云南組織免疫組化要多久

來源: 發(fā)布時間:2024-08-26

免疫組化指的是根據抗體與抗原特異結合的原理來檢測組織切片中的抗原(如蛋白)。immuno的詞根來自操作中所使用的抗體,而histo意味著組織。另一種類似的技術是免疫細胞化學(Immunocytochemistry,簡稱ICC)。這兩個詞大家經?;熘?,看著好像差不多,但實際上還是有點區(qū)別。IHCvsICC對于IHC,組織是來自患者或動物,經過冷凍或石蠟包埋。將這些組織制成約4μm厚的切片,封片后再處理。通過這種方法,研究人員可觀察細胞組分的定位,同時維持周圍組織的原先結構。對于ICC,大部分細胞外基質及其他基質組分被去除,只剩下整個細胞來染色。ICC的來源可以是細胞懸液,來自患者或動物(如血涂片、拭子等),或在實驗室中進行的組織培養(yǎng)細胞系。 英瀚斯生物,專業(yè)病理老師負責免疫組化外包!云南組織免疫組化要多久

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做免疫組化時如何選擇一抗?

1、單克隆和多克隆抗體的選擇。由一種克隆產生的特異性抗體叫做單克隆抗體。單克隆抗體能目標明確地與單一的特異抗原決定簇結合,就像導彈精確地命中目標一樣。另一方面,即使是同一個抗原決定簇,在機體內也可以由好幾種克隆來產生抗體,形成好幾種單克隆抗體混雜物,稱為多克隆抗體。在抗原抗體反應中,一般單克隆抗體特異性強,但親和力相對小,檢測抗原靈敏度相對就低;而多克隆抗體特異性稍弱,但抗體的親和力強,靈敏度高,但易出現非特異性染色(可以通過封閉等避免)。

2、應用范圍的選擇。有的一抗只能用于Westernblotting,或免疫組化、免疫熒光、免疫沉淀等;甚至標明石蠟切片或冰凍切片。

3、種屬反應性的選擇(speciesreactivity)。這一點很重要,表明這種抗體可能存在種屬差別,且這種抗體適合檢測哪種種屬動物體內的抗原。

4、種屬來源,一般兔來源的多是多克隆抗體;而小鼠來源的多是單克隆抗體,但也有另外。根據此來源來選擇相應的二抗。

5、生產廠家的選擇。


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免疫組化中免疫膠體金技術,英瀚斯生物小編為您說明介紹。免疫膠體金技術是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標記物。膠體金是指金的水溶膠,它能迅速而穩(wěn)定地吸附蛋白,對蛋白的生物學活性則沒有明顯的影響。因此,用膠體金標記一抗、二抗或其他能特異性結合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針,就能對組織或細胞內的抗原進行定性、定位,甚至定量研究。由于膠體金有不同大小的顆粒,且膠體金的電子密度高,所以免疫膠體金技術特別適合于免疫電鏡的單標記或多標記定位研究。由于膠體金本身呈淡至深紅色,因此也適合進行光鏡觀察。如應用銀加強的免疫金銀法則更便于光鏡觀察。

免疫組化的結果分析:

免疫組化實驗通常需要設置陽性對照、陰性對照(或替代對照)(陽性對照是排除方法和實驗系統有無問題;陰性對照與替代對照是排除有無非特異性染色)。一般情況下,陽性對照顏色的特點為:Ag定位,包漿、胞核、胞膜、間質具有結構性。且染色的強度不同(顏色深淺不一);陰性對照的特點為:染色細胞與組織無區(qū)別,顏色具有彌散性,分布均勻。

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說明:免疫組化實驗可以對結果進行定量分析,但要實驗得到的必須是高質量的染色切片,要求背景染色淺且特異性染色較深,這樣分析的結果才會比較準確。 免疫組化失敗的原因?

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免疫組化中IHC vs ICC的區(qū)別。英瀚斯生物為您說明。除了生物學來源,IHC和ICC在樣品處理的程度上也有所不同。ICC需要透化,要么通過固定過程,要么是單獨的透化步驟,這樣抗體才能與細胞內的靶點相結合。而IHC可能不要單獨的透化步驟,這取決于切片的厚度和固定方法。包埋在石蠟中的IHC切片必須進一步處理,才能進行抗體染色。一旦處理好樣品,IHC和ICC的染色操作就幾乎沒什么差異了。當然,就染色而言,根據所使用的抗體來優(yōu)化還是少不了的。免疫組化樣本如何處理?黑龍江動物組織免疫組化要多少錢

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免疫組化實驗注意事項總結:

?本實驗室所用切片一般是石蠟切片。

?烘片:使蠟片水分蒸發(fā),石蠟軟化,組織切片牢固貼在玻片上;烘片至跟烘片前透明度有差異。

?抗原修復時,使片子始終浸沒在修復液中,液體不能干。

?一抗孵育在37度培養(yǎng)箱,濕盒放置1h,省時間和結合效果好,不要超過1h,容易過染。

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?二抗使用:兩個二抗放大信號或一個二抗;若抗體信號強,可不用放大信號,盡量增大信噪比。

?10XDAB在常溫溶解,盡可能現用現配,放于4度儲存時間久了效果不佳。

?復水和脫水時所用的梯度酒精不可混用,要區(qū)分開。

?加抗體和顯色液時,都要將片子甩干,在半干半濕的狀態(tài)下再加,不然容易造成溶液的二次稀釋。

?整個操作過程中在顯色之前,一定不能干片。 云南組織免疫組化要多久