山東品質(zhì)好的EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒原理

    注：1）培養(yǎng)時間取決于細(xì)胞的增殖速度和生長狀態(tài)；2）孵育時間至少2小時，可延長至24小時后再檢測也可以。4、以1×PBS清洗細(xì)胞兩次，每次5分鐘，以除去未摻入RNA的EU殘留。注：貼壁不牢的細(xì)胞可降低清洗強度。細(xì)胞的固定和通透1、每孔加入150μl細(xì)胞固定液，室溫培養(yǎng)30分鐘，棄固定液；注：1)該試劑盒配備了細(xì)胞固定液，也可以使用含4%多聚甲醛的PBS來進(jìn)行細(xì)胞固定；2)如果使用其他的細(xì)胞固定劑建議用DEPC水來配置，避免RNA酶降解細(xì)胞內(nèi)的RNA。2、每孔加入150μl2mg/ml甘氨酸，搖床孵育5分鐘；3、棄甘氨酸溶液，每孔加入300μlPBS洗液，室溫清洗5分鐘；4、每孔加入300μlTritonX-100細(xì)胞通透液，室溫通透10分鐘，棄細(xì)胞通透溶液；5、每孔加入300μlPBS洗液，室溫清洗5分鐘；EU染色1、通過用10：1去離子水稀釋10×反應(yīng)緩沖液進(jìn)行配制1×EU反應(yīng)緩沖液；2、按照溶解200mg緩沖添加劑溶于1ml去離子水的比例稱取適量的粉末進(jìn)行溶解，即為可用的緩沖添加劑的濃度，建議現(xiàn)用現(xiàn)配；注：緩沖添加劑為白色粉末，較難準(zhǔn)確稱量，稱量范圍可稍微放寬，但是不應(yīng)超過±20%，且該粉末較易氧化，使用后請旋緊管蓋，如試劑出現(xiàn)棕黃色，則需報廢或更換。EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒的發(fā)展趨勢如何？山東品質(zhì)好的EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒原理

本試劑盒小包裝C0085S如果用于培養(yǎng)的細(xì)胞(6孔板)的檢測，可以檢測50個樣品，每個樣品的反應(yīng)體系為500μl的Click反應(yīng)液；如果用于96孔板檢測，可以檢測500個樣品，每個樣品的檢測體系為50μl的Click反應(yīng)液；如果用于12孔、24孔、48孔或384孔板樣品的檢測，分別可以檢測125、250、350和1250個樣品，每個樣品推薦的Click反應(yīng)液用量為200μl、100μl、70μl和20μl。小包裝如果用于冰凍或石蠟切片的檢測，可以檢測125-250個樣品，每個樣品的反應(yīng)體系為100-200μl的Click反應(yīng)液。大包裝C0085L可檢測樣品的數(shù)量為小包裝C0085S的4倍。福建品質(zhì)好的EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒說明書上海EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒的發(fā)展趨勢。

    4%多聚甲醛固定液或冷**固定液(-20℃預(yù)冷20min)。d,封閉液。e,／LPBS緩沖液。2、染色方法a,取出培養(yǎng)有細(xì)胞的蓋玻片，用洗2-3遍。b,加入4%多聚甲醛試問固定30minc.加入的Tritonx-100,37℃,5min，PBS洗兩次，5min/次d.加入含、1%BSA的PBS中室溫封閉30min-1h。e.去封閉液，直接加入一抗，37℃孵育1h或4℃過夜?？贵w以mo/LPBS稀釋(理想的抗體濃度需經(jīng)試驗而定)。，10min/次g.加入FITC-二抗或TRITC-二抗，37℃，孵育1h。，10min/次，用濾紙吸干。(PBS配制)封片。j.免疫熒光顯微鏡下觀察，或于4℃避光保存。免疫熒光雙標(biāo)記方法免疫熒光的雙標(biāo)記是指同時標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)兩種蛋白質(zhì)分子，當(dāng)懷疑某種配體與已知受體結(jié)合后可用此方法加以證明。此方法稍微復(fù)雜一些，應(yīng)注意所用的一抗是來自不同種屬動物的兩種特異性抗體(例如：A抗體為多克隆抗體，來自家兔；B抗體為單克隆抗體，來自小鼠)。其次，兩種二抗所帶熒光素的發(fā)射光不應(yīng)重疊，且盡量遠(yuǎn)離，通常可以選擇FITC和TRITC、Alex488和TRITC、FITC和Cy5，或Cy3和Cy5等來組合。通常情況下，染色時兩種一抗可以同時孵育，然后可以同時孵育兩種二抗。但當(dāng)染色結(jié)果一種顏色非常弱，而另一種顏色比較強時，應(yīng)考慮先孵育顏色較弱的二抗。

與BrdU方法相比，EdU檢測方法無需DNA變性，無需抗原修復(fù)，無需抗原抗體反應(yīng)，更簡單、更靈敏、更快速、更準(zhǔn)確，是細(xì)胞增殖檢測的比較好選擇。更準(zhǔn)確--無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)，可有效避免變性帶來的樣品損傷，確保細(xì)胞核邊緣清晰完整；更簡單--無需抗原抗體反應(yīng)，基于小分子化學(xué)反應(yīng)的檢測方法，簡單高效，反應(yīng)單需要幾分鐘；更靈敏--無需抗體，檢測染料單為BrdU抗體的1/500，更容易擴散，即使單個增殖細(xì)胞也能準(zhǔn)確檢測；更快速--無需過夜，省卻了抗原抗體反應(yīng)的復(fù)雜繁瑣步驟，完成整個檢測周期單需2.5小時；更兼容--對樣品幾乎無損傷，更容易與多種抗體或熒光蛋白同時標(biāo)記，能夠同時檢測細(xì)胞其他性狀特征使用EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒前的安全檢查。

EdU標(biāo)記(a)將細(xì)胞完全培養(yǎng)基中按照500:1的比例加入EdU溶液，制成2xEdU標(biāo)記培養(yǎng)基；(b)提前將2xEdU標(biāo)記培養(yǎng)基預(yù)熱，然后等體積加入到細(xì)胞原有培養(yǎng)基中，獲得lxEdU溶液，其中EdU的終濃度為10uM；注：1)我們不建議替換全部培養(yǎng)基，因為這樣可能會影響細(xì)胞增殖的速度；2)配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配，用量以沒過細(xì)胞為宜；(c)每孔加入300ul含EdU培養(yǎng)基孵育細(xì)胞2小時，棄培養(yǎng)基；注：1)培養(yǎng)時間取決于細(xì)胞的增殖速度和生長狀態(tài)；2)大多數(shù)**細(xì)胞以及粘附細(xì)胞系均可采用2小時的孵育時間(d)以lxPBS清洗細(xì)胞兩次，毎次5分鐘，以除去未摻入DNA的EdU殘留。注：貼壁不牢的細(xì)胞可降低清洗強度。你知道EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒的特點嗎？上海正規(guī)EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒哪家好

EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒在社會上的重要性。山東品質(zhì)好的EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒原理

細(xì)胞活性的細(xì)胞增殖檢測方法，能檢測到細(xì)胞的總體增殖效果，但無法檢測到單個的增殖細(xì)胞。這幾種方法盡管都不是檢測DNA合成的，但被用于替代[3H]thymidine摻入法。CFDASE法(C0051、C1031)基于細(xì)胞熒光示蹤的原理能檢測到單個的增殖細(xì)胞，但由于每增殖一次熒光減弱一半，在熒光顯微鏡下較難區(qū)分熒光減弱一半的細(xì)胞，檢測靈敏度不是很高，通常適用于流式細(xì)胞儀檢測。在進(jìn)行科學(xué)研究時，上述這些基于細(xì)胞活性或CFDASE的方法可以作為EdU法的補充性檢測方法。山東品質(zhì)好的EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒原理