鹽城心血管疾病疾病動物模型建模

    新華社上海4月9日電（記者張建松）利用先進的基因編輯技術(shù)，我國科學家在***神經(jīng)性疾病的基礎(chǔ)研究方面，取得重要進展。***在小鼠模型上，成功恢復長久性視力損傷小鼠的視力，同時還基本消除了帕金森模型小鼠的疾病癥狀。在科技部、國家自然科學基金委、中國科學院、上海市的相關(guān)項目資助下，由中國科學院腦科學與智能技術(shù)***創(chuàng)新中心（神經(jīng)科學研究所）、上海腦科學與類腦研究中心、神經(jīng)科學國家重點實驗室楊輝研究組完成的這項研究，通過基因編輯技術(shù)，成功誘導膠質(zhì)細胞“變身”為神經(jīng)元。這為阿爾茲海默癥、帕金森癥、青光眼等眾多神經(jīng)退行性疾病的***，探索了一個新的途徑。國際**學術(shù)期刊《細胞》8日在線發(fā)表了相關(guān)研究論文。人類的神經(jīng)系統(tǒng)包含成百上千種不同類型的神經(jīng)元。在成熟的神經(jīng)系統(tǒng)中，神經(jīng)元一般不會再生，一旦死亡，就是長久性的。而神經(jīng)元的死亡，則會導致不同的神經(jīng)退行性疾病。在常見的神經(jīng)性疾病中，視神經(jīng)節(jié)細胞死亡導致的長久性失明和多巴胺神經(jīng)元死亡導致的帕金森癥尤為特殊，它們都是由于特殊類型的神經(jīng)元死亡所導致的。如何在成體中讓視神經(jīng)節(jié)細胞和多巴胺神經(jīng)元獲得再生？研究人員對小鼠模型的膠質(zhì)細胞進行了基因編輯。上海東寰提供動物模型構(gòu)建過程中的原始實驗記錄及數(shù)據(jù)圖片。鹽城心血管疾病疾病動物模型建模

1、動物模型名稱：角膜環(huán)鉆致角膜損傷兔模型2、實驗動物種屬：新西蘭兔3、實驗動物性別：雌雄不限4、實驗動物年齡：2~3月齡5、實驗動物體重：1.8~2.5kg6、實驗動物環(huán)境：SPF級。1、實驗方法：角膜環(huán)鉆致兔角膜機械性損傷。耳緣靜脈注射戊巴比妥鈉聯(lián)合肌肉注射速眠新Ⅱ進行兔麻醉。環(huán)鉆前先用2%硼酸溶液沖洗雙眼，再滴0.25%氯霉素眼藥水2滴消毒，以保持結(jié)膜清潔。開瞼，滴2%利多卡因滴眼液2滴行角膜表面麻醉，用已滅菌的6mm角膜環(huán)鉆分別在兔眼角膜上作環(huán)切，并滴入2滴氯霉素眼藥水潤洗，用顯微眼鑷、角膜上皮鏟和精細眼剪小心去掉角膜損傷區(qū)域上皮，術(shù)畢，滴氯霉素眼藥水2滴。2、檢測標準：肉眼或裂隙燈下觀察到角膜有損傷。無錫非酒肝疾病動物模型建模開展小鼠疾病模型初步研究分析小鼠疾病模型研究初步結(jié)果與生物學信息資料等相關(guān)知識間的差距！

1、動物模型名稱：皮膚淺II°及深I(lǐng)I°燙傷大鼠模型2、實驗動物種屬：SD大鼠3、實驗動物性別：雌雄不限4、實驗動物年齡：成年5、實驗動物體重：160-200g6、實驗動物環(huán)境：SPF級 1、實驗方法：熱力致皮膚損傷法。麻醉大鼠，根據(jù)體重腹部備皮，然后固定于實驗臺上。將大鼠移近加熱純凈水的燒杯，將紗布條浸入熱水中，待水溫恒定于99℃時，取出紗布，立即平鋪于待燙部位，于紗布接觸大鼠皮膚后開始計時。致傷3s為淺II°燙傷，致傷10s為深I(lǐng)I°燙傷。2、檢測標準：a.皮膚大體觀察：致傷3s大鼠局部皮膚發(fā)紅、輕微水腫。愈合后毛發(fā)生長良好，有少量紅褐**素沉著，皮膚輕微攣縮，表皮光滑；致傷10s大鼠局部皮膚發(fā)白、水腫。愈合后毛發(fā)生長良好，皮膚瘢痕形成，表面粗糙不平。b.皮膚組織病理學觀察：致傷3s大鼠表皮層次尚清楚，細胞明顯腫脹、變性，層次結(jié)構(gòu)尚清楚，細胞核結(jié)構(gòu)不清；致傷10s大鼠表皮細胞部分脫落，結(jié)構(gòu)不清，明顯變性、壞死，部分細胞已溶解。

    即為本發(fā)明構(gòu)建的一種pirb基因敲入的小鼠動物模型。本發(fā)明所采用第二種技術(shù)方案的特點還在于，步驟1中得到grna1和grna2后分別與trancrrna在25℃孵育10min形成二級結(jié)構(gòu)。步驟3中g(shù)rna1、grna2的濃度均為2～10pmol/ul，cas9蛋白的注射濃度為30～100ng/μl。步驟4中southern雜交采用bamhi和avrii核酸內(nèi)切酶切割f1代雜合子小鼠的dna。本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明提供了pirb基因敲入的小鼠動物模型及其構(gòu)建方法，本發(fā)明的小鼠動物模型對于pirb基因功能的研究和在體驗證提供了良好的基礎(chǔ)。分離自pirb基因敲入小鼠的細胞還可以用于研究pirb發(fā)揮調(diào)節(jié)作用的下游機制。通過pirb敲入動物模型與不同類型cre小鼠的雜交，可以用于研究ad不同***或不同細胞類型pirb的調(diào)節(jié)作用。附圖說明圖1為本發(fā)明pirb基因敲入的小鼠插入pirb基因cds和loxp位點的打靶質(zhì)粒載體的構(gòu)建圖；圖2為本發(fā)明pirb基因敲入的小鼠模型的構(gòu)建方法的流程圖；圖3為本發(fā)明f1代pirb敲入的小鼠的基因型pcr結(jié)果鑒定電泳圖；圖4為本發(fā)明f1代pirb敲入的小鼠驗證pirb基因敲入效果的測序峰圖；圖5為本發(fā)明f1代pirb基因敲入的小鼠進行southern鑒定的方法示意圖；圖6為本發(fā)明f1代pirb基因敲入的小鼠進行southern鑒定的結(jié)果圖。動物疾病模型廣泛應(yīng)用于新藥靶點發(fā)現(xiàn)及篩選。

    f1代小鼠southern印記的5’探針引物如下：primersfor5’probe:5’probeforwardprimer:5’-aaacgtggagtaggcaatacccagg-3’5’probereverseprimer:5’-aaagaagggtcacctcagtctccct-3’primersfor3’probe:3’probeforwardprimer:5’-ttctgggcaggcttaaaggctaac-3’3’probereverseprimer:5’-aggagcgggagaaatggatatgaag-3’southern印記的目標片段大小如下：5’probe-bamhi:3’probe-avrii:。步驟c、采用限制性內(nèi)切酶bamhi和avrii對dna進行切割；瓊脂糖凝膠電泳分離dna；步驟d、將dna轉(zhuǎn)到尼龍膜上；步驟e、探針變性后，與dna分子進行雜交，nbt/bcip化學顯色法顯色，拍照觀察。southern雜交結(jié)果如圖6所示，可以看到：6、8、9號pirb基因敲除小鼠如果被bamhi切割，在，wt小鼠只在，如果被avrii切割，pirb基因敲除小鼠在，wt小鼠只在。步驟6、將f1代雜合子小鼠近交獲得f2代純合子pirb基因敲入小鼠，即為本發(fā)明所述小鼠pirb基因敲入的動物模型。將本發(fā)明獲得的動物模型f2代純合子小鼠與同品系小鼠組織/細胞特異性cre表達的小鼠雜交，獲得f3代小鼠，可以實現(xiàn)在不同組織或者細胞類型中敲入pirb基因。對f3代小鼠進行基因型的鑒定：含有無(pirb-cwt)、一個(pirb-chet)或者兩個?？梢钥朔祟惸承┘膊摲陂L，病程長和發(fā)病率低的缺點。金山區(qū)非酒肝疾病動物模型建模

小鼠是人類疾病理想的動物模型不僅因為小鼠在生理上與人類極為相似而且小鼠的遺傳資源非常豐富。鹽城心血管疾病疾病動物模型建模

    配制成6mg/kg順鉑注射液,按照10ml/kg分別在***天及第八天腹腔注射。實驗建立大鼠卵巢早衰模型1.實驗儀器及材料：如表1所示。表12.實驗方法：①動物信息：sd大鼠，雌性，6-8周，體重180-220g。普通環(huán)境飼養(yǎng)，滅菌飼料飼養(yǎng)，自由飲水。②分組及給藥劑量：如表2所示。表2③給藥途徑及頻率：腹腔注射；2mg、3mg組連續(xù)注射7天；4mg、6mg組***天、第八天注射；對照組連續(xù)7天注射生理鹽水。④病理檢測：末次注射后15天，動物麻醉，采集血液，分離血清，elisa法測定血清中e2、fsh、lh水平變化情況。解剖動物，取卵巢組織稱重，對大鼠的卵巢組織形態(tài)學進行觀察。注射期間每天稱重，給藥后每周稱重兩次，每天進行陰道涂片檢測動情周期。3.統(tǒng)計方法：采用graphpad進行統(tǒng)計分析。所有計量資料均采用均值±標準差表示采用單因素方差分析各組間均值的差異，p＜。4.試驗結(jié)果：(3mg組注射完成后*存活一只，不進行統(tǒng)計)如表3、表4、圖1、圖2、圖3所示：①***水平：與空白組相比，2mg組、4mg組、6mg組e2水平均降低，但是只有2mg組有明顯降低(p＜)，如圖1所示；與空白組相比，2mg組、4mg組、6mg組fsh水平均上升，只有2mg組有明顯升高(p＜)，如圖2所示；與空白組相比。鹽城心血管疾病疾病動物模型建模

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