膜片鉗電生理記錄技術(shù):膜片鉗技術(shù)的基本原理:膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級,因此封接范圍內(nèi)細胞膜光有少數(shù)離子通道。然后對該膜片實行電壓鉗位,測量單個離子通道開放產(chǎn)生的微小電流,這種通道的開放是一種隨機過程。通過觀測單個通道開放的電流幅值分布、開放概率、開放壽命分布等功能參數(shù),并分析它們與膜電位、離子濃度等之間的關(guān)系。將該部分細胞采用負壓吸破,可以形成比較常見的全細胞記錄模式,可以研究整個細胞的生理功能和離子通道電生理功能。膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍:對單細胞形態(tài)與功能關(guān)系的研究。常州藥理學膜片鉗設(shè)計公司
膜片鉗記錄的幾種形式:細胞吸附膜片(cell-attachedpatch)將兩次拉制后經(jīng)加熱拋光的微管電極置于清潔的細胞膜表面上,形成高阻封接,在細胞膜表面隔離出一小片膜,既而通過微管電極對膜片進行電壓鉗制,高分辨測量膜電流,稱為細胞貼附膜片。由于不破壞細胞的完整性,這種方式又稱為細胞膜上的膜片記錄。此時跨膜電位由玻管固定電位和細胞電位決定。因此,為測定膜片兩側(cè)的電位,需測定細胞膜電位并從該電位減去玻管電位。從膜片的通道活動看,這種形式的膜片是極穩(wěn)定的,因細胞骨架及有關(guān)代謝過程是完整的,所受的干擾小。福州神經(jīng)生物學膜片鉗全細胞記錄技術(shù)全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標:軟件的功能全部,可按照操作者設(shè)定的參數(shù)方案自動執(zhí)行實驗。
膜片鉗實驗中電極制備的要求:合格的膜片微電極是成功封接細胞膜的基本條件。要成功的封接細胞膜需要兩方面的因素保證,一是設(shè)法造成干凈的細胞膜表面,二是制成合格的電極。首先要選擇適當?shù)牟A毠?,其材料可使用軟質(zhì)玻璃(蘇打玻璃、電石玻璃)或硬質(zhì)玻璃(硼硅玻璃、鋁硅玻璃、石英玻璃)。軟玻璃電極常用于作全細胞記錄,硬質(zhì)玻璃因?qū)щ娐实?、噪聲小而常用于離子單通道記錄。膜片微電極是將玻璃毛細管用電極拉制儀拉制而成的,制作分三步進行:一是分兩次拉制;第二步是在電極前端涂以硅酮樹脂(sylgard);第三步是拋光。
膜片鉗使用的注意事項:1.為了防止塵埃、靜電傷害機器,每天做實驗前請用清水拖地。2.拉制儀使用前需預熱15-30min。3.銀絲電極及地線發(fā)白時,請先用砂紙輕微打磨,再浸入新鮮的次氯酸鈉溶液鍍氯化銀,如果銀絲電極30min未變黑,則考慮更換次氯酸鈉。4.先開放大器,后開軟件;先關(guān)軟件,后關(guān)放大器。5.非必須用到汞燈時請不要打開汞燈電源,打開后至少需1個小時才可關(guān)閉。6.在放大器打開時不能用手、金屬物品或其它導電的物品接觸電極絲(包括地線),在取放細胞片時請關(guān)閉放大器。膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級,因此封接范圍內(nèi)細胞膜光有少數(shù)離子通道。膜片鉗使用的注意事項:為了防止塵埃、靜電傷害機器,每天做實驗前請用清水拖地。膜片鉗的應(yīng)用:與藥物作用有關(guān)的心肌離子通道。
膜片鉗技術(shù)的基本原理和方法:膜片鉗使用的基本方法是,把經(jīng)過加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進器的操縱下,與清潔處理過的細胞膜形成高阻抗封接,導致電極內(nèi)膜片與電極外的膜在電學上和化學上隔離起來,由于電性能隔離與微電極的相對低電阻(1~5MΩ)只要對微電極施以電壓就能對膜片進行鉗制,從微電極引出的微小離子電流通過高分辨、低噪聲、高保真的電流-電壓轉(zhuǎn)換放大器輸送至電子計算機進行分析處理。膜片鉗技術(shù)實現(xiàn)的關(guān)鍵是建立高阻抗封接,并能通過特定的記錄儀器反映這些變化。膜片鉗和電壓鉗的區(qū)別:電壓鉗技術(shù)只能用來研究整個細胞膜或一大塊細胞膜上所有離子通道活動。連云港神經(jīng)生物學膜片鉗電生理技術(shù)網(wǎng)站
膜片鉗和電壓鉗的區(qū)別:電位固定的細胞膜面積不同,進而所研究的離子通道數(shù)目不同。常州藥理學膜片鉗設(shè)計公司
全自動膜片鉗的優(yōu)勢:自動化:抓取細胞、形成封接、破膜等整個實驗操作全部自動化,極大的節(jié)約實驗人員的時間精力。簡約化:傳統(tǒng)膜片鉗所需要的顯微鏡、顯微操作系統(tǒng)、微電極拉制儀,防震臺、屏蔽網(wǎng)等全都不需要。效率高:是傳統(tǒng)膜片鉗實驗效率的5-10倍。可靠性:實驗結(jié)果輕松復制。經(jīng)濟實惠:藥物消耗低,每次實驗記錄較低只需5μl內(nèi)外液體。零技術(shù)門檻:無需膜片鉗操作經(jīng)驗,輕松上手。高芯片封接:封接電阻可達1GΩ。確保實驗可靠性。兼容性強:可與市場上大多數(shù)放大器兼容。應(yīng)用范圍廣:除擁有傳統(tǒng)膜片鉗功能外,還可以對手動膜片鉗無法涉及的亞細胞結(jié)構(gòu)進行記錄。擴展功能多:配套擴展設(shè)備豐富,如內(nèi)灌流系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、脂質(zhì)體制備器等。常州藥理學膜片鉗設(shè)計公司
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