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    蛋白抽提/WesternBlotting技術(shù)服務(wù)WesternBlotting技術(shù)服務(wù)(DH1004)一.服務(wù)內(nèi)容1、蛋白提?。簭娜嘶騽游锛毎?、組織，細胞等樣品中提取蛋白樣品。2、蛋白定量：對樣品中蛋白進行半定量分析。3、WesternBlot檢測（1）電泳：聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE）分離蛋白樣品。（2）濕法轉(zhuǎn)印。（3）雜交：用抗體鑒定膜上的特定蛋白。（4）顯色：ECL熒光顯色，黑條帶白背景照片4、提供蛋白內(nèi)參檢測（所有內(nèi)參抗體均不收取費用）。5、預(yù)實驗及正式實驗服務(wù)。二.樣品要求1、細胞＞1×10^7；組織＞30mg；細菌濕重＞1mg等。2、樣品蛋白濃度＞1mg/ml，蛋白量＞200ug/樣品。3、建議提供目的蛋白陽性表達樣品（純蛋白、有陽性表達的細胞或組織、商品化的陽性對照產(chǎn)品等）作為陽性對照。注：若有特殊處理的樣品，請盡可能出示相關(guān)材料（具有保密性的材料除外）。三.收費標準服務(wù)項目免疫學(xué)檢測服務(wù)內(nèi)容周期產(chǎn)物/報告價格（元）DH1004-01樣品準備總蛋白提取、定量、質(zhì)控3天總蛋白質(zhì)控報告100元/樣DH1004-02免疫印跡（WB）WB預(yù)實驗，質(zhì)控WB體系5-10天完整實驗報告1000元/膜WB檢測正式實驗10-15天完整實驗報告1000元/膜四、客戶提供材料1、樣品：新鮮或正確保存的樣品以及與樣品相關(guān)的必要資料。EdU細胞增殖檢測試劑盒哪家便宜？上海東寰告訴您。山東提供EdU細胞增殖檢測試劑盒優(yōu)勢

細胞增殖是評價細胞活性、代謝、生理和病理狀況的重要指標。EdU(5-Ethynyl-2,-deoxyuridine)是一種胸腺嘧啶核苷類似物，其連有的炔烴基團在天然化合物中很少見，能夠在細胞增殖時期代替胸腺嘧啶(T)摻入正在復(fù)制的DNA分子中，EdU細胞增殖檢測試劑盒通過基于EdU與熒光染料的特異性共軛反應(yīng)，把熒光集團標記到新合成的含有EdU的DNA上面，這樣就可以進行高效快速的檢測出DNA復(fù)制活性，廣泛應(yīng)用于細胞增殖、細胞分化、生長與發(fā)育、DNA損傷修復(fù)等方面的研究。傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法需要DNA變性、抗原修復(fù)、抗原抗體過夜孵育等復(fù)雜繁瑣的操作步驟。河南EdU細胞增殖檢測試劑盒公司EdU細胞增殖檢測試劑盒的基本結(jié)構(gòu)級應(yīng)用。

細胞的固定和通透(a)每孔加入150ul4%多聚甲醛細胞固定液，室溫培養(yǎng)30分鐘，棄固定液；(b)毎孔加入150ul2mg/ml甘氨酸，搖床孵育5分鐘，以中和過量的多聚甲醛；(c)棄甘氨酸溶液，每孔加入300ulPBS洗液，室溫清洗5分鐘；(d)每孔加入300ul0.5%TritonX-100細胞通透液，室溫通透10分鐘，棄細胞通透溶液；(e)每孔加入300ulPBS洗液，室溫清洗5分鐘；該產(chǎn)品是采用成像檢測方法對貼壁細胞進行檢測，適用于熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡等儀器。非貼壁細胞可在孵育EdU后進行細胞涂片處理，固定后再采用貼壁細胞的染色流程進行檢測。也可以應(yīng)用于流式細胞儀檢測

建議染色完成后立即進行熒光顯微鏡拍照觀察；如果條件限制，請于4°C條件下避光濕潤保存3天之內(nèi)完成拍照。若為細胞爬片或涂片，可使用抗熒光淬滅封片劑進行封片后于4°C條件下保存及拍照檢測。而EdU檢測方法不需要劇烈的DNA變性，只需溫和的細胞固定化和透化處理，能夠較好地保護細胞形態(tài)、DNA整體結(jié)構(gòu)及細胞內(nèi)抗原識別位點，操作步驟更加快速、靈敏和準確。EdU與胸腺嘧啶(T)結(jié)構(gòu)非常相似，而EdU染料大小只有BrdU抗體的1/500,在細胞內(nèi)很容易擴散，無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)，可有效避免樣品損傷，而且無需抗原抗體反應(yīng)，能在細胞和組織水平更快速便捷地反映DNA復(fù)制活性上海東寰告訴您什么是EdU細胞增殖檢測試劑盒？

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EdU法中的點擊反應(yīng)原理圖。摻入到細胞DNA中的EdU與熒光探針或生物素等標記的疊氮化物，在銅離子的催化下發(fā)生共價反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，使細胞DNA標記上熒光探針或生物素。細胞增殖檢測是評估細胞活性、遺傳毒性及抗藥物效果等的基礎(chǔ)實驗手段。細胞增殖檢測的方法按照原理通?？梢苑譃槲孱悾耗p傷檢測、代謝活性檢測、ATP水平測定、DNA合成檢測和細胞熒光標記檢測法。目前公認的精確的檢測細胞增殖的方法是直接檢測細胞中DNA的合成山東提供EdU細胞增殖檢測試劑盒優(yōu)勢