青浦區(qū)C57小鼠疾病動(dòng)物模型建模

本能發(fā)明的另一目的是公開(kāi)了如上所述的方法制備的鼠慢性背根神經(jīng)壓迫模型的用途是將該模型用于腰椎間盤(pán)突出***方法研究和/或影像學(xué)檢測(cè)研究。進(jìn)一步地，該模型用于與磁性相關(guān)的***和/或檢測(cè)方面的研究，比如經(jīng)顱磁刺激和核磁共振。本發(fā)明利用壓迫元件插入腰椎椎間孔，模擬腰椎間盤(pán)突出后突出物對(duì)神經(jīng)根的持續(xù)慢性的機(jī)械壓迫癥狀，有益效果有：1.應(yīng)用機(jī)械壓迫神經(jīng)根模擬腰椎間盤(pán)突出病理，癥狀的病因?qū)W與臨床情況接近；2.相關(guān)的疼痛行為類(lèi)似于特定的慢性疼痛癥狀，且易于客觀測(cè)量；3.制備方法簡(jiǎn)單，對(duì)動(dòng)物損傷小，穩(wěn)定性好，成功率高；4.造模關(guān)鍵材料壓迫元件不受磁場(chǎng)干擾，無(wú)在磁場(chǎng)作用下移位風(fēng)險(xiǎn)，有利于后續(xù)對(duì)動(dòng)物進(jìn)行磁療，經(jīng)顱磁刺激等***及核磁共振等檢查；5.造模關(guān)鍵材料壓迫元件不影響磁場(chǎng)，不會(huì)對(duì)***儀器和核磁共振等儀器產(chǎn)生不良影響；6.此方法獲得的模型由于采用了h62黃銅或聚乳酸材料制備的壓迫元件，使得研究方法與檢測(cè)方法不受磁場(chǎng)作用限制，豐富了腰椎間盤(pán)突出臨床前研究的***方法及影像學(xué)檢測(cè)，為臨床研究提供理論依據(jù)。以下將結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，以充分說(shuō)明本發(fā)明的目的、技術(shù)特征和技術(shù)效果。附圖說(shuō)明圖1是壓迫元件插入椎間孔的結(jié)構(gòu)示意圖。必須真正了解研究者感興趣且需要的小鼠疾病模型。青浦區(qū)C57小鼠疾病動(dòng)物模型建模

在一個(gè)具體實(shí)施方式中，壓迫元件采用黃銅和鋅的混合物制備而成。具體地情況，混合物為h62黃銅，即含銅量為％～％，余量為鋅含量的黃銅。而銅、鋅皆屬于非鐵磁性物質(zhì)。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，壓迫元件采用聚乳酸(polylactic，pla)制備而成。pla是一種無(wú)毒無(wú)刺激的合成高分子材料，其原料是乳酸，不含任何金屬。h62黃銅棒或pla棒在體內(nèi)，即不會(huì)受磁療、電療引起的磁場(chǎng)、電場(chǎng)干擾，也不會(huì)對(duì)磁療、電療儀器及磁共振儀器產(chǎn)生不良影響。青浦區(qū)C57小鼠疾病動(dòng)物模型建模實(shí)驗(yàn)動(dòng)物向小型化的發(fā)展趨勢(shì)更有利于實(shí)驗(yàn)者的日常管理和實(shí)驗(yàn)操作。

該模型能夠幫助我們研究pirb基因在免疫系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)的功能以及下游的調(diào)節(jié)機(jī)制。本發(fā)明的另一目的在于提供上述小鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法。本發(fā)明所采用的第一種技術(shù)方案是：pirb基因敲入的小鼠動(dòng)物模型，包括確定pirb基因的待敲入的特異性靶位點(diǎn)grna1和grna2，將pirb基因敲入c57bl/6j小鼠的rosa26基因的內(nèi)含子1內(nèi)，所述grna1的基因序列如seqid**所示，grna2的基因序列如。本發(fā)明所采用的第二種技術(shù)方案為：pirb基因敲入的小鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，具體按照以下步驟實(shí)施：步驟1、基于crispr/cas9技術(shù)構(gòu)建針對(duì)c57bl/6j小鼠rosa26基因的特異性grna1和grna2，grna1的基因序列如seqid**所示，grna2的基因序列如；步驟2、構(gòu)建“cagpromoter-loxp-stop-loxp-kozak-mousepirbcds-polya”基因盒打靶載體，將打靶載體進(jìn)行線性化處理；步驟3、步驟2中將含有l(wèi)oxp位點(diǎn)打靶載體、步驟1中有活性的grna1和grna2與cas9蛋白共同注射進(jìn)入**小鼠受精卵中，獲得f0代小鼠；步驟4、將步驟3中性成熟的陽(yáng)性f0小鼠分別與野生型鼠交配繁一代，獲得f1代雜合子小鼠，通過(guò)pcr、測(cè)序和southern雜交確定動(dòng)物基因型；步驟5、將步驟4獲得的f1代雜合子小鼠近交獲得f2代純合子小鼠。

得到大鼠慢性背根神經(jīng)壓迫模型。進(jìn)一步地，l型棒的直徑為，***端長(zhǎng)3-5mm，第二端長(zhǎng)1-3mm。具體地，根據(jù)大鼠體重選擇l型棒的直徑大?。寒?dāng)大鼠體重在200g到不足220g范圍時(shí)，采用直徑為；當(dāng)大鼠體重在220g到不足250g范圍時(shí)，采用直徑為；當(dāng)大鼠體重在250g到不足300g范圍時(shí)，采用直徑為；當(dāng)大鼠體重在300g到350g范圍時(shí)，采用直徑為。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，壓迫元件為u型棒；步驟三具體為：將u型棒的***端和第二端分別插入到左側(cè)或右側(cè)腰4椎間孔及腰5椎間孔中，得到大鼠慢性背根神經(jīng)壓迫模型。進(jìn)一步地，壓迫元件采用不受磁場(chǎng)干擾、置入體內(nèi)不會(huì)對(duì)神經(jīng)造成化學(xué)刺激以及具有一定可塑性的材料制備而成。在一個(gè)具體實(shí)施方式中，壓迫元件采用黃銅和鋅的混合物制備而成。具體地，混合物為h62黃銅，即含銅量為％～％，余量為鋅含量的黃銅。而銅、鋅皆屬于非鐵磁性物質(zhì)。在另一個(gè)具體實(shí)施方式中，壓迫元件采用聚乳酸(polylactic，pla)制備而成。pla是一種無(wú)毒無(wú)刺激的合成高分子材料，其原料是乳酸，不含任何金屬。h62黃銅棒或pla棒在體內(nèi)，即不會(huì)受磁療、電療引起的磁場(chǎng)、電場(chǎng)干擾，也不會(huì)對(duì)磁療、電療儀器及磁共振儀器產(chǎn)生不良影響。模型應(yīng)適用于多數(shù)研究者使用，容易復(fù)制，實(shí)驗(yàn)中便于操作和采集各種標(biāo)本。

水楊酸性胃潰瘍模型：大鼠禁食后水楊酸灌胃。4、結(jié)扎幽門(mén)法潰瘍模型：大鼠麻醉后在無(wú)菌技術(shù)下結(jié)扎幽門(mén)。此模型適合做探索抗?jié)儾∷幬镅芯亢臀笣儼l(fā)病機(jī)制方面的研究。三、動(dòng)物模型（animalmodelofhypertension）1、腎動(dòng)脈狹窄性模型：在腎動(dòng)脈上造成腎動(dòng)脈狹窄。如果是單側(cè)腎動(dòng)脈狹窄，則在間隔10～12d后將另一側(cè)腎摘除。手術(shù)幾天后，血壓開(kāi)始升高，1～3個(gè)月后血壓升至高峰，并可長(zhǎng)期維持下去。2、腎外包扎性模型：腎外異物包扎，壓迫腎實(shí)質(zhì)，造成腎組織缺血，使腎素形成增加，血壓上升。3、應(yīng)激性模型：應(yīng)激性大鼠模型常采用噪聲和足底電擊的復(fù)合刺激，每天2次，每次2h，約20d大鼠可形成如何定義好的小鼠疾病模型？青浦區(qū)C57小鼠疾病動(dòng)物模型建模

利用動(dòng)物疾病模型來(lái)研究人類(lèi)疾病可以克服平時(shí)一些不易見(jiàn)到不便于在病人身上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的人類(lèi)疾病的研究。青浦區(qū)C57小鼠疾病動(dòng)物模型建模

急性肺損傷模型大鼠(右)與對(duì)照組大鼠肺部照片對(duì)比5.2.2肺的濕/干重比檢測(cè)：肺的濕/干重比是反應(yīng)肺水腫的直接指標(biāo)，也是反應(yīng)肺損傷嚴(yán)重程度的敏感指標(biāo)。在急性肺損傷發(fā)生后，大量液體滲出至肺泡和肺間質(zhì)，導(dǎo)致肺的重量增大，而肺的干重則不受影響。處死大鼠、剪斷氣管后取全肺，稱(chēng)濕重，然后將肺置于65℃恒溫箱中干燥，24h后取出稱(chēng)干重，計(jì)算肺濕/干重比值。圖7.急性肺損傷模型大鼠(ALI)與對(duì)照組大鼠肺干濕重比隨不同時(shí)間點(diǎn)的變化。5.2.3肺泡盥洗液（BALF）中細(xì)胞計(jì)數(shù)：小鼠取血后，開(kāi)胸，分離縱膈，注射器抽取3ml生理鹽水從氣管插管推入肺中，每次反復(fù)灌洗3次后抽出灌洗液，肺泡灌洗液以4℃3000r/min離心15min，取上清，保存于-80度用于后續(xù)檢測(cè)。青浦區(qū)C57小鼠疾病動(dòng)物模型建模