膜片鉗電生理技術(shù):神經(jīng)元細(xì)胞膜上有離子通道,它們控制電荷流入和流出細(xì)胞,從而調(diào)節(jié)神經(jīng)元激發(fā)。一種用于研究這些通道的生物物理學(xué)特性的極為有用的技術(shù)被稱為膜片鉗記錄。在這種方法中,神經(jīng)科學(xué)家把拋光的玻璃微吸管置于細(xì)胞上通過吸力形成高電阻封接。這個(gè)過程分隔了一小"片"包含一種或多種離子通道的膜。通過微吸管中的電極,研究人員可以"鉗制"或控制膜的電屬性,這對分析通道活動很重要。該電極還能記錄跨膜電壓的變化,或離子通過膜的流動。在大多數(shù)膜片鉗實(shí)驗(yàn),要求所有實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備均具有良好的機(jī)械穩(wěn)定性。無錫全自動腦片膜片鉗設(shè)計(jì)公司
膜片鉗技術(shù)之全細(xì)胞記錄的優(yōu)點(diǎn):與傳統(tǒng)的細(xì)胞內(nèi)記錄相比,全細(xì)胞記錄也有很多好處,比如電極尖銳端開口較大,電阻只2~20MΩ,易于進(jìn)行電壓/電流鉗制,噪聲很大程度下降,電極電壓降也變得很小,補(bǔ)償非常容易。與單通道記錄相比,單通道記錄無法獲得整個(gè)細(xì)胞的功能變化信息,而全細(xì)胞記錄(尤其是腦片或在體記錄)所獲信息則能反映細(xì)胞功能(甚至細(xì)胞之間信息傳遞)的改變,加之易于更換細(xì)胞外液,所以,全細(xì)胞記錄更適用于對離子通道的藥理學(xué)研究,即加各種通道blocker啦,激動劑啦之類的。合肥醫(yī)學(xué)膜片鉗原理及步驟膜片鉗使用操作注意:不得在本機(jī)電腦下載別的軟件,拷數(shù)據(jù)時(shí)需用實(shí)驗(yàn)室配置的U盤。
膜片鉗使用的注意事項(xiàng):工作原理膜片鉗是一種能夠直接觀察單一的離子通道蛋白質(zhì)分子對相應(yīng)離子通透難易程度等特性的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)。它的基本原理是以一個(gè)光潔,直徑約為0.5~3um的玻璃微電極同神經(jīng)或肌細(xì)胞的膜接觸,之后對微電極另一端開口處施加適當(dāng)?shù)呢?fù)壓用電極的纖細(xì)開口將與電極接觸的那一小片膜輕度吸入,如此在微電極開口處的玻璃邊沿以及這一小片膜周邊會形成緊密的封接,它的電阻能夠達(dá)到數(shù)個(gè)或數(shù)十個(gè)千兆歐,這世界上就是在化學(xué)上完全隔離了吸附在微電極開口處的那一片膜同膜的其余部分,通過微電極記錄到的電流變化光光和該膜片中通道分子的功能狀態(tài)相關(guān)聯(lián)。
膜片鉗實(shí)驗(yàn)常見問題及解決方法:膜片鉗實(shí)驗(yàn)難度大、技術(shù)要求高,要掌握有關(guān)技術(shù)和方法雖不是很困難的事,但要從一大批的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中,經(jīng)過處理和分析,得出有意義、有價(jià)值的結(jié)果和結(jié)論,就顯得不那么容易,有許多需要注意和考慮的問題,包括減少噪音,避免電極前端的污染,提高封接成功率,具體實(shí)驗(yàn)過程中還需要考慮如何選取記錄模式,為記錄特定離子電流如何選擇電極內(nèi)、外液,如何選擇阻斷劑、激動劑,如何進(jìn)行正確的數(shù)據(jù)采集等許多更為復(fù)雜的問題,還需在科研實(shí)踐中不斷地探索和解決。膜片鉗使用的注意事項(xiàng):換液時(shí)應(yīng)時(shí)刻觀察浴槽,防止液面過低或液體溢出污染鏡頭。
全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo):1)操作簡單,全過程可自動化。2)實(shí)驗(yàn)迅速,通量高。一般每天可達(dá)到50個(gè)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)左右。3)藥液交換迅速。細(xì)胞內(nèi)、外液的交換是在平面芯片上進(jìn)行,所以藥液交換非常迅速,作用時(shí)間快,外灌流時(shí)間常數(shù):~200ms內(nèi)灌流時(shí)間常數(shù):~2s。4)藥物消耗極低。每次更換的外液只需十幾微升。5)信號準(zhǔn)確,噪聲少。使用了先進(jìn)的微型“法拉第板”替代傳統(tǒng)的“法拉第籠”,極大的減少了噪聲源,記錄數(shù)據(jù)的電噪音很低(小于300fA/500MΩ)。6)擴(kuò)展功能多。配套擴(kuò)展設(shè)備豐富,如內(nèi)灌流系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、脂質(zhì)體制備器等等。7)軟件強(qiáng)大。軟件的功能全部,可按照操作者設(shè)定的參數(shù)方案自動執(zhí)行實(shí)驗(yàn),進(jìn)行細(xì)胞吸附、封接和維持全細(xì)胞記錄模式;并兼容常規(guī)膜片鉗放大。膜片鉗使用操作注意:實(shí)驗(yàn)結(jié)束后必須關(guān)閉實(shí)驗(yàn)室的水電,檢查實(shí)驗(yàn)室門窗。連云港全自動腦片膜片鉗研究方案
全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo):藥液交換非常迅速,作用時(shí)間快。無錫全自動腦片膜片鉗設(shè)計(jì)公司
全自動膜片鉗的優(yōu)勢:自動化:抓取細(xì)胞、形成封接、破膜等整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作全部自動化,極大的節(jié)約實(shí)驗(yàn)人員的時(shí)間精力。簡約化:傳統(tǒng)膜片鉗所需要的顯微鏡、顯微操作系統(tǒng)、微電極拉制儀,防震臺、屏蔽網(wǎng)等全都不需要。效率高:是傳統(tǒng)膜片鉗實(shí)驗(yàn)效率的5-10倍??煽啃裕簩?shí)驗(yàn)結(jié)果輕松復(fù)制。經(jīng)濟(jì)實(shí)惠:藥物消耗低,每次實(shí)驗(yàn)記錄較低只需5μl內(nèi)外液體。零技術(shù)門檻:無需膜片鉗操作經(jīng)驗(yàn),輕松上手。高芯片封接:封接電阻可達(dá)1GΩ。確保實(shí)驗(yàn)可靠性。兼容性強(qiáng):可與市場上大多數(shù)放大器兼容。應(yīng)用范圍廣:除擁有傳統(tǒng)膜片鉗功能外,還可以對手動膜片鉗無法涉及的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行記錄。擴(kuò)展功能多:配套擴(kuò)展設(shè)備豐富,如內(nèi)灌流系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、脂質(zhì)體制備器等。無錫全自動腦片膜片鉗設(shè)計(jì)公司
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