非正規(guī)胎牛血清的產(chǎn)品會存在很多的問題:疫區(qū)來源,無合格質(zhì)檢使胎牛血清存在生物學污染:支原體、噬菌體、病毒、原蟲等,會直接影響實驗的結果和穩(wěn)定。工藝不規(guī)范,導致采集的原血放置時間過長或操作不當導致溶血,血液中血細胞裂解,血清顏色呈紅色或暗紅色,這樣的血清含有許多胞內(nèi)產(chǎn)物,里面很多物質(zhì)都會對細胞有刺激作用,影響實驗的穩(wěn)定性和數(shù)據(jù)的真實性。血清批次不穩(wěn)定,添加來補?很多不法商販拿到低廉的疫區(qū)原料血清進行加工生產(chǎn),為了保障血清的培養(yǎng)效果會對血清進行處理,較為常見的是添加、轉鐵蛋白、BSA、生長因子等,還有的會和新生牛血清、培養(yǎng)基等勾兌,更有甚者用的根本就不是牛血清,此類操作對所有生物學實驗都有巨大的影響。血清可提供結合蛋白:結合蛋白作用是攜帶重要的低分子量物質(zhì)。蕪湖進口血清哪里有
較為低血清試驗的要求。內(nèi)有毒的檢測:內(nèi)有毒的,又叫脂多糖(LPS)或脂寡糖(LOS),存在于革蘭氏陰性菌的細胞外膜。臨床上,內(nèi)有毒的作為一些革蘭氏陰性菌的診斷提示,如腦膜炎球菌。動物體內(nèi),內(nèi)有毒的能夠導致發(fā)熱或者誘導炎癥反應;細胞培養(yǎng)中,內(nèi)有毒的能夠誘導細胞反應異常。通常,采用鱟阿米巴樣細胞裂解實驗(LAL檢測)檢測內(nèi)有毒的水平。LAL是從美洲鱟的血液中制備的,對內(nèi)有毒的非常靈敏,在微量內(nèi)有毒的存在情況下就凝結。阿米巴樣細胞相當于哺乳動物的白細胞。特異性血清及其加工方式,熱鈍化:胎牛血清的常規(guī)處理方式是熱鈍化,即放在56°水浴30分鐘;其目的是使血清中的補體成分及一些未知的細胞生長抑制分子失活。與胎牛血清的其它加工方式一樣,熱鈍化處理過程必須小心謹慎,因為血清中的生長因子容易在較高溫度或者較長時間加熱條件下失活,甚至產(chǎn)生沉淀。連云港標準胎牛血清經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物的形成會明顯增多。
血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清是血漿中不含纖維蛋白原的膠狀液體,具有維持血液的正常粘度、酸堿度、滲透壓等作用。它主要由水和各種化學成分組成,這些化學成分包括白蛋白,α1、α2、β、γ-球蛋白,甘油三酯,總膽固醇,谷丙轉氨酶等。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、、無機物等,這些物質(zhì)對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。
胎牛血清的整個生產(chǎn)流程可以分為原料采集,原料加工以及冷鏈運輸。原料采集作為胎牛血清整個生產(chǎn)流程的第一步也是關鍵的一步,對產(chǎn)品的較為終質(zhì)量起了決定性的影響。采集過程一般要求在各個血源地相關部門認證的農(nóng)場現(xiàn)場采集胎牛血漿,以確保采集對象為獸醫(yī)監(jiān)管下經(jīng)臨床檢查為健康的動物。同時,整個采集的過程還需要在無菌環(huán)境下進行,一些很好的供應商甚至提供了全封閉的采集系統(tǒng),徹底避免血清與空氣的接觸,這樣較為終的血清產(chǎn)品內(nèi)的內(nèi)有毒的以及血紅蛋白等成分才會維持在一個極低的水平,確保了獲取的原始血漿質(zhì)量。采集到了很好的原料,下一步就是對采集到的原料進行加工。原料到加工往往會涉及運輸?shù)倪^程,由于生物制品需要冷鏈運輸?shù)奶厥庑?,在原產(chǎn)地直接對原料進行加工是較為理想的情況,這樣可以較為大程度地避免交叉污染。血清對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用:有一些細胞,如內(nèi)皮細胞、骨髓樣細胞可以釋放蛋白酶。
很好的胎牛血清:好的血清應是透明清亮,土黃色或棕黃色,無沉淀或極少沉淀,比較粘稠。如發(fā)現(xiàn)血清渾濁,不透明,含許多沉淀物,說明血清污染或血清中的蛋白質(zhì)變性;若棕紅色,說明血清中的血紅蛋白含量太高,有溶血現(xiàn)象。胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml,數(shù)值偏高,說明的牛齡偏大,不是胎牛;數(shù)值偏低,表明血清可能摻水了。標準為不高于20mg/dl,顏色越紅,數(shù)值越高;反之,數(shù)值越低。國產(chǎn)血清,大多高于ph7.5,進口胎牛血清,大多低于ph7.5,具體原因未知,可能和牛齡有關,這也能用來初步鑒別血清的來源。小牛血清取自出生10-30天的小牛。連云港標準胎牛血清
熱滅活:一般是以56℃,30分鐘來處理已解凍的血清,因為此加熱步驟,可以使補體去活化。蕪湖進口血清哪里有
很好的胎牛血清對細胞成長的作用:提供細胞生長所需的天然或天然的生長因子。提供天然的結合蛋白,能識別氨基酸、脂質(zhì)、金屬離子和等,能結合并調(diào)節(jié)它們的活性。已知清蛋白即具有上述功能,并對細胞代謝、生物合成、增殖和存活具有潛在的影響。又如胎牛血清中富含胎球蛋白,具有多個鈣離子結合位點,因而能調(diào)節(jié)和維持血清中的鈣離子濃度。天然含有粘附蛋白等細胞外基質(zhì)成分,促進細胞的附著、鋪展。提供醫(yī)治功能。這主要通過血清中的某些蛋白與有毒的金屬離子結合來完成的。如金屬硫蛋白,對多種重金屬有高度親和性,并可消除細胞生長環(huán)境中的氧自由基,具有很強的抗氧化活性,可防止細胞衰老。提供酸堿度緩沖的作用,以及維持滲透壓。提供蛋白酶抑制劑,使細胞免受蛋白酶的損傷。因此在細胞消化時,常用含血清的培養(yǎng)液終止胰酶對細胞的作用。蕪湖進口血清哪里有