溫州細胞生物學腦片膜片鉗研究方案

膜片鉗電生理紀錄系統及記錄方法：細胞膜由雙層脂膜組成，具有密封絕緣的特性，因此當紀錄 電極接觸到細胞膜時電阻會開始上升，然后以人工方式對紀錄電極內施加一個負壓，可以讓電極與胞膜之間吸附得更為緊密而電阻也會加速上升，當紀錄電極的電阻達到千兆歐姆(Giga Ω)時，意味著細胞膜與電極之間幾乎沒有電流漏出，之后對電極內壓力施以一個快速的負壓將細胞膜吸破，這樣紀錄電極與細胞胞體之間會形成一個封閉的電容，此時就可以開始對細胞進行實驗。在大多數膜片鉗實驗，要求所有實驗儀器及設備均具有良好的機械穩(wěn)定性。溫州細胞生物學腦片膜片鉗研究方案

膜片鉗技術在通道研究中的重要作用：利用膜片鉗技術還可以用于藥物在其靶受體上作用位點的分析。如神經元煙堿受體為配體門控性離子通道，膜片鉗全細胞記錄技術通過記錄煙堿誘發(fā)電流，可直觀地反映出神經元煙堿受體活動的全過程，包括受體與其激動劑和拮抗劑的親和力，離子通道開放、關閉的動力學特征及受體的失敏等活動。使用膜片鉗全細胞記錄技術觀察拮抗劑對煙堿受體激動劑量效曲線的影響，來確定其作用的動力學特征。然后根據分析拮抗劑對受體失敏的影響，拮抗劑的作用是否有電壓依賴性、使用依賴性等特點，可從功能上區(qū)分拮抗劑在煙堿受體上的不同作用位點，即判斷拮抗劑是作用在受體的激動劑識別位點，離子通道抑或是其它的變構位點上。南京細胞生物學膜片鉗成像研究方案膜片鉗技術是在電壓鉗技術發(fā)展起來的，電壓鉗是利用負反饋技術將膜電位在空間和時間上固定于某一測定值。

一種提高膜片鉗實驗效率的方法與流程：膜片鉗技術是一種記錄通過離子通道的離子電流來反映細胞膜上離子通道分子活動的技術。是用來研究單個離體的活細胞、組織切片或細胞膜片離子流的電生理實驗技術。這項技術在可興奮細胞如神經元、心肌細胞、肌纖維和胰腺細胞的研究中起至關重要的作用，也可用于研究特殊制備的巨型球狀體中的細菌離子通道。傳統膜片鉗技術對實驗人員的技術要求非常高，一般地，實驗人員需要經過嚴格的長期的訓練，才能準確且快速的操作。

膜片鉗技術是用于紀錄全細胞或個別細胞膜上離子信道電生理特性的研究方法，目的在于提供基礎研究知識與新藥開發(fā)時研究細胞電特性或小分子藥物對細胞膜上離子信道特性的影響，替開發(fā)標靶藥物提供一個測試平臺。傳統的細胞培養(yǎng)膜片鉗系統由人工操作，實驗人員在取得元代細胞(例如心肌細胞與神經元)后，將研究對象細胞養(yǎng)在玻片上，以手動方式將紀錄電極移動放置在胞體上方并壓到細胞膜上，此時紀錄電極在膜外溶液里的電阻大約為3-9 ΜΩ。膜片鉗系統有如下應用局限性：細胞有比較強的細胞膜可以禁得起各種人為操作。

膜片鉗電生理技術：神經元細胞膜上有離子通道，它們控制電荷流入和流出細胞，從而調節(jié)神經元激發(fā)。一種用于研究這些通道的生物物理學特性的極為有用的技術被稱為膜片鉗記錄。在這種方法中，神經科學家把拋光的玻璃微吸管置于細胞上通過吸力形成高電阻封接。這個過程分隔了一小"片"包含一種或多種離子通道的膜。通過微吸管中的電極，研究人員可以"鉗制"或控制膜的電屬性，這對分析通道活動很重要。該電極還能記錄跨膜電壓的變化，或離子通過膜的流動。記錄單細胞電流和全細胞電流的基礎上進一步計算出細胞膜上的通道數和開放概率。連云港藥理學膜片鉗電生理技術網站

膜片鉗使用操作流程及注意事項：在儀器使用以前及使用之后按按照使用時長做好登記工作。溫州細胞生物學腦片膜片鉗研究方案

膜片鉗使用的基本方法是，把經過加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進器的操縱下，與清潔處理過的細胞膜形成高阻抗封接，導致電極內膜片與電極外的膜在電學上和化學上隔離起來，由于電性能隔離與微電極的相對低電阻（1～5MΩ），只要對微電極施以電壓就能對膜片進行鉗制，從微電極引出的微小離子電流通過高分辨、低噪聲、高保真的電流-電壓轉換放大器輸送至電子計算機進行分析處理。膜片鉗技術實現的關鍵是建立高阻抗封接，并能通過特定的記錄儀器反映這些變化，因而，膜片鉗實驗室除了一般電生理實驗所需的儀器外，還特需防震工作臺、屏蔽罩、膜片鉗放大器、三維液壓操縱器、倒置顯微鏡、數據采集卡、數據記錄和分析系統等。溫州細胞生物學腦片膜片鉗研究方案