寧夏靠譜免疫組化檢測(cè)

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2024-06-05

細(xì)胞爬片免疫組化檢測(cè)實(shí)驗(yàn)步驟

1、選擇貼壁良好的細(xì)胞爬片,用4%多聚甲醛固定后15min后自然晾干。

2、PBS洗3次,每次5min。3、切片放入3%過(guò)氧化氫溶液,室溫下孵育10min,以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶。

4、PBS洗3次,每次5min,甩干后5%BSA封閉20min(封閉電荷)。

5、去除BSA液,每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織,4℃過(guò)夜。

6、PBS洗3次,每次5min。


英瀚斯生物,細(xì)胞、動(dòng)物、臨床樣本免疫組化檢測(cè)都可完成!


7、去除PBS液,每張切片加50μl-100μl相應(yīng)種屬的二抗,4℃孵育50min。

8、PBS洗3次,每次5min。

9、去除PBS液,每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液,顯微鏡控制顯色。

10、顯色完全后,蒸餾水或自來(lái)水沖洗,蘇木素復(fù)染,1%鹽酸酒精分化(1s),自來(lái)水沖洗,氨水返藍(lán),流水沖洗。

11、切片經(jīng)過(guò)梯度酒精(70-100%)10min一個(gè)梯度,脫水干燥,二甲苯透明,中性樹(shù)膠封固。 免疫組化可以看什么?寧夏靠譜免疫組化檢測(cè)

寧夏靠譜免疫組化檢測(cè),免疫組化

免疫組化的局限性,可能會(huì)有假陽(yáng)性。陽(yáng)性信號(hào)定位不正確即為假陽(yáng)性,包括著色不勻、背景著色、邊緣效應(yīng),另外組織的某些特定成分也能導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。假陽(yáng)性可能的原因有:(1)一抗?jié)舛燃耙豢故欠袷В贵w有一個(gè)合適的濃度范圍且必須在有效期內(nèi)使用,過(guò)期的抗體或者不著色,或者背景著色,形成假陽(yáng)性;(2)試劑未充分覆蓋組織,組織邊緣的試劑易干濃度較組織中間高致深染;(3)抗體孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng),由于室溫的影響夏季孵育時(shí)間稍短,冬季孵育時(shí)間稍長(zhǎng);(4)操作過(guò)程中組織變干,造成組織邊緣收縮或損壞形成偽影,產(chǎn)生假陽(yáng)性;(5)3,3'-二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色時(shí)間太長(zhǎng),DAB宜現(xiàn)配現(xiàn)用,配制時(shí)間比較好在30min以內(nèi);(6)由于胞漿里含有較多的蛋白質(zhì),因此間質(zhì)和胞漿中出現(xiàn)很多非特異性的染色,如內(nèi)源性酶血紅蛋白、肌紅蛋白等造成的著色,可以通過(guò)血清封閉解決;乳腺cancer組織中的脂肪細(xì)胞、淋巴細(xì)胞也會(huì)產(chǎn)生非特異性的染色;(7)非特異性抗體吸附常見(jiàn)于壞死組織中,使壞死組織呈較高的背景染色,在免疫組化中應(yīng)避免選擇壞死組織較多的蠟塊。湖南小鼠免疫組化注意事項(xiàng)常見(jiàn)的免疫組化方法有哪些?

寧夏靠譜免疫組化檢測(cè),免疫組化

細(xì)胞屬性的判定,免疫組化也可以進(jìn)行這方面的臨床應(yīng)用。通過(guò)特定抗體標(biāo)記出細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的抗原成分,來(lái)判定細(xì)胞的屬性,確定cancer的來(lái)源。如細(xì)胞角蛋白(CK)是上皮性標(biāo)記,CK陽(yáng)性提示cancer為上皮源性cancer;降鈣素抗體是甲狀腺髓樣cancer特有的標(biāo)記;甲狀腺球蛋白(Tg)陽(yáng)性提示是甲狀腺濾泡性cancer;前列腺特異性抗原(PSA)只見(jiàn)于前列腺上皮;膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)陽(yáng)性則提示膠質(zhì)cancer;CD20和CD79a陽(yáng)性則提示B細(xì)胞淋巴瘤;平滑肌肌動(dòng)蛋白(Actin)陽(yáng)性提示cancer為平滑肌源性;胃腸道間質(zhì)瘤中原cancer基因蛋白產(chǎn)物CD117陽(yáng)性;血管源性cancer中內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物CD34陽(yáng)性等等。如果您需要做實(shí)驗(yàn)外包,可以與我們英瀚斯生物進(jìn)行聯(lián)系。

免疫組化應(yīng)該選擇石蠟切片還是冰凍切片? 

(1)要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片,這是***我向一老師請(qǐng)教得出的結(jié)論。因?yàn)樽魇炃衅瑫r(shí)要高溫烤片,可能會(huì)破壞組織的抗原性,如果組織的抗原性較穩(wěn)定,則可作石蠟切片;但是要求做石蠟切片的,可作冰凍切片。

(2)冰凍切片的優(yōu)點(diǎn)是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性,做免疫組化時(shí)不需抗原修復(fù)這一步。缺點(diǎn)是細(xì)胞內(nèi)易形成冰晶而破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu),可能會(huì)使抗原彌散;切片厚度較石蠟的厚,做的片子沒(méi)石蠟的漂亮。當(dāng)你買一抗時(shí),目錄上都寫(xiě)著做什么樣的切片,如果它寫(xiě)著只能做冰凍,就不能做石蠟,如寫(xiě)著兩者都可,那就都能做。

(3)石蠟切片的優(yōu)點(diǎn)可以保持組織細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu),且容易存放在室溫,而冰凍切片比較麻煩,一定要存在-80度的低溫冰箱中,尤其是用來(lái)做原位雜交的的切片,為了防止RNA降解,保存一貫很重要。由于石蠟切片可以切到4微米左右,所以原位雜交探針容易滲透到組織中去,容易成功,而且得到的顏色/形態(tài)都較冰凍切片好。

更多實(shí)驗(yàn)信息,請(qǐng)點(diǎn)擊英瀚斯官網(wǎng)。 免疫組化如何得到好的效果?

寧夏靠譜免疫組化檢測(cè),免疫組化

免疫組化結(jié)果要如何分析?

 (1)陽(yáng)性著色細(xì)胞計(jì)數(shù)法。在40*光鏡下,隨機(jī)選擇不重疊的10個(gè)視野,機(jī)器或人工計(jì)數(shù)陽(yáng)性著色細(xì)胞,每組3~6張不同動(dòng)物組織切片,然后進(jìn)行組間比較即可。

(2)灰密度分析法。可以通過(guò)在不同組別和不同動(dòng)物組織切片上選擇相同區(qū)域、相同條件下用image j進(jìn)行灰密度分析,然后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析即可。

(3)評(píng)分法。用光學(xué)顯微鏡下對(duì)組織切片分別按染色程度(0~3分為陰性著色、淡黃色、淺褐色、深褐色)、陽(yáng)性范圍進(jìn)行評(píng)分(1~4分為0~25%、26~50%、51~75%、76~100%),**終可以分?jǐn)?shù)相加,再進(jìn)行比較。對(duì)于以上這幾種方法,各有利弊,請(qǐng)細(xì)心選擇。要想得到正確結(jié)果的前提是你要做出著色均勻、背景很淺的高質(zhì)量切片。


英瀚斯生物,專業(yè)病理染色團(tuán)隊(duì),不止做檢測(cè),還有專業(yè)病理分析。 免疫組化相關(guān)知識(shí)匯總。湖南小鼠免疫組化注意事項(xiàng)

英瀚斯生物免疫組化,高效高質(zhì)量出結(jié)果。寧夏靠譜免疫組化檢測(cè)

免疫組化的局限性:在病理診斷中,隨著各種抗體新的用途不斷被發(fā)現(xiàn)及越來(lái)越多的新型抗體的出現(xiàn),免疫組化在病理診斷和醫(yī)療中已有了很重要的位置,對(duì)于cancer診斷、鑒別診斷、分類及諸多方面產(chǎn)生了重大的影響。但是免疫組化技術(shù)還存在著缺陷和不足,作為病理醫(yī)生和病理技術(shù)人員不僅要充分認(rèn)識(shí)到缺陷和不足,而且要努力避免由于缺陷和不足給診斷帶來(lái)的誤區(qū),這就要求病理醫(yī)生和病理技術(shù)人員在工作中不斷學(xué)習(xí)與研究,在實(shí)際操作中總結(jié)經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn),分析失敗原因,努力實(shí)現(xiàn)操作規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化,才能充分發(fā)揮免疫組化在病理診斷及鑒別診斷、臨床醫(yī)療中的指導(dǎo)作用。寧夏靠譜免疫組化檢測(cè)