海南GingisREXIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

與肽圖譜相比，根據(jù)Genovis科學家的經(jīng)驗，尤其是對于像抗體這樣的分子，許多人在常規(guī)實驗中做了太多的肽圖譜，而中級水平（Middle-level）的方法可以很好地工作。中級方法（IdeS酶切抗體）需要更少的實際操作步驟和較少的示例處理，所有這些都意味著過程中出錯的事情更少。我們的許多酶可以作為平臺方法，同樣的方法適用于絕大多數(shù)的抗體，這不是肽圖的情況下，可能需要優(yōu)化整個樣品制備，LC分離，質(zhì)譜設(shè)置和數(shù)據(jù)分析的每個不同的抗體分析。這些變化可能是很小的，但沒有一種適用于所有肽圖的方法。由于分析和數(shù)據(jù)分析的簡單性，中級方法非常適合自動化和高通量的工作流程。肽圖當然可以自動用于樣品制備，但高通量肽圖生成大量數(shù)據(jù)，仍然需要徹底分析。事實上，肽圖譜是一個多步驟的過程，每一個步驟都可能破壞方法，并可能導致破壞蛋白質(zhì)的人工制品，很難交叉訓練給非專業(yè)人員。中級水平的方法很容易交叉訓練，我們的方法在質(zhì)量控制實驗室中被成功地使用。肽圖譜是一種用于修飾分析和氨基酸確認的方法，但一旦完成了這一工作，我相信使用中級分析可以成功地更有效地完成抗體樣本的大部分工作。融合蛋白的中級分析既可以降低整體樣品的復雜性，又可以對翻譯后修飾進行結(jié)構(gòu)域特異性鑒定和監(jiān)測。海南GingisREXIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

不同于IdeS，Genovis的FabDELLO 是一種蛋白酶，可在鉸鏈上方的單個位點消化人 IgG1，在兩小時內(nèi)產(chǎn)生完整的 Fab 和 Fc 片段，無需還原條件。該酶對具有突變鉸鏈區(qū)域的抗體（如 LALA 突變）具有活性，并啟用中級 LC-MS 來表征具有突變鉸鏈的抗體的關(guān)鍵質(zhì)量屬性。FabDELLO 在鉸鏈上方的單個位點消化人 IgG1 （...KSCDK / THTCPPCP...），生成完整的 Fab 和 Fc 片段。FabDELLO 是一種賴氨酸特異性蛋白酶。單個消化位點是人 IgG1 的三維結(jié)構(gòu)的結(jié)果，使這種賴氨酸暴露于酶中。如果去除N-聚糖，則Fc上暴露的賴氨酸處可能會出現(xiàn)額外的消化位點。FabDELLO在天然條件下具有活性，需要鈣離子的存在。在37°C和pH 7-8.5下獲得良好活性。FabDELLO 是從 Bdellovibrio 細菌克隆而來的，并在大腸桿菌中表達。該酶含有 His 標簽，分子量為 32 kDa。四川FabULOUSIdeS蛋白酶抗體酶切幾乎完全消化了Fc結(jié)構(gòu)域中的連接子，留下了接近均質(zhì)的Fc/2產(chǎn)物。

Genovis的FabRICATOR是一種半胱氨酸蛋白酶，它對許多不同的物種和IgG亞類都有活性，包括人IgG亞類1-4以及猴子、兔子、大鼠和綿羊IgG的一些亞類。FabRICATOR在鉸鏈下方的單個位點進行消化，生成F(ab’)2和Fc/2子基，可以進一步還原生成Fd’，輕鏈和F/2子基是必需的。FabRICATOR（IdeS）通過蛋白-蛋白相互作用與目標抗體工作，這說明了它的高特異性。事實上，它在單個位點消化意味著使用FabRICATOR時沒有過度消化的風險，其高特異性也意味著相同的消化方案可以作為平臺方法應(yīng)用于許多不同的抗體。FabRICATOR（IdeS）不需要還原條件來獲得良好活性，也不需要任何額外的輔助因子，它將在不同生理緩沖中發(fā)揮作用。這意味著按照下面的鉸鏈消解，您將生成F(ab’)2和Fc/2片段用于分析或其他應(yīng)用。

在Genovis，我們的策略是幫助客戶進行中級（或亞基）分析，這是我們的工作，特別是我們的蛋白質(zhì)酶切產(chǎn)品。完整質(zhì)量和肽圖譜是蛋白質(zhì)表征的常用方法，我們發(fā)現(xiàn)，與簡單但信息有限的完整質(zhì)量和高度復雜但信息豐富的肽圖譜相比，中級方法具有優(yōu)勢。通過執(zhí)行中級描述，您可以生成從完整的質(zhì)量實驗中獲得的所有信息，具有額外的優(yōu)勢。在對抗體進行完整質(zhì)量分析時，很難明確地識別某些修飾。質(zhì)譜儀器正在改進，可以更有效地分析更大的分子，但通過使用我們的SmartEnzymes，如IdeS，可以將抗體分解成更小的片段，這提高了這些實驗可以執(zhí)行的分辨率，因此，增加了鑒定修飾的信心。此外，你不僅能夠更好地識別修改，而且你能夠?qū)⑺鼈兌ㄎ坏降鞍踪|(zhì)上的單個結(jié)構(gòu)域，這是你在完整水平上無法做到的?？删_定位特定的修飾。而無需肽圖分析，可以較少的手動操作時間快速完成。

蛋白酶用于生成肽，用于質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)。這些應(yīng)用包括蛋白質(zhì)組學和生物制藥的深度表征。由于遺漏了切割和樣品制備誘導的偽影，傳統(tǒng)的蛋白酶并不總是理想的，因此需要具有不同特異性的蛋白酶工具箱。Genovis的GingisREX 是一種精氨酸特異性蛋白酶，可將蛋白質(zhì) C 末端消化為精氨酸殘基。與胰蛋白酶肽相比，所得肽更長，并可能導致序列覆蓋率增加。質(zhì)譜分析中蛋白酶的特異性對于獲得高質(zhì)量的數(shù)據(jù)集和避免復雜的數(shù)據(jù)解釋至關(guān)重要。作為模型底物，使用胰島素氧化β鏈來比較 GingisREX 和 ArgC 的酶特異性。胰島素氧化β鏈含有一個精氨酸和一個賴氨酸殘基。在RP-HPLC和質(zhì)譜法上分析GingisREX和ArgC的酶切肽。GingisREX在賴氨酸殘基上沒有酶活性或其他額外活性，即使在長時間孵育過夜后，酶與底物的比例也很高（1：5）。然而，ArgC在精氨酸殘基上顯示出主要活性，但在賴氨酸殘基上也可以看到酶消化。在酶與底物的比例為 1：20 和過夜孵育下，證明了 ArgC 的額外非特異性活性。在相同條件下，GingisREX未檢測到這種情況。數(shù)據(jù)證實了GingisREX精氨酸殘基的特異性活性，并顯示使用Arg-C在賴氨酸和其他殘基處的非特異性消化。Genovis酶的適應(yīng)于克隆篩選，工藝開發(fā)和驗證以及穩(wěn)定性研究，也適用于受控環(huán)境中的批次放行方法。海南GingisREXIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

Genovis提供FabRICATOR （IdeS）驗證包。三種不同批次的凍干酶，用于驗證基于FabRICATOR的分析方法。海南GingisREXIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

Genovis提供具有低水平內(nèi)Du素的FabRICATOR（IdeS）凍干酶，用于IgG的鉸鏈以下消化。FabRICATOR（IdeS）是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶，可消化鉸鏈下方單個氨基酸位點的抗體，產(chǎn)生均質(zhì)的F（ab'）2和Fc片段。FabRICATORLowEndotoxin以凍干粉的形式提供兩種不同規(guī)格：2000和5000單位，分別用于消化2mg或5mgIgG。該產(chǎn)品配方每瓶的內(nèi)Du素含量較低，2000單位小瓶的內(nèi)Du素含量為<0.04EU/瓶，5000單位小瓶的內(nèi)Du素含量為<0.10EU/瓶。有效消化，內(nèi)DU素水平低；適用于靈敏的體內(nèi)或基于細胞的檢測。海南GingisREXIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶