一種發(fā)光雜環(huán)化合物,存在于生物發(fā)光的生物體中,如螢火蟲。在含有三磷酸腺苷的情況下,通過熒光素酶氧化脫羧產生光??捎糜跓晒馑孛干锇l(fā)光成像和細胞高通量篩選應用。D-熒光素(D-Luciferin)是螢火熒光素酶底物,其量子效率為0.88,是Luminol的20倍。反應原理:首先,在鎂離子存在下熒光素酶使熒光素與ATP反應,接著它被氧化形成二氧雜環(huán)丁烷結構并發(fā)出黃綠色的光。Luciferin-luciferase發(fā)光用于ATP監(jiān)控以測定細胞活力以及細菌計數。它還用于報告基因檢測。可與小動物***成像系統(tǒng)配套使用,用于標記LUC基因后的體內***熒光檢測。D-熒光素游離酸(D-Luciferin,freeacid)、D-熒光素鉀鹽(D-Luciferin,potassiumsalt)和D-熒光素鈉鹽(D-Luciferin,sodiumsalt),鉀鹽、鈉鹽的形式是**通用的,因為它們都易溶于水。鉀鹽也是***動物檢測使用的主要形式。它們的激發(fā)和發(fā)射波長分別為328nm和533nm。動物體內光學成像主要采用生物發(fā)光與熒光發(fā)光兩種技術。上海天津熒光染料
5(6)-FITC(Fluorescein5(6)-isothiocyanate)是一種胺活性衍生物的熒光染料,具有廣泛的應用,作為抗體和其他探針標記,用熒光顯微鏡,流式細胞儀、免疫熒光方法如ELISA和Western印跡實驗。熒光素衍生物具有高吸收率、優(yōu)異的熒光量子產率和良好的水溶性,是流式細胞儀和免疫熒光中生物檢測**常用的熒光標記之一。**常用的熒光素包括用于標記蛋白質(特別是抗體)的異硫氰酸熒光素[5(6)-FITC)],5-FITC和用于標記肽和寡核苷酸的羧基熒光素(5-FAM和5(6)-FAM)。BIOFOUNT提供***的基于熒光素的染料、底物和偶聯(lián)物,以及一系列具有針對細胞標記和檢測優(yōu)化的特性的質量iFluor?熒光標記染料。上海天津熒光染料花青類熒光染料屬于共振染料,其特征在于具有離域電荷的氮原子(兩個氮原子)之間的聚甲炔染料。
熒光染料***用于生物學和醫(yī)學研究中,如流式細胞術、熒光顯微鏡和免疫組化等,其中熒光淬滅是一個關鍵的考量因素,因為它直接影響到實驗結果的可靠性和準確性。FITC(異硫氰酸熒光素)是一種常用的綠色熒光染料,具有較高的熒光量子產率和激發(fā)效率。然而,FITC的一個主要缺點是容易受到環(huán)境因素的影響,如pH值、溫度、溶劑和離子強度等,從而導致熒光淬滅。此外,FITC的光穩(wěn)定性相對較低,長時間的光照會導致其熒光強度降低。CY5.5是一種遠紅外熒光染料,具有較長的激發(fā)和發(fā)射波長,因此適用于多色熒光標記和深組織成像。CY5.5相對于FITC來說,具有更好的光穩(wěn)定性,不易受到環(huán)境因素的影響。此外,CY5.5的熒光量子產率也較高,使其在熒光標記實驗中表現出色。AlexaFluor647是另一種常用的紅色熒光染料,具有與CY5.5相似的長波長激發(fā)和發(fā)射特性。AlexaFluor647的優(yōu)點是光穩(wěn)定性較好,可以承受長時間的光照而不易淬滅。此外,它在多種溶劑和pH值范圍內都能保持穩(wěn)定的熒光性能,因此在復雜的生物樣本中表現出色。
南京星葉生物科技有限公司Super Fluor系列(效果同Alexa Fluor 系列),質優(yōu)價廉。
1.DiD,DiO,DiI,DiR和DiS細胞膜染色液制備(1)配置DMSO或EtOH儲存液:儲存液用DMSO或EtOH配置濃度1~5mM。注意:未使用的儲存液保存在-20°C,避免反復凍融。(2)工作液制備:用合適的緩沖液(如:無血清培養(yǎng)基,HBSS或PBS)稀釋儲存液,配制濃度為1~5μM的工作液。注意:工作液的**終濃度是根據不同細胞和實驗的經驗來配制。可以從推薦濃度的十倍以上尋找比較好條件。
2.懸浮細胞染色(1)懸浮細胞密度為1×106/mL加入到工作液中。(2)在37℃培養(yǎng)細胞2~20分鐘,不同的細胞比較好培養(yǎng)時間不同。(3)染色細胞試管在1000~1500轉離心5分鐘。(4)傾倒上清液,再次緩慢加入預溫37℃的培養(yǎng)液。(5)重復(3),(4)步驟兩次以上。 小動物成像熒光染料能夠選擇性地與目標細胞或組織結合。
小動物***熒光成像技術是現***物醫(yī)學研究領域的一項重要技術,因其具有操作簡單、實時直觀、靈敏度高、實驗成本低等特點,已廣泛應用于生命科學、醫(yī)學研究及藥物開發(fā)等方面。納米材料在生物醫(yī)學領域得到廣泛應用,旨在解決傳統(tǒng)醫(yī)學面臨的各種醫(yī)學挑戰(zhàn),包括生物利用度差,靶向特異性受損,全身和***毒性等。納米材料具有很多與眾不同的優(yōu)點,比如多功能性、大的負載量、靶向性、血液循環(huán)時間長等。納米材料在生物醫(yī)學中起著關鍵作用,可以有效攜帶成像探針、***劑或生物材料并傳遞至靶點,如特定的***、組織甚至細胞。光學成像主要包括生物發(fā)光(bioluminescenceimaging,BLI)和焚光成像(fluorescenceimaging,F1)兩種技術。前者利用焚光素酶基因(如FLUC,RLUC,GLUC)標記細胞或DNA,其表達產物與莖火蟲素類底物反應產生熒光。后者包括多種熒光蛋白基因(如GFP,RFP,YFP等)、有機熒光染料、熒光上轉換納米粒子、量子點等的應用。 小動物成像熒光染料是一種先進的技術可以在小動物體內實時觀察和研究細胞、組織的功能和代謝過程。上海天津熒光染料
異硫氰酸熒光素含有一個異硫氰酸酯反應基團這有助于其對通常存在于生物分子中的動漫和巰基基團具有反應性。上海天津熒光染料
Cy7DiC18(DiR)是一個親脂性、近紅外熒光花青染料。這個染料常用于標記細胞質膜。Cy7DiC18(DiR)的兩個18-碳鏈插入到細胞膜,從而進行特定的、穩(wěn)定的細胞染色,幾乎不會發(fā)生細胞間的染料轉移。Cy7DiC18(DiR)(近紅外熒光)和其他細胞膜熒光染料如DiI(橙色熒光),DiO(綠色熒光),DiD(紅色熒光)配合使用,為多色成像和流式細胞分析提供了有效的工具。Cy7DiC18(DiR)染色后可進行多聚甲醛(不可使用甲醇等其他試劑)的固定,但不建議在染色后進行透化的過程。此外,在固定透化(室溫下用0.1%TritonX-100透化)后,也可以很好地進行質膜染色。
1、Cy7DiC18(DiR)染色固定的細胞或組織樣品時,通常使用配制在PBS中的4%多聚甲醛進行固定,使用其它不適當的固定液會導致熒光背景較高。
2、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。 上海天津熒光染料