5等一系列的胰島B細胞模型。通過多輪次優(yōu)化改良，獲得的功能胰腺B細胞，無限接近天然人源胰島B細胞，其胰島素分泌功能與天然細胞類似，基于PDX1/NKX6.1關(guān)鍵基因驗證的細胞均一性達到90%以上（左圖），在2.8 mM and 11 mM葡萄糖劑量下表現(xiàn)出10倍的胰島素分泌反應(yīng)（右圖），對GLP-1R激動劑， Exendin4刺激產(chǎn)生明細那反饋， 且可實現(xiàn)批量化生成，實現(xiàn)穩(wěn)定供應(yīng)。糖尿病細胞模型EndoC-BH5 細胞在迄今為止測試的所有功能測定中均表現(xiàn)良好。

EndoC-βH5GLTx、EndoC-βH5HLA-A2、EndoC-βH5等細胞可在體外在葡萄糖劑量刺激下產(chǎn)生正常的胰島素分泌反應(yīng)，對GLP-1R/GLP-1等胰島素刺激因子產(chǎn)生正常響應(yīng)，可以響應(yīng)細胞因子刺激，表達HLA-A2等T細胞受體，因此可用于糖尿病炎癥相關(guān)等多種藥物開發(fā)實驗。EndoC-BH5細胞可批量穩(wěn)定生產(chǎn)，因此可以進行基于siRNA的高通量篩選研究中，用于鑒定出潛在的2型糖尿病藥物靶點。Human cell design 構(gòu)建了EndoC-BH1,En-doC-BH3, EndoC-βH5, GLTx EndoC-βH5 , HLA-A2 EndoC-βH5等一系列的胰島B細胞模型。通過多輪次優(yōu)化改良，獲得的功能胰腺B細胞，無限接近天然人源胰島B細胞，其胰島素分泌功能與天然細胞類似，基于PDX1/NKX6.1關(guān)鍵基因驗證的細胞均一性達到90%以上（左圖），在2.8 mM and 11 mM葡萄糖劑量下表現(xiàn)出10倍的胰島素分泌反應(yīng)（右圖），對GLP-1R激動劑， Exendin4刺激產(chǎn)生明細那反饋， 且可實現(xiàn)批量化生成，實現(xiàn)穩(wěn)定供應(yīng)。Huamn cell design(HCD)提供的糖尿病細胞模型經(jīng)過了法國生物醫(yī)學(xué)局批準。山東糖尿病細胞模型法國生物醫(yī)學(xué)局批準

生長因子促進成人B細胞的擴增誘導(dǎo)其體外去分化。慢病毒構(gòu)建型糖尿病細胞模型廠家技術(shù)指導(dǎo)

表達HLA-A2的EndoC-βH5-HLA-A2系是通過每105細胞使用100ngp24衣殼蛋白與pTRIPDU3CMVHLA-A2IRESPURO慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)EndoC-βH5來產(chǎn)生的。在1mg/ml嘌呤霉素存在下將細胞擴增三周以選擇轉(zhuǎn)導(dǎo)的細胞。為了完全成熟，將EndoC-βH5和EndoC-βH5-HLA-A2細胞再培養(yǎng)3周，并用5mM他莫昔芬和0.5mM更昔洛韋處理，以切除永生化基因并選擇切除的細胞。使用胰蛋白酶（25300e054）收集所得細胞，表達EndoC-βH5細胞的修飾HLA-A2引發(fā)同種異體反應(yīng)性T淋巴細胞ji huo，概括了1型糖尿病中涉及的一些自身免疫機制。慢病毒構(gòu)建型糖尿病細胞模型廠家技術(shù)指導(dǎo)