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來源: 發(fā)布時間:2023-09-26

EdU(5-Ethynyl-2’-deoxyuridine)是一種胸腺嘧啶核苷類似物,能夠在細胞增殖時期代替胸腺嘧啶(T)滲入正在復制的DNA分子中,通過基于EdU與Apollo®熒光染料的特異性反應快速檢測細胞DNA復制活性,適用于細胞增殖、細胞分化、生長與發(fā)育、DNA修復、病毒復制、細胞標記示蹤等方面的研究,尤其適合進行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他藥物的篩選實驗。與BrdU檢測方法相比,EdU檢測方法更快速、更靈敏、更準確。EdU與T非常相似,而EdU染料只有BrdU抗體的1/500,在細胞內(nèi)很容易擴散,無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等),可有效避免樣品損傷,而且無需抗原抗體反應,能在細胞和組織水平更準確地反映DNA復制活性EdU細胞增殖檢測試劑盒廠家。山東如何使用EdU細胞增殖檢測試劑盒購買

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保存條件:4℃或-20℃保存,MTT需避光保存,一年有效;MTT配制成溶液后需-20℃避光保存;Formazan溶解液也可以室溫保存。注意事項:由于使用96孔板進行檢測,如果細胞培養(yǎng)時間較長,一定要注意蒸發(fā)的問題。一方面,由于96孔板周圍一圈容易蒸發(fā),可以采取棄用周圍一圈的辦法,改加PBS,水或培養(yǎng)液;另一方面,可以把96孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方,以緩解蒸發(fā)。MTT溶劑在低溫情況下會凝固,使用前請室溫放置或20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。MTT配制成溶液后為黃色,需避光保存,長時間光照會導致失效。當顏色變?yōu)榛揖G色時,請勿使用。MTT溶液在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固,可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。北京提供EdU細胞增殖檢測試劑盒價格EdU細胞增殖檢測試劑盒的重要組成部分。

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EdU細胞增殖檢測試劑盒通過基于EdU與熒光染料的特異性共軛反應,把熒光集團標記到新合成的含有EdU的DNA上面,這樣就可以進行高效快速的檢測出DNA復制活性,廣泛應用于細胞增殖、細胞分化、生長與發(fā)育、DNA損傷修復等方面的研究。傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法需要DNA變性、抗原修復、抗原抗體過夜孵育等復雜繁瑣的操作步驟。而EdU檢測方法不需要劇烈的DNA變性,只需溫和的細胞固定化和透化處理,能夠較好地保護細胞形態(tài)、DNA整體結(jié)構(gòu)及細胞內(nèi)抗原識別位點,操作步驟更加快速、靈敏和準確。EdU與胸腺嘧啶(T)結(jié)構(gòu)非常相似,而EdU染料大小只有BrdU抗體的1/500,在細胞內(nèi)很容易擴散,無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等),可有效避免樣品損傷,而且無需抗原抗體反應,能在細胞和組織水平更快速便捷地反映DNA復制活性。

EdU上的乙炔基能與生物素標記的疊氮化物(Biotinlabeledazide)通過一價銅離子的催化發(fā)生共價反應,形成穩(wěn)定的三唑環(huán),該反應非常迅速,被稱作點擊反應(Clickreaction),其反應原理參見圖1。通過點擊反應,新合成的DNA會被相應的生物素探針所標記,從而可以使用適當?shù)臋z測設備檢測到增殖的細胞。EdU檢測法中的點擊反應(Clickreaction)原理圖。生物素或熒光探針等標記的疊氮化物(LabeledAzide)與摻入到細胞DNA中的EdU,在銅離子的催化發(fā)生共價反應,形成穩(wěn)定的三唑環(huán),終使細胞DNA標記上生物素等探針。EdU細胞增殖檢測試劑盒的作用是什么?上海東寰告訴您。

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可通過CellProliferationELISA,BrdU(比色法.)或CellProliferationELISA,BrdU(發(fā)光法)進行細胞群落中DNA合成測定(BrdUbased)。優(yōu)點是:實驗結(jié)果同增殖細胞數(shù)目緊密相關(guān),可一步完成細胞的溫和固定和變性,操作方便穩(wěn)定,不破壞細胞形態(tài)。5-Bromo-2′-dULabeling/DetectionKitI(熒光法)或KitII(AP)可使用試劑盒提供的BrdU單抗,以及酶或熒光偶聯(lián)二抗,檢測單細胞水平的DNA合成(BrdUbased)。前者通過免疫熒光檢測,后者通過熒光顯微鏡檢測。優(yōu)點是:使用核酸酶變性DNA,在不傷害細胞完整性的情況下使抗體結(jié)合BrdU。你知道EdU細胞增殖檢測試劑盒的特點嗎?江西品牌EdU細胞增殖檢測試劑盒購買

EdU細胞增殖檢測試劑盒使用時的注意事項。山東如何使用EdU細胞增殖檢測試劑盒購買

EdU細胞增殖檢測和BrdU細胞增殖檢測的對比。小分子化合物AndyFluor?azide與EdU之間的點擊化學(ClickChemistry)反應不需要DNA變性,就可以進行高效快速的細胞增殖檢測分析,該反應不受雙鏈DNA中堿基對的影響,因此客戶了BrdU摻入法的弊端。圖2.使用EdU細胞增殖檢測試劑盒對細胞和組織的染色效果。使用10μMEdU處理A549細胞2小時,然后分別使用AndyFluor?488azide(綠色,上圖)、AndyFluor?594azide(紅色,中間圖)檢測細胞增殖活性,使用DAPI進行復染(藍色)。腹腔注射EdU到小鼠體內(nèi)(每公斤小鼠注射5mgEdU),分別于0、12、24小時之后取小鼠腸組織,制成切片用AndyFluor?488azide(綠色,**下圖)檢測細胞的增殖情況,使用DAPI進行復染(藍色)。山東如何使用EdU細胞增殖檢測試劑盒購買