廈門細胞生物學電生理膜片鉗研究方案

膜片鉗記錄的幾種形式：細胞吸附膜片(cell-attachedpatch)將兩次拉制后經加熱拋光的微管電極置于清潔的細胞膜表面上，形成高阻封接，在細胞膜表面隔離出一小片膜，既而通過微管電極對膜片進行電壓鉗制，高分辨測量膜電流，稱為細胞貼附膜片。由于不破壞細胞的完整性，這種方式又稱為細胞膜上的膜片記錄。此時跨膜電位由玻管固定電位和細胞電位決定。因此，為測定膜片兩側的電位，需測定細胞膜電位并從該電位減去玻管電位。從膜片的通道活動看，這種形式的膜片是極穩(wěn)定的，因細胞骨架及有關代謝過程是完整的，所受的干擾小。全自動膜片鉗系統技術指標：信號準確，噪聲少，使用了先進的微型“法拉第板”替代傳統的“法拉第籠”。廈門細胞生物學電生理膜片鉗研究方案

膜片鉗在通道研究中的重要作用：用膜片鉗技術可以直接觀察和分辨單離子通道電流及其開閉時程、區(qū)分離子通道的離子選擇性、同時可發(fā)現新的離子通道及亞型，并能在記錄單細胞電流和全細胞電流的基礎上進一步計算出細胞膜上的通道數和開放概率，還可以用以研究某些胞內或胞外物質對離子通道開閉及通道電流的影響等。同時用于研究細胞信號的跨膜轉導和細胞分泌機制。結合分子克隆和定點突變技術，膜片鉗技術可用于離子通道分子結構與生物學功能關系的研究。莆田細胞生物學腦片膜片鉗原理及步驟膜片鉗的數據如何處理：通過滲透很快改變胞漿成分并達到平衡。

膜片鉗技術本質上也屬于電壓鉗范疇，兩者的區(qū)別關鍵在于：①膜電位固定的方法不同；②電位固定的細胞膜面積不同，進而所研究的離子通道數目不同。電壓鉗技術主要是通過保持細胞跨膜電位不變，并迅速控制其數值，以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況。因此只能用來研究整個細胞膜或一大塊細胞膜上所有離子通道活動。目前電壓鉗主要用于巨大細胞的全性能電流的研究，特別在分子克隆的卵母細胞表達電流的鑒定中發(fā)揮著其他技術不能替代的作用。

膜片鉗電生理技術服務記錄的幾種形式：全細胞記錄構型(whole-cell recording)　高阻封接形成后，繼續(xù)以負壓抽吸使電極管內細胞膜破裂，電極胞內液直接相通，而與浴槽液絕緣，這種形式稱為“全細胞”記錄。它既可記錄膜電位又可記錄膜電流。其中膜電位可在電流鉗情況下記錄，或將玻管連到標準高阻微電極放大器上記錄。在電壓鉗條件下記錄到的大細胞全細胞電流可達nA級，全細胞鉗的串聯電阻(玻管和細胞內部之間的電阻)應當補償。任何流經膜的電流均流經這一電阻，所引起的電壓降將使玻管電壓不同于細胞內的真正電位。電流愈大，愈需對串聯電阻進行補償。全自動膜片鉗系統技術指標：藥液交換迅速。細胞內、外液的交換是在平面芯片上進行。

膜片鉗技術操作方法：實驗前準備:打開總電源及穩(wěn)壓電源，打開電腦、放大器，并開啟程序軟件，新建數據文檔并準備開始試驗;用P97微電極拉制儀拉制玻璃電極若干備用;檢查減震臺的減震效果，打開倒置顯微鏡，監(jiān)視器和微操備用，取-血細胞將其中玻片取出放入小培美血中，置于倒置顯微鏡下，于低倍鏡下尋找狀態(tài)良好的細胞，并轉入高倍鏡下再次確認細胞狀態(tài)及貼壁情況等，確認細胞后，取電極一根充灌電極內液，彈出氣泡，然后套入銀絲并插入探頭中扭緊旋鈕，用注射器管道給電極一點點正壓，將電極入水，入水后，查案入水電阻，要在4-8M左右的電極才可以使用，通過調節(jié)微操，使電極不斷向下接近細胞，待電極尖銳端逐漸變清晰并且將要接近細胞時停止向下，然后把電極移到細胞上方調節(jié)放大器上的調零旋鈕以保證基線在零水平。膜片鉗使用的注意事項：安裝玻璃微電極時，電極應與銀絲平行，防止刮蹭銀絲電極。莆田全自動實用膜片鉗應用

膜片鉗使用操作注意：不得在本機電腦下載別的軟件，拷數據時需用實驗室配置的U盤。廈門細胞生物學電生理膜片鉗研究方案

膜片鉗技術是通過微玻管電極（膜片電極或膜片吸管）接觸細胞膜，用千兆歐姆以上的阻抗使之封接，在電學上分隔和電極尖開口處相接的細胞膜的小區(qū)域（膜片）以及其周圍，在此基礎上固定點位，對這膜片上的離子通道的離子電流（pA級）進行監(jiān)測記錄的方法。測量回路的中心部分是使用場效應管運算放大器構成的I-V轉換器。當場效應管運算放大器的正負輸入端子是等電位，向正輸入端子施加指令電位時，因為短路負端子以及膜片都可等電位地達到鉗制的作用，字膜片微電極與默片之間形成10GΩ以上封接時，其間達到很小的分流電流。廈門細胞生物學電生理膜片鉗研究方案

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