紹興醫(yī)學(xué)實(shí)用膜片鉗網(wǎng)站

膜片鉗的技術(shù)原理：膜片鉗技術(shù)是用玻璃微電極吸管把只含1-3個(gè)離子通道、面積為幾個(gè)平方微米的細(xì)胞膜通過(guò)負(fù)壓吸引封接起來(lái)，由于電極尖銳端與細(xì)胞膜的高阻封接，在電極尖銳端籠罩下的那片膜事實(shí)上與膜的其他部分從電學(xué)上隔離，因此，此片膜內(nèi)開(kāi)放所產(chǎn)生的電流流進(jìn)玻璃吸管，用一個(gè)極為敏感的電流監(jiān)視器（膜片鉗放大器）測(cè)量此電流強(qiáng)度，就表示單一離子通道電流。膜片鉗技術(shù)的建立，對(duì)生物學(xué)科學(xué)特別是神經(jīng)科學(xué)是一具有重大意義的變革。這是一種以記錄通過(guò)離子通道的離子電流來(lái)反映細(xì)胞膜單一的（或多個(gè)）的離子通道分子活動(dòng)的技術(shù)。此技術(shù)的出現(xiàn)自然將細(xì)胞水平和分子水平的生理學(xué)研究聯(lián)系在一起，同時(shí)又將神經(jīng)科學(xué)的不同分野必然地融匯在一起，改變了既往各個(gè)分野互不聯(lián)系、互不滲透，阻礙人們?nèi)空J(rèn)識(shí)能力的弊端。膜片鉗使用的注意事項(xiàng)：安裝玻璃微電極時(shí)，電極應(yīng)與銀絲平行，防止刮蹭銀絲電極。紹興醫(yī)學(xué)實(shí)用膜片鉗網(wǎng)站

膜片鉗操作實(shí)驗(yàn)：膜片鉗放大器是整個(gè)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中的中心，它可用來(lái)作單通道或全細(xì)胞記錄，其工作模式可以是電壓鉗，也可以是電流鉗。從原理來(lái)說(shuō)，膜片鉗放大器的探頭電路即I-V變換器有兩種基本結(jié)構(gòu)形式，即電阻反饋式和電容反饋式，前者是一種典型的結(jié)構(gòu)，后者因用反饋電容取代了反饋電阻，降低了噪聲，所以特別適合很低噪聲的單通道記錄。由于供膜片鉗實(shí)驗(yàn)的專(zhuān)門(mén)計(jì)算機(jī)硬件及相應(yīng)的軟件程序的相繼出現(xiàn)，使得膜片鉗實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)便、效率提高。如與膜片鉗放大器（內(nèi)含ITC-16數(shù)據(jù)采集/接口卡）配套使用的軟件PULSE/PULSEFIT，它既可產(chǎn)生刺激波形，控制數(shù)據(jù)采集，又可分析數(shù)據(jù)，同時(shí)具有用于膜電容監(jiān)測(cè)的鎖相放大器，多種軟件功能集成于一體。嘉興藥理學(xué)膜片鉗技術(shù)原理全自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo)：實(shí)驗(yàn)迅速，通量高。一般每天可達(dá)到50個(gè)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)左右。

膜片鉗實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)：根據(jù)不同的電生理實(shí)驗(yàn)要求，可以組建不同的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，但有若干共同的基本部件，包括機(jī)械部分（防震工作臺(tái)、屏蔽罩、儀器設(shè)備架）、光學(xué)部分（顯微鏡、視頻監(jiān)視器、單色光系統(tǒng)）、電子部件（膜片鉗放大器、刺激器、數(shù)據(jù)采集的設(shè)備、計(jì)算機(jī)系統(tǒng)）和微操縱器在大多數(shù)膜片鉗實(shí)驗(yàn)，要求所有實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備均具有良好的機(jī)械穩(wěn)定性，以使微電極與細(xì)胞膜之間的相對(duì)運(yùn)動(dòng)盡可能小。防震工作臺(tái)放置倒置顯微鏡和與之固定連接的微操縱器，其他設(shè)備置于臺(tái)外。屏蔽罩由銅絲網(wǎng)制成，接地以防止周?chē)h(huán)境的雜散電場(chǎng)對(duì)膜片鉗放大器的探頭電路的干擾。儀器設(shè)備架要靠近工作臺(tái)，便于測(cè)量?jī)x器與光學(xué)儀器配接。

膜片鉗實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)，記錄和分析數(shù)據(jù)準(zhǔn)備工作就緒后即可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，數(shù)據(jù)記錄和分析。對(duì)電極持續(xù)施加一個(gè)1mV、10～50ms的階躍脈沖刺激，電極入水后電阻約4～6MΩ，此時(shí)在計(jì)算機(jī)屏幕顯示框中可看到測(cè)試脈沖產(chǎn)生的電流波形。開(kāi)始時(shí)增益不宜設(shè)得太高，一般可在1～5mV/pA，以免放大器飽和。由于細(xì)胞外液與電極內(nèi)液之間離子成分的差異造成了液結(jié)電位，故一般電極剛?cè)胨畷r(shí)測(cè)試波形基線并不在零線上，須首先將保持電壓設(shè)置為0mV，并調(diào)節(jié)“電極失調(diào)控制“使電極直流電流接近于零。用微操縱器使電極靠近細(xì)胞，當(dāng)電極尖銳端與細(xì)胞膜接觸時(shí)封接電阻指示Rm會(huì)有所上升，將電極稍向下壓，Rm指示會(huì)進(jìn)一步上升。通過(guò)細(xì)塑料管向電極內(nèi)稍加負(fù)壓，細(xì)胞膜特性良好時(shí)，Rm一般會(huì)在1min內(nèi)快速上升，直至形成GΩ級(jí)的高阻抗封接。一般當(dāng)Rm達(dá)到100MΩ左右時(shí)，電極尖銳端施加輕微負(fù)電壓(-30～-10mV)有助于GΩ封接的形成。此時(shí)的現(xiàn)象是電流波形再次變得平坦，使電極超極化由-40到-90mV，有助于加速形成封接。為證實(shí)GΩ封接的形成，可以增加放大器的增益，從而可以觀察到除脈沖電壓的首尾兩端出現(xiàn)電容性脈沖尖銳端電流之外，電流波形仍呈平坦?fàn)睢Ｈ詣?dòng)膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo)：信號(hào)準(zhǔn)確，噪聲少，使用了先進(jìn)的微型“法拉第板”替代傳統(tǒng)的“法拉第籠”。

膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍：①膜片鉗技術(shù)在通道中的研究；②與藥物作用有關(guān)的心肌離子通道研究；③對(duì)離子通道生理與病理作用機(jī)制的研究；④對(duì)單細(xì)胞形態(tài)與功能關(guān)系的研究；⑤對(duì)藥物作用機(jī)制的研究；⑥在心血管藥理方面的研究；⑦創(chuàng)新藥物研究與高通量篩選的研究；⑧在神經(jīng)科學(xué)中的研究?，F(xiàn)如今，膜片鉗技術(shù)已經(jīng)大為普及，并普遍活躍在離子通道相關(guān)的研究當(dāng)中。也許未來(lái)有1天，膜片鉗技術(shù)會(huì)過(guò)時(shí)，但兩百年來(lái)的探索歷程，數(shù)代學(xué)者們的心血，以及它在科學(xué)研究中的功績(jī)會(huì)一直被銘記。膜片鉗使用的注意事項(xiàng)：打雷天氣必須禁止膜片鉗實(shí)驗(yàn)。南京神經(jīng)生物學(xué)膜片鉗全細(xì)胞記錄服務(wù)

膜片鉗放大器工作模式可以是電壓鉗，也可以是電流鉗。紹興醫(yī)學(xué)實(shí)用膜片鉗網(wǎng)站

全自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo)：1）操作簡(jiǎn)單，全過(guò)程可自動(dòng)化。2）實(shí)驗(yàn)迅速，通量高。一般每天可達(dá)到50個(gè)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)左右。3）藥液交換迅速。細(xì)胞內(nèi)、外液的交換是在平面芯片上進(jìn)行，所以藥液交換非常迅速，作用時(shí)間快，外灌流時(shí)間常數(shù)：~200ms內(nèi)灌流時(shí)間常數(shù)：~2s。4）藥物消耗極低。每次更換的外液只需十幾微升。5）信號(hào)準(zhǔn)確，噪聲少。使用了先進(jìn)的微型“法拉第板”替代傳統(tǒng)的“法拉第籠”，極大的減少了噪聲源，記錄數(shù)據(jù)的電噪音很低(小于300fA/500MΩ)。6）擴(kuò)展功能多。配套擴(kuò)展設(shè)備豐富，如內(nèi)灌流系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、脂質(zhì)體制備器等等。7）軟件強(qiáng)大。軟件的功能全部，可按照操作者設(shè)定的參數(shù)方案自動(dòng)執(zhí)行實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行細(xì)胞吸附、封接和維持全細(xì)胞記錄模式；并兼容常規(guī)膜片鉗放大。紹興醫(yī)學(xué)實(shí)用膜片鉗網(wǎng)站

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