安徽如何使用EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒公司

    熒光試劑請避光保存。反應(yīng)緩沖液10X1ml催化劑溶液25x400ulTAMRA紅色熒光溶液400x25ul緩沖添加劑粉末200mgHoechstX20ul使用前須知該產(chǎn)品是采用成像檢測方法對貼壁細(xì)胞進(jìn)行檢測，適用于熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡等儀器。非貼壁細(xì)胞可在孵育EdU后進(jìn)行細(xì)胞涂片處理，固定后再采用貼壁細(xì)胞的染色流程進(jìn)行檢測。也可以應(yīng)用于流式細(xì)胞儀檢測。實(shí)驗(yàn)步驟(以24孔板，HK2貼壁細(xì)胞為例)EdU標(biāo)記(a)將細(xì)胞完全培養(yǎng)基中按照500:1的比例加入EdU溶液，制成2xEdU標(biāo)記培養(yǎng)基；(b)提前將2xEdU標(biāo)記培養(yǎng)基預(yù)熱，然后等體積加入到細(xì)胞原有培養(yǎng)基中，獲得lxEdU溶液，其中EdU的終濃度為10uM；注：1)我們不建議替換全部培養(yǎng)基，因?yàn)檫@樣可能會影響細(xì)胞增殖的速度；2)配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配，用量以沒過細(xì)胞為宜；(c)每孔加入300ul含EdU培養(yǎng)基孵育細(xì)胞2小時，棄培養(yǎng)基；注：1)培養(yǎng)時間取決于細(xì)胞的增殖速度和生長狀態(tài)；2)大多數(shù)**細(xì)胞以及粘附細(xì)胞系均可采用2小時的孵育時間(d)以lxPBS清洗細(xì)胞兩次，毎次5分鐘，以除去未摻入DNA的EdU殘留。注：貼壁不牢的細(xì)胞可降低清洗強(qiáng)度。細(xì)胞的固定和通透(a)每孔加入150ul4%多聚甲醛細(xì)胞固定液，室溫培養(yǎng)30分鐘，棄固定液；(b)毎孔加入150ul2mg/ml甘氨酸。上海EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒的發(fā)展趨勢。安徽如何使用EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒公司

使用本試劑盒所做結(jié)果可以用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、流式細(xì)胞儀或熒光酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測，也可以用于高內(nèi)涵篩選(High-Content Screening, HCS)。對6孔板培養(yǎng)的細(xì)胞（每孔500μl的Click反應(yīng)液）、96孔板培養(yǎng)的細(xì)胞（每孔50μl的Click反應(yīng)液）、每管細(xì)胞數(shù)量為10-100萬的流式細(xì)胞儀檢測（每管500μl的Click反應(yīng)液）以及冰凍或石蠟切片的檢測（每個樣品100-200μl的Click反應(yīng)液），不同規(guī)格的本產(chǎn)品可以提供的反應(yīng)的量詳見說明書中的表。光譜特性：488-Azide：綠色熒光，Ex/Em=491/518nm；Hoechst 33342：藍(lán)色熒光，Ex/Em=346/460nm, bound to DNA。安徽正規(guī)EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒供應(yīng)商EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒的特點(diǎn)是什么？上海東寰告訴您。

另一方面，EdU上的乙炔基能與生物素標(biāo)記的疊氮化物(Biotinlabeledazide)通過一價銅離子的催化發(fā)生共價反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，該反應(yīng)非常迅速，被稱作點(diǎn)擊反應(yīng)(Clickreaction)，其反應(yīng)原理參見圖1。通過點(diǎn)擊反應(yīng)，新合成的DNA會被相應(yīng)的生物素探針?biāo)鶚?biāo)記，從而可以使用適當(dāng)?shù)臋z測設(shè)備檢測到增殖的細(xì)胞。圖1.BeyoClick?EdU檢測法中的點(diǎn)擊反應(yīng)(Clickreaction)原理圖。生物素或熒光探針等標(biāo)記的疊氮化物(LabeledAzide)與摻入到細(xì)胞DNA中的EdU，在銅離子的催化發(fā)生共價反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，終使細(xì)胞DNA標(biāo)記上生物素等探針。本試劑盒反應(yīng)簡單、檢測靈敏度高。本試劑盒基于簡單高效的點(diǎn)擊反應(yīng)，無需DNA變性，只需少量的小分子疊氮化物探針即可非常有效地標(biāo)記出摻入的EdU，并且可以檢測到單個細(xì)胞的增殖情況。

傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法需要DNA變性、抗原修復(fù)、抗原抗體過夜孵育等復(fù)雜繁瑣的操作步驟。而EdU檢測方法不需要劇烈的DNA變性，只需溫和的細(xì)胞固定化和透化處理，能夠較好地保護(hù)細(xì)胞形態(tài)、DNA整體結(jié)構(gòu)及細(xì)胞內(nèi)抗原識別位點(diǎn)，操作步驟更加快速、靈敏和準(zhǔn)確。EdU與胸腺嘧啶(T)結(jié)構(gòu)非常相似，而EdU染料大小只有BrdU抗體的1/500,在細(xì)胞內(nèi)很容易擴(kuò)散，無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)，可有效避免樣品損傷，而且無需抗原抗體反應(yīng)，能在細(xì)胞和組織水平更快速便捷地反映DNA復(fù)制活性。使用EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒到底有什么好處？

這一類細(xì)胞增殖用熒光標(biāo)記采用溫和的點(diǎn)擊實(shí)驗(yàn)方案，準(zhǔn)確且兼容各種抗體實(shí)驗(yàn)方案，整個實(shí)驗(yàn)可在30分鐘內(nèi)完成，在結(jié)果的數(shù)據(jù)豐富程度方面，堪比多重分析方法。此外，該方法適用于培養(yǎng)的細(xì)胞或組織切片，可用流式細(xì)胞術(shù)分析檢測EdU Flow Cytometry Kit 594（BCK-FC594-100）；可進(jìn)行HCS分析或進(jìn)行細(xì)胞裂解液微孔板檢測EdU HTS Kit 594（BCK-HTS594-20）；也可適用于培養(yǎng)中的細(xì)胞，或通過注射方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的小動物樣本，進(jìn)行體內(nèi)成像分析In Vivo EdU Click Kit 594(BCK594-IV-IM-M)、流式細(xì)胞檢測或HCS高通量檢測。(共有488、555、594、647四種熒光染料可選）。EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒可以去哪里購買？河南EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒供應(yīng)商

EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒如何發(fā)揮重要作用？安徽如何使用EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒公司

本試劑盒可以檢測到細(xì)胞或組織樣品中單個的增殖細(xì)胞，同時也可以對細(xì)胞或組織樣品總體的細(xì)胞增殖情況進(jìn)行定量檢測。本試劑盒可以檢測培養(yǎng)的細(xì)胞或組織樣品，也可以檢測組織切片，但均需提前進(jìn)行EdU的摻入。細(xì)胞增殖能力的檢測是評估細(xì)胞活性、基因毒性和抗藥物效果等的基本方法。公認(rèn)的精確的檢測細(xì)胞增殖的方法是直接檢測細(xì)胞中DNA的合成。初使用的通過檢測DNA合成來檢測細(xì)胞增殖的方法是放射性標(biāo)記核苷摻入法，如氚標(biāo)記胸腺嘧啶脫氧核苷([3H]thymidine)摻入法。安徽如何使用EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒公司