云南轉染試劑教做

共轉染是將一種以上類型的核酸引入真核細胞的過程。組合的一些例子包括多個質粒DNA ,siRNA和質粒DNA ，以及多個miRNAs進入同一個細胞。通常，多質粒DNA共轉染的目的是將一種以上的外源基因導入宿主細胞。其應用之一是生產(chǎn)由幾種質粒DNA成分組成的合成病毒或雜交載體。一個例子是在HEK293細胞系中，用轉移、包膜和包裝載體等幾種質粒載體生成慢病毒。此外，多個質粒DNA的共轉染也可以應用于蛋白質-蛋白質相互作用(PPI)研究，以研究一種蛋白質與另一種蛋白質之間的關系。轉染時推薦使用血清減少或無血清培養(yǎng)基包括陽離子轉染試劑，如Lipofectamine、HiperFect 和EndofectinMax。云南轉染試劑教做

小RNA和質粒DNA的共轉染可用于評估轉染效率。這可以通過引入含有熒光素酶報告基因的質粒來實現(xiàn)，其中的3'UTR可以被特定的小RNA(如miRNA)識別，然后允許小RNA結合以抑制熒光素酶的表達。另一方面，在RNA干擾(RNAi)研究中，小RNA和質粒DNA的共轉染也是必不可少的，以確定siRNA等特定小RNA對宿主細胞中特定基因表達的調節(jié)作用。小的非編碼RNA，如siRNA，以其表觀遺傳調控能力而聞名，更具體地說，是轉錄后對特定基因表達的調控。siRNA模擬物和攜帶與熒光素酶報告系統(tǒng)相關的特定基因的質粒DNA可以同時共轉染到靶細胞中。siRNA模擬物成功敲低特定基因表達將導致熒光素酶活性***降低。共轉染還可能涉及不同的小分子如miRNAs，這有助于研究小RNA對靶宿主細胞的影響。例如，如果引入miRNA模擬物可以影響特定細胞類型中特定下游基因的表達，那么預計將其抑制劑序列同時轉染到同一細胞中會降低單獨miRNA模擬物序列發(fā)揮的轉錄后調節(jié)作用。與單一核酸類型的轉染相比，涉及將多個核酸轉移到同一細胞中的共轉染通常更多挑戰(zhàn)性更大，因為并非所有核酸類型都能有效轉移，這可能取決于轉染方法和所涉及的細胞類型。青海轉染試劑代做基于病毒的轉染，或者更具體地稱為轉導，涉及使用病毒載體將特定的核酸序列帶入宿主細胞。

轉染試劑的凍融被認為是另一個可能影響轉染效率的潛在因素。Lipofectamine2000試劑與非冷凍對照相比，至少經(jīng)歷一次凍融循環(huán)后，HEK293、Neuro2α、C2C12成肌細胞和肌管、hTERTMSC、SMA和HepG2細胞系的轉染效率更高，且細胞活力不受影響。一種可能的解釋是，冷凍解凍可以增強分子重排分散，從而允許更高的分散率，從而允許核酸之間很大程度的接觸，形成更多的轉染復合物。然而，還需要更多的研究來支持這一做法，因為凍融過程也被認為會導致再結晶，從而破壞一些化學物質的結構。

目前核酸遞送系統(tǒng)的局限性之一是無法深入穿透組織和***，如實體瘤和大腦。通常情況下，只能到達并轉染細胞的外層，從而導致***效果不佳。愛潑斯坦巴爾病毒(EBV)，一種人類**病原體，似乎通過劫持**微環(huán)境中的外泌體進行細胞間通訊來克服這一點。外泌體是小的膜囊泡(40 ~ 200nm)，起源于內(nèi)吞。在被釋放到細胞外環(huán)境后，由于其表面存在細胞識別分子，它們可以與鄰近細胞融合。外泌體外泌體是細胞間mRNA、小rna (miRNA)和信號因子的載體，通過經(jīng)歷細胞內(nèi)化和釋放的幾個周期，能夠跨越幾層組織。它們可以由多種細胞分泌，包括腫瘤細胞、樹突狀細胞、B細胞、T細胞、上皮細胞和神經(jīng)元。利用外泌體途徑的一種潛在方法是將脂質體核酸重新包裝到外泌體中。這可以通過靶向外泌體特異性的膜蛋白(如四跨蛋白和膜聯(lián)蛋白)并啟動脂質體和外泌體之間的融合事件來實現(xiàn)。PEI的分子量對細胞毒性和基因轉移活性有影響。

化學轉染的效率在很大程度上取決于幾個因素，如使用的試劑類型、靶細胞的來源和性質，以及選擇的比較好DNA與試劑比例。慢病毒等病毒載體能夠攜帶大尺寸的核酸，并將其靶標傳遞給非分裂細胞和分裂細胞，因此在基因***中非常有用。有幾個因素已被證明可能影響病毒轉導的效率，如靶細胞類型、使用的啟動子類型、載體濃度和使用的轉導介質條件。在一項評估使用人類免疫缺陷病毒(HIV)和馬傳染性貧血病毒(EIAV)進行基因轉導的體外研究中，觀察到這兩種病毒在來自人類、倉鼠、貓、狗、馬和豬的不同細胞系上的不同程度的效率。在大多數(shù)細胞類型上，使用HIV的轉導效率普遍優(yōu)于EIAV，而這兩種病毒對嚙齒動物細胞的***性較弱。在同一項研究中，啟動子的類型也被認為是可能影響轉導效率的一個因素，因此含有替代CMV啟動子的內(nèi)部啟動子EF-1a的HIV在小鼠和大鼠細胞上表現(xiàn)出更高的轉導效率。用二乙基氨基乙基修飾，右旋糖酐鏈的酰胺化很容易被質子化，這使得它可以自組裝成帶負電荷核酸的納米顆粒。云南天津轉染試劑

PLL(聚L -賴氨酸)是生理條件下帶正電的多氨基酸,當鏈長超過20個殘基時，它與質粒DNA結合并凝聚成致密顆粒。云南轉染試劑教做

轉染時通常推薦使用血清減少或無血清培養(yǎng)基，包括陽離子轉染試劑，如Lipofectamine、HiperFect 和EndofectinMax。這種轉染活動需要形成陽離子脂質體-DNA復合物，這需要帶正電的脂質體分子和帶負電的核酸之間的相互作用。因此，血清中負電荷分子的存在可能會影響這種復雜的相互作用，從而影響轉染效率。然而，發(fā)現(xiàn)10%血清的存在導致FuGENE HD、jetPEI、Lipofectamine 2000和Arrest-In轉染MCF-7、HeLa、C2C12和MC3T3的轉染效率更高。研究表明，轉染中少量的血清可以通過調節(jié)轉染復合物的zeta電位來改善轉染復合物與其宿主細胞表面之間的表面相互作用。云南轉染試劑教做