寧波藥理學實用膜片鉗研究方案

膜片鉗實驗常見問題及解決方法：膜片鉗技術(shù)是電生理記錄的常用手段，目前在科學研究中使用越來越普遍。但在具體膜片鉗實驗操作的過程中，總會遇到各種各樣的問題，對實驗人員造成很多困擾。本次講座主要從實驗角度出發(fā)，以簡單，實用的原則，著重講解實驗中遇到的各種問題，以及解決方法。從選擇實驗樣本開始，按照一般實驗進行的順序，逐步延伸，一直到如何搭建自己個性化的膜片鉗系統(tǒng)，使大家對膜片鉗的基礎(chǔ)知識以及膜片鉗實驗中遇到的各種典型問題及解決辦法有系統(tǒng)的了解。全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標：擴展功能多。配套擴展設(shè)備豐富，如內(nèi)灌流系統(tǒng)、脂質(zhì)體制備器等。寧波藥理學實用膜片鉗研究方案

膜片鉗技術(shù)—打開細胞電生理研究之門：膜片鉗技術(shù)（patchclamptechniques）是采用鉗制電壓或電流的方法對生物膜上離子通道的電活動進行記錄的微電極技術(shù)。膜片鉗技術(shù)的原理：用一個尖銳端直徑在1.5-3.0um的玻璃微電極接觸細胞膜表面，通過負壓吸引使電極尖銳端與細胞膜之間形成千兆歐姆以上的阻抗封接，此時電極尖銳端下的細胞膜小區(qū)域（膜片,patch）與其周圍在電學上分隔，在此基礎(chǔ)上固定（鉗制,Clamp）電位，對此膜片上的離子通道的離子電流進行監(jiān)測及記錄。南通神經(jīng)生物學腦定位膜片鉗技術(shù)膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍：在神經(jīng)科學中的研究。

膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇，兩者的區(qū)別關(guān)鍵在于：①膜電位固定的方法不同；②電位固定的細胞膜面積不同，進而所研究的離子通道數(shù)目不同。電壓鉗技術(shù)主要是通過保持細胞跨膜電位不變，并迅速控制其數(shù)值，以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況。因此只能用來研究整個細胞膜或一大塊細胞膜上所有離子通道活動。目前電壓鉗主要用于巨大細胞的全性能電流的研究，特別在分子克隆的卵母細胞表達電流的鑒定中發(fā)揮著其他技術(shù)不能替代的作用。

膜片鉗芯片技術(shù)是繼細胞芯片之后的又一種嶄新的分析細胞電生理參數(shù)的芯片技術(shù)。由于該芯片除了具有傳統(tǒng)膜片鉗的高分辨和高準確性特點外,還具有高通量、自動化以及細胞多通道參數(shù)和細胞網(wǎng)絡(luò)參數(shù)在線和實時檢測等優(yōu)點.因此,該芯片技術(shù)將很大促進細胞離子通道、細胞網(wǎng)絡(luò)傳導以及藥物篩選的研究和應(yīng)用。具體介紹了膜片鉗芯片技術(shù)的發(fā)展及其應(yīng)用,結(jié)合研究工作,著重介紹了膜片鉗芯片技術(shù)在味覺細胞研究的比較新進展,并結(jié)合神經(jīng)芯片研究細胞網(wǎng)絡(luò)的方法,對采用膜片鉗芯片技術(shù)在細胞和分子水平上研究味覺的敏感機理和傳導機制的應(yīng)用前景進行了展望。膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍：對單細胞形態(tài)與功能關(guān)系的研究。

膜片鉗使用的注意事項：工作原理膜片鉗是一種能夠直接觀察單一的離子通道蛋白質(zhì)分子對相應(yīng)離子通透難易程度等特性的一種實驗技術(shù)。它的基本原理是以一個光潔，直徑約為0.5~3um的玻璃微電極同神經(jīng)或肌細胞的膜接觸，之后對微電極另一端開口處施加適當?shù)呢搲河秒姌O的纖細開口將與電極接觸的那一小片膜輕度吸入，如此在微電極開口處的玻璃邊沿以及這一小片膜周邊會形成緊密的封接，它的電阻能夠達到數(shù)個或數(shù)十個千兆歐，這世界上就是在化學上完全隔離了吸附在微電極開口處的那一片膜同膜的其余部分，通過微電極記錄到的電流變化光光和該膜片中通道分子的功能狀態(tài)相關(guān)聯(lián)。膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面，使之形成10~100MΩ的高阻封接，被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級，因此封接范圍內(nèi)細胞膜光有少數(shù)離子通道。膜片鉗和電壓鉗的區(qū)別：電位固定的細胞膜面積不同，進而所研究的離子通道數(shù)目不同。寧波藥理學實用膜片鉗研究方案

膜片鉗放大器工作模式可以是電壓鉗，也可以是電流鉗。寧波藥理學實用膜片鉗研究方案

膜片鉗操作實驗：膜片鉗放大器是整個實驗系統(tǒng)中的中心，它可用來作單通道或全細胞記錄，其工作模式可以是電壓鉗，也可以是電流鉗。從原理來說，膜片鉗放大器的探頭電路即I-V變換器有兩種基本結(jié)構(gòu)形式，即電阻反饋式和電容反饋式，前者是一種典型的結(jié)構(gòu)，后者因用反饋電容取代了反饋電阻，降低了噪聲，所以特別適合很低噪聲的單通道記錄。由于供膜片鉗實驗的專門計算機硬件及相應(yīng)的軟件程序的相繼出現(xiàn)，使得膜片鉗實驗操作簡便、效率提高。如與膜片鉗放大器（內(nèi)含ITC-16數(shù)據(jù)采集/接口卡）配套使用的軟件PULSE/PULSEFIT，它既可產(chǎn)生刺激波形，控制數(shù)據(jù)采集，又可分析數(shù)據(jù)，同時具有用于膜電容監(jiān)測的鎖相放大器，多種軟件功能集成于一體。寧波藥理學實用膜片鉗研究方案

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