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來源: 發(fā)布時間:2023-06-25

膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理:全細(xì)胞式膜片方式使細(xì)胞內(nèi)與浴槽之間的漏流極少。電極本身阻抗(1~10mω)與細(xì)胞封接后的阻抗相比較低,這種低接觸阻抗使單管電壓鉗容易實(shí)現(xiàn)。電極管內(nèi)與細(xì)胞之間彌散交換與平衡快,因而容易控制細(xì)胞內(nèi)液的成分。細(xì)胞鉗記錄的是許多通道的平均電流,有利于綜合分析。如果有目的地將膜電位鉗制在某一程度,可做到選擇性抑制某些通道的活性而只記錄某種通道電流的總和,并可在同一細(xì)胞上觀察幾種不同通道的情況。通過改變內(nèi)部介質(zhì),如改變電極液成分,或在電極液中加入所需藥物,通過滲透很快改變胞漿成分并達(dá)到平衡,該手段在全細(xì)胞記錄中廣泛應(yīng)用。膜片鉗實(shí)驗(yàn)要從一大批的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中,經(jīng)過處理和分析,得出有意義、有價值的結(jié)果和結(jié)論。紹興醫(yī)學(xué)膜片鉗電生理技術(shù)網(wǎng)站

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全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo):1)操作簡單,全過程可自動化。2)實(shí)驗(yàn)迅速,通量高。一般每天可達(dá)到50個實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)左右。3)藥液交換迅速。細(xì)胞內(nèi)、外液的交換是在平面芯片上進(jìn)行,所以藥液交換非常迅速,作用時間快,外灌流時間常數(shù):~200ms內(nèi)灌流時間常數(shù):~2s。4)藥物消耗極低。每次更換的外液只需十幾微升。5)信號準(zhǔn)確,噪聲少。使用了先進(jìn)的微型“法拉第板”替代傳統(tǒng)的“法拉第籠”,極大的減少了噪聲源,記錄數(shù)據(jù)的電噪音很低(小于300fA/500MΩ)。6)擴(kuò)展功能多。配套擴(kuò)展設(shè)備豐富,如內(nèi)灌流系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、脂質(zhì)體制備器等等。7)軟件強(qiáng)大。軟件的功能全部,可按照操作者設(shè)定的參數(shù)方案自動執(zhí)行實(shí)驗(yàn),進(jìn)行細(xì)胞吸附、封接和維持全細(xì)胞記錄模式;并兼容常規(guī)膜片鉗放大。連云港醫(yī)學(xué)電生理膜片鉗研究方案膜片鉗使用的注意事項(xiàng):干燥季節(jié)請先用手觸摸金屬框架釋放身體的靜電。

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膜片鉗的應(yīng)用:對藥物作用機(jī)制的研究:在通道電流記錄中,可分別于不同時間、不同部位(膜內(nèi)或膜外)施加各種濃度的藥物,研究它們對通道功能的可能影響,了解那些選擇性作用于通道的藥物影響人和動物生理功能的分子機(jī)理。這是膜片鉗技術(shù)應(yīng)用較普遍的領(lǐng)域,既有對西藥藥物機(jī)制的探討,也普遍用在重要藥理的研究上。如開麗等報道細(xì)胞貼附式膜片鉗單通道記錄法觀測到人參二醇組皂苷可抑制正常和“缺血”誘導(dǎo)的大鼠大腦皮層神經(jīng)元L-型鈣通道的開放,從而減少鈣內(nèi)流,對缺血細(xì)胞可能有保護(hù)作用。陳龍等報道采用細(xì)胞貼附式單通道記錄法發(fā)現(xiàn)烏頭堿對培養(yǎng)的Wistar大鼠心室肌細(xì)胞L-型鈣通道有阻滯作用。

膜片鉗電生理紀(jì)錄系統(tǒng)及記錄方法:細(xì)胞膜由雙層脂膜組成,具有密封絕緣的特性,因此當(dāng)紀(jì)錄 電極接觸到細(xì)胞膜時電阻會開始上升,然后以人工方式對紀(jì)錄電極內(nèi)施加一個負(fù)壓,可以讓電極與胞膜之間吸附得更為緊密而電阻也會加速上升,當(dāng)紀(jì)錄電極的電阻達(dá)到千兆歐姆(Giga Ω)時,意味著細(xì)胞膜與電極之間幾乎沒有電流漏出,之后對電極內(nèi)壓力施以一個快速的負(fù)壓將細(xì)胞膜吸破,這樣紀(jì)錄電極與細(xì)胞胞體之間會形成一個封閉的電容,此時就可以開始對細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。膜片鉗是一種能夠直接觀察單一的離子通道蛋白質(zhì)分子對相應(yīng)離子通透難易程度等特性的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)。

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膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理:穿孔膜片(perforated patch)是為克服常規(guī)全細(xì)胞模式的胞質(zhì)滲漏問題,有學(xué)者將與離子親和的制霉菌素或二性霉素b經(jīng)微電極灌流到含有類甾醇的細(xì)胞膜上,形成只允許一價離子通過的孔,用此法在膜片上做很多導(dǎo)電性孔道,借此對全細(xì)胞膜電流進(jìn)行記錄。由于此模式的胞質(zhì)滲漏極為緩慢,局部串聯(lián)阻抗較常規(guī)全細(xì)胞模式高,所以鉗制速度很慢,也稱為緩慢全細(xì)胞模式。它適合于小細(xì)胞的電壓鉗位,對于直徑大于30μm的細(xì)胞很難實(shí)現(xiàn)鉗位。不足之處是由于電極與細(xì)胞間交換快,細(xì)胞內(nèi)環(huán)境很容易破壞,因此記錄所用的電極液應(yīng)與胞漿主要成分相同,如高k+,低na+和ca2+及一定的緩沖成分和能量代謝所需的物質(zhì)。全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo):外灌流時間常數(shù):~200ms;內(nèi)灌流時間常數(shù):~2s。合肥神經(jīng)生物學(xué)膜片鉗技術(shù)供應(yīng)商

膜片鉗在通道研究中的重要作用:利用膜片鉗技術(shù)還可以用于藥物在其靶受體上作用位點(diǎn)的分析。紹興醫(yī)學(xué)膜片鉗電生理技術(shù)網(wǎng)站

膜片鉗技術(shù)的基本原理和方法:膜片鉗技術(shù)是在電壓鉗技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的,電壓鉗是利用負(fù)反饋技術(shù)將膜電位在空間和時間上固定于某一測定值,以研究動作電位產(chǎn)生過程中膜的離子通透性與膜電位之間的依從關(guān)系。但電壓鉗只能研究一個細(xì)胞上眾多通道的綜合活動規(guī)律,而無法反映單個通道的活動特點(diǎn),同時通過細(xì)胞內(nèi)微電極引導(dǎo)記錄的離子通道電流其背景噪聲太大。膜片鉗技術(shù)的優(yōu)勢是可利用負(fù)反饋電子線路,將微電極吸附的1μm2至幾個平方微米細(xì)胞膜的電位固定在一定水平上,對通過通道的微小離子電流作動態(tài)或靜態(tài)的觀察。紹興醫(yī)學(xué)膜片鉗電生理技術(shù)網(wǎng)站

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