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胎牛血清:胎牛血清用于細(xì)胞培養(yǎng)已經(jīng)超過(guò)半個(gè)世紀(jì)了,20世紀(jì)50年代末TheodorePuck在細(xì)胞和組織培養(yǎng)中初次加入胎牛血清(FBS)來(lái)刺激細(xì)胞生長(zhǎng)。后來(lái)人們發(fā)現(xiàn),由于胎牛未進(jìn)食過(guò)母乳,所以IgG的含量極低,不會(huì)阻礙細(xì)胞生長(zhǎng),而且胎牛血清中含有豐富的促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的成分,如維生素、運(yùn)輸?shù)鞍?、微量元素、生長(zhǎng)因子等,胎牛血清生產(chǎn)的一切環(huán)節(jié)均有嚴(yán)格的質(zhì)量把控。出廠的血清無(wú)細(xì)菌、支原體和病毒等微生物的威脅,且內(nèi)的毒性含量低,滿足絕大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)需求。有些情況下胎牛血清結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到釋放毒性作用。南京標(biāo)準(zhǔn)血清價(jià)格
胎牛血清如何采取?在牛屠宰過(guò)程中,如發(fā)現(xiàn)母牛懷孕,就應(yīng)立即將生殖系統(tǒng)從尸體中分離出來(lái),在無(wú)菌條件下從子宮中取出小牛,進(jìn)行臍帶打結(jié)處理,清理羊水并消毒。在胎兒兩肋之間直接插入一根針頭到心臟,在真空的條件下,血液通過(guò)導(dǎo)管被抽入無(wú)菌的血液收集袋內(nèi)。在沒(méi)有真空泵時(shí),也可將血液收集袋放在胎牛身體下面,通過(guò)重力作用或按摩方式進(jìn)行收集。血液收集后,放在低溫條件下凝集,經(jīng)過(guò)離心去掉凝集物而獲得血清。胎牛血清的獲得量取決于胎兒的大小和年齡。胎兒至少3個(gè)月,否則會(huì)因心臟太小而不便于操作。一個(gè)3月齡的胎兒可產(chǎn)生150mL的血清;6月齡和9月齡的胎兒可分別產(chǎn)生350mL和550mL血清。廈門(mén)優(yōu)等血清哪家好胎牛血清提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物,以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。
胎牛血清對(duì)細(xì)胞貼壁中的作用:在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),大部分來(lái)自實(shí)體組織感官的細(xì)胞會(huì)貼壁。它們?cè)跈C(jī)體內(nèi)時(shí),也是與其他細(xì)胞或者細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)合的,貼壁對(duì)維持細(xì)胞的良好形態(tài)和促進(jìn)細(xì)胞的增殖有益處。有人培養(yǎng)許旺細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)貼壁良好的細(xì)胞,其增殖率也較高。人的造血干細(xì)胞培養(yǎng),更是需要有貼壁細(xì)胞構(gòu)成“造血微環(huán)境”。有人發(fā)現(xiàn)這些貼壁細(xì)胞包括成纖維細(xì)胞,巨噬細(xì)胞,上皮樣細(xì)胞,脂肪細(xì)胞,它們交錯(cuò)連接,構(gòu)成網(wǎng)狀支架結(jié)構(gòu)。培養(yǎng)基中加入牛血清,對(duì)于粘附細(xì)胞的貼壁也很有幫助。牛血清中含有玻連蛋白、纖黏連蛋白,對(duì)細(xì)胞粘附都有促進(jìn)作用。需注意,熱滅活小牛血清會(huì)降低血清對(duì)細(xì)胞粘附的促進(jìn)作用,尤其在細(xì)胞旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)時(shí)更為明顯。
活性炭處理胎牛血清的應(yīng)用:活性炭處理胎牛血清主要用于受體研究和雌Hormone相關(guān)的細(xì)胞研究實(shí)驗(yàn)。同時(shí)活性炭處理胎牛血清極大的降低了多種Hormone和生長(zhǎng)因子,減少了影響細(xì)胞生化分析的干擾因子。性炭處理胎牛血清減少了血清中的類固醇類化合物,3x100nm無(wú)菌過(guò)濾內(nèi)的毒性≤10EU/mL,血紅素≤20mg/dL。胎牛血清是一種性狀、外觀淺黃色澄清、無(wú)溶血、無(wú)異物稍粘稠液體。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。顯然,胎牛血清是品質(zhì)較高的,因?yàn)樘ヅ_€未接觸外界,血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分較少。熱滅活目的是為了去除血清中補(bǔ)體等對(duì)熱敏感的物質(zhì),但是在胎牛血清中對(duì)補(bǔ)體的滅活則明顯沒(méi)有必要。
胎牛血清制備:離心,將準(zhǔn)備好的瓶放入離心套筒調(diào)好平衡后,對(duì)稱放入離心機(jī),按1800轉(zhuǎn)/分鐘離心50分鐘后,放入4℃冷庫(kù)備用。抽血清,取出4℃冷庫(kù)離心好的瓶,注意輕抬輕放,以免將下層血塊和血清混層。將經(jīng)過(guò)高壓滅菌裝有兩孔瓶塞的5000ml大瓶的抽氣孔一端的管子接好空氣濾器,再接到壓縮機(jī)抽氣口上。打開(kāi)壓縮機(jī),用抽血清孔的管子輕輕抽取采的血瓶?jī)?nèi)的上清液,注意控制好抽管,避免抽到下層血塊。將抽好的血清分裝,即為粗制胎牛血清,放入-20℃冷庫(kù)冷藏備用。血清的成份可能有幾百種之多,對(duì)其準(zhǔn)確的成份、含量及其作用機(jī)制仍不清楚。衢州進(jìn)口胎牛血清廠家
胎牛血清的無(wú)菌檢驗(yàn):陰性;支原體檢驗(yàn): 陰性;細(xì)菌內(nèi)有毒的 ≤5(EU/ml)。南京標(biāo)準(zhǔn)血清價(jià)格
胎牛血清中沉淀物該如何處理?胎牛血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,但較普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,也會(huì)存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但少量這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質(zhì)量。所有胎牛血清均在當(dāng)?shù)孬F醫(yī)部門(mén)的監(jiān)督下從注冊(cè)的出口屠場(chǎng)采集,符合國(guó)際動(dòng)物協(xié)會(huì)要求。胎牛血清參與細(xì)胞培養(yǎng),是細(xì)胞生長(zhǎng)天然的培養(yǎng)基,它為細(xì)胞提供生長(zhǎng)因子、結(jié)合蛋白、脂質(zhì)、礦物質(zhì)、黏附和鋪展因子等來(lái)促進(jìn)體外細(xì)胞培養(yǎng)。南京標(biāo)準(zhǔn)血清價(jià)格
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