青?？孔V的HE染色檢測(cè)

HE染色注意事項(xiàng)：1．組織切片的脫蠟步驟應(yīng)徹底，否則無(wú)論進(jìn)行那種染色都會(huì)發(fā)生困難。脫蠟時(shí)間要充分，若溶蠟劑使用過(guò)久應(yīng)及時(shí)更換以免效率降低，若室溫過(guò)低，可將溶蠟劑置于溫箱中進(jìn)行脫蠟。  2．蘇木素染液使用一段時(shí)間后表面易出現(xiàn)亮晶狀飄浮物，這可能是液體表面的過(guò)氧化物，必須過(guò)濾除去，以防沉渣污染組織切片。蘇木素液一般染過(guò)三、四百?gòu)埱衅?，著色力?huì)減弱，著色不鮮艷，呈灰藍(lán)色時(shí)應(yīng)及時(shí)更換新液。  3．染色的時(shí)間長(zhǎng)短需依據(jù)：染劑對(duì)組織的染色作用，室溫條件，切片厚薄，固定液的類別，染液的新舊而進(jìn)行調(diào)節(jié)。所以在染色時(shí)必須使用顯微鏡觀察染色程度以利掌握時(shí)間。  4．分化十分重要。分化步驟的準(zhǔn)確也是染色成敗的關(guān)鍵，若分化失當(dāng)則必然引起染色不勻或過(guò)淡，過(guò)深等現(xiàn)象，因此分化后一定要鏡檢，觀察胞核是否清晰，胞漿呈淡白色。否則需再次分化，不然一旦復(fù)染后，組織會(huì)呈紫藍(lán)色即“藍(lán)蓋紅”現(xiàn)象。  5．還原液不宜過(guò)濃，若堿性太強(qiáng)易使組織脫落故以淡為宜。  6．伊紅宜淡染，復(fù)染過(guò)深胞核會(huì)不清晰，影響鏡檢。 HE染色是組織學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研中比較基礎(chǔ)、使用比較普遍的技術(shù)方法之一。青?？孔V的HE染色檢測(cè)

HE染色細(xì)胞核被蘇木精染成鮮明的藍(lán)色，軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍(lán)色，粘液呈灰藍(lán)色。細(xì)胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色，胞漿內(nèi)嗜酸性顆粒呈反光強(qiáng)的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色，彈力纖維呈亮粉紅色，紅血球呈橘紅色，蛋白性液體呈粉紅色。著***況與組織或細(xì)胞的種類有關(guān)，也隨其生活周期及病理變化而改變。例如，細(xì)胞在新生時(shí)期胞漿對(duì)伊紅著色較淡或輕度嗜堿，當(dāng)其衰老時(shí)或發(fā)生退行性變則呈現(xiàn)嗜伊紅濃染。膠原纖維在老化和出現(xiàn)透明變性時(shí)，伊紅著色由淺變深。青?？孔V的HE染色檢測(cè)HE染色小攻略技巧分析。

HE染色注意事項(xiàng)：1、染色時(shí)調(diào)節(jié)pH值很重要。如果組織塊在福爾馬林中固定時(shí)間長(zhǎng)，組織酸化而影響細(xì)胞核著色。因此，要在自來(lái)水中沖洗時(shí)間長(zhǎng)一些或在飽和碳酸鋰水溶液中處理10-30min，這樣可以使細(xì)胞核著色較深。染伊紅時(shí)胞漿著色不佳，可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸。2、切片染蘇木精后，分色這一步是關(guān)鍵，應(yīng)在顯微鏡下控制進(jìn)行，一般以細(xì)胞核染色清楚（晰）而細(xì)胞質(zhì)基本無(wú)色為佳。如果過(guò)分延長(zhǎng)分色時(shí)間將導(dǎo)致染色太淺，應(yīng)重新染色后再行分色。3、切片經(jīng)酒精脫水后，入二甲苯時(shí)可出現(xiàn)白色不透明狀態(tài)，此為脫水不徹底，應(yīng)將切片退回?zé)o水酒精，更換酒精、二甲苯，以求徹底脫水與透明。4、在染色過(guò)程中不要讓切片干燥，以免切片收縮、變形，影響神經(jīng)元形態(tài)。5、切片從二甲苯取出或進(jìn)入二甲苯前，切片周邊均應(yīng)擦干凈或吸干多余水分。6、***封固時(shí)，要用中性樹脂，防止日后褪色，蓋片要選大于組織塊的面積，如漏出一部分不久將會(huì)褪色，所用樹脂濃度要適當(dāng)，樹脂封固時(shí)不能有氣泡。

HE染色是蘇木精 — 伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，簡(jiǎn)稱HE染色法 ，石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿性 ，主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核酸著紫藍(lán)色 ；伊紅為酸性染料 ，主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色 。HE染色法是組織學(xué)、胚胎學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研中**基本、使用*****的技術(shù)方法。由于組織或細(xì)胞的不同成分對(duì)蘇木精的親和力不同及染色性質(zhì)不一樣。經(jīng)蘇木精染色后，細(xì)胞核及鈣鹽粘液等呈藍(lán)色，可用鹽酸酒精分化和弱堿性溶液顯藍(lán)，如處理適宜，可使細(xì)胞核著清楚的深藍(lán)色，胞漿等其它成分脫色。再利用胞漿染料伊紅染胞漿，使胞漿的各種不同成分又呈現(xiàn)出深淺不同的粉紅色。故各種組織或細(xì)胞成分與病變的一般形態(tài)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)均可顯示出來(lái)。常規(guī)HE染色和特殊染色服務(wù)。

HE染色實(shí)驗(yàn)步驟：（1）樣品制備：對(duì)于貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞，胰酶消化，調(diào)整細(xì)胞濃度約1×105/ml，滴加于蓋玻片上(置于6孔板中)，培養(yǎng)相應(yīng)時(shí)間后，取出細(xì)胞爬片，用PBS洗滌3次。（2）樣品固定：95%乙醇固定20min，PBS洗滌2次，每次1min。（3）染核：蘇木素染液染色2-3min，自來(lái)水洗滌。（4）分色：鏡下觀察，若細(xì)胞核染色過(guò)深，用1%鹽酸酒精溶液分色數(shù)秒，自來(lái)水洗滌。（5）染胞質(zhì)：浸入伊紅染液染色1min，自來(lái)水洗滌。（6）吹干或自然晾干細(xì)胞爬片后，中性樹膠封片。若細(xì)胞用4%多聚甲醛固定，則染色時(shí)間相應(yīng)延長(zhǎng)，蘇木素染色12-15min，伊紅5min即可科研常備實(shí)驗(yàn)操作之HE染色。山西比較好的HE染色公司

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HE染色細(xì)胞漿染色原理：細(xì)胞漿內(nèi)主要成分是蛋白質(zhì)，為兩性化合物、細(xì)胞漿的染色與pH值有密切關(guān)系，當(dāng)pH調(diào)到蛋白質(zhì)等電點(diǎn)4.7-5.0時(shí)，胞漿對(duì)外不顯電性，此時(shí)酸或堿性染料不易染色。當(dāng)pH調(diào)到6.7-6.8時(shí)，大于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)pH值，表現(xiàn)酸性電離，而帶負(fù)電荷的陰離子，可被帶正電荷的染料染色，現(xiàn)時(shí)胞核也被染色，核和胞漿難以區(qū)分。因此必須把pH調(diào)至胞漿等電點(diǎn)以下，在染液中加入醋酸使胞漿帶正電荷（陽(yáng)離子），就可被帶負(fù)電荷（陰離子）的染料染色。伊紅Y是一種化學(xué)合成的酸性染料，在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子，與蛋白質(zhì)的氨基正電荷（陽(yáng)離子）結(jié)合而使細(xì)胞漿染色，細(xì)胞漿、紅細(xì)胞、肌肉、結(jié)締組織，嗜伊紅顆料等被***成不同程度的紅色或粉紅色，與藍(lán)色的細(xì)胞核形成鮮明的對(duì)比。青?？孔V的HE染色檢測(cè)