離心過程中注意是否發(fā)生蛋白沉淀,導(dǎo)致堵管。若發(fā)生沉淀,要確定沉淀的具體原因,是蛋白濃度過高還是Buffer不合適;前者可用多根超濾管同時超濾,降低濃度的辦法解決,后者的方法是換不同的緩沖溶液,直到蛋白不發(fā)生沉淀為止。用以濃縮蛋白,如果要換Buffer,在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候,輕輕加入新的Buffer(經(jīng)0.22um超濾膜超濾),再濃縮至1ml左右,連續(xù)三次,之后一次的濃縮終體積根據(jù)需要的蛋白濃度而定,一般不多于500ul,也有濃縮至200ul以內(nèi)的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算,三次達(dá)到1000倍以上,基本上可以達(dá)到換buffer的目的。超濾離心管還可用于生產(chǎn)工藝控制和質(zhì)量監(jiān)測,以確保產(chǎn)品符合標(biāo)準(zhǔn)要求。紹興30K超濾離心管咨詢
我用的是3500g,4度離心,時間可以自己控制,取決于你之后的濃縮體積,我一般是200ul左右。千萬別一下離心時間太長,不同的蛋白濃縮的速度不同,有的需要長時間離心,有的則一下子就好。當(dāng)然也和你的蛋白是否比較純,所用的是什么buffer,還有蛋白的濃度有關(guān)系。所以離心時要先短些時間觀察一下你的濃縮速度,不要一下子濃縮過了,甚至形成沉淀就得不償失了。另外其實他們的管子都設(shè)計的是一次性使用,所以如果想重復(fù)使用,不要離得速度太高,4000-4500RPM就差不多了,另外重復(fù)使用時要看看管壁上有沒有裂紋,現(xiàn)在的管子好像不如從前的結(jié)實了。鄭州30K超濾離心管訂做使用超濾離心管時應(yīng)注意避免過度旋轉(zhuǎn)造成樣品變性或降解,并影響后續(xù)實驗結(jié)果。
實驗室常用的離心管有塑料的和玻璃的,一般塑料的用得較多,因為玻璃的離心管不能用在高速或者超速離心機上。塑料的離心管又有PC (聚碳酸酯)、PE (聚乙烯)、PP(聚丙烯)等材質(zhì)。PP的管子性能相對來說比較好。塑料的離心管透明或者半透明,可以直觀地看到樣品的離心情況,但是比較容易變形,抗有機溶劑的腐蝕性較差,所以使用壽命較短。因此,實驗室一般會經(jīng)常購買離心管。PC (聚碳酸酯):透明度較好,硬度大,可以高溫消毒,但不耐強酸強堿以及一些有機溶劑如酒精之類。主要用于5萬轉(zhuǎn)以上的超高速離心。PE(聚乙烯):不透明。和丙銅、醋酸、鹽酸等不反應(yīng),較為穩(wěn)定,高溫下容易變軟。PP(聚丙烯):半透明,化學(xué)及溫度穩(wěn)定性較好,但是在低溫下會變脆,所以在離心時不要在4℃以下。
可以通過多個超濾管同時超濾來降低濃度,而后者通過改變不同的緩沖液直到?jīng)]有蛋白質(zhì)沉淀。用來濃縮蛋白質(zhì)的。如果要更換緩沖液,當(dāng)總蛋白溶液濃縮到1毫升左右時,輕輕添加一個新的緩沖液〈用0.22um超濾膜超濾后〉,然后連續(xù)濃縮到1毫升左右。濃縮液的之后體積取決于所需的蛋白質(zhì)濃度,通常不超過500 ul,但也要濃縮到200 ul以下。根據(jù)每次至少10次的體積濃度計算,1000次以上的3次基本可以達(dá)到更換緩沖器的目的。提取之后濃縮蛋白的操作在冰上進(jìn)行。黃色設(shè)備頭(200ul)用于提取之后的蛋白質(zhì)濃縮物。設(shè)備頭沿設(shè)備頭邊緣輕輕插入。將蛋白溶液輕輕吹勻。注意不要觸摸超濾膜。吸取濃縮液,一次較多吸200 ul,直至耗盡。之后留在管底的濃縮液不需要吸收,否則太困難,可能損壞超濾膜。之后,在無超濾膜的超濾管中加入milliq水,以防止超濾膜干燥。超濾離心管還可用于檢測環(huán)境樣本中的微生物、重金屬等有害物質(zhì)。
根據(jù)其大小,又分為1.5ml、2ml、5ml、10ml、15ml、50ml等,國產(chǎn)的離心管一般就是這幾個規(guī)格,用的較多的也就是10ml和50ml的。如果您的離心機是配30ml或者其他規(guī)格的離心管時,就要考慮進(jìn)口的了。另外,離心管還有圓底和尖底,以及螺旋蓋和插蓋之分。螺旋蓋的離心管帶有較精細(xì)的刻度,插蓋的只有一個總體的容量標(biāo)示。實驗室常用的離心管有塑料的和玻璃的,一般塑料的用的較多,因為玻璃的離心管不能用在高速或者超速離心機上。塑料的離心管又有PP(聚丙烯)、PC(聚碳酸酯),PE(聚乙烯)等材質(zhì)。PP的管子性能相對來說比較好。塑料的離心管透明或者半透明,可以直觀的看到樣品離心情況,但是比較容易變形,抗有機溶劑的腐蝕性較差,所以使用壽命較短。因此,實驗室一般會經(jīng)常購買離心管。使用超濾離心管時要注意控制轉(zhuǎn)速,以避免過度旋轉(zhuǎn)導(dǎo)致超濾膜損壞或溢出樣品。嘉興3K超濾離心管咨詢
離心機轉(zhuǎn)速會影響到超濾效果,因此需要根據(jù)實驗要求調(diào)整相應(yīng)的轉(zhuǎn)速。紹興30K超濾離心管咨詢
超濾離心管具有快速超濾功能,能夠達(dá)到較高的濃縮倍數(shù),輕松實現(xiàn)從稀釋和復(fù)雜的混和樣本中濃縮回收目的產(chǎn)物。垂直設(shè)計的超濾膜以及較大的有效濾膜表面積有助于快速的樣本處理,獲得較高樣本回收率(通常>90%),并達(dá)到30倍的濃縮。產(chǎn)品特點:超濾離心管設(shè)計用于體外診斷,包括分析濃縮血清、尿液、腦脊液和其他體液;*內(nèi)附膜可高效回收分子量范圍的有效成分;*截留回收率高達(dá)80%以上;*標(biāo)注濃縮量為200μl;*使用固定轉(zhuǎn)子離心機時,較大處理樣本量為10ml,較大RCF為5000xg;*使用吊桶式離心機時,較大處理樣本量為12ml,較大RCF為4000xg;*熱密封膜較大限度地減少了下游提取物;*垂直膜的設(shè)計減少濃縮所用時間(10-15分鐘);*管體有帶刻度印刷標(biāo)識及可寫入文字的白色的區(qū)域;*經(jīng)過嚴(yán)格的泄漏測試。紹興30K超濾離心管咨詢