杭州IP免疫沉淀磁珠原理

來源： 發(fā)布時(shí)間：2024-07-29

免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation, IP）的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)通常包括以下幾個(gè)關(guān)鍵步驟：

1. 目標(biāo)蛋白質(zhì)的選擇：
2. 抗體的選擇：選擇特異性強(qiáng)、親和力高的抗體來捕獲目標(biāo)蛋白質(zhì)
3. 樣本的準(zhǔn)備：收集和準(zhǔn)備細(xì)胞或組織樣本。
4. 蛋白質(zhì)的裂解和釋放：選擇合適的裂解條件，如pH值、離子強(qiáng)度、去污劑等。
5. 蛋白質(zhì)濃度的測(cè)定：確定裂解液中蛋白質(zhì)的濃度，以便于后續(xù)步驟的標(biāo)準(zhǔn)化。
6. 免疫沉淀的操作：將特異性抗體與裂解液混合，并在適宜的條件下孵育，以形成抗體-抗原復(fù)合物。
7. 非特異性結(jié)合的減少：通過預(yù)純化步驟去除可能的非特異性結(jié)合蛋白。
8. 洗滌：多次洗滌以去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)和雜質(zhì)。
9. 目標(biāo)蛋白質(zhì)的洗脫：使用適當(dāng)?shù)木彌_液洗脫抗體-抗原復(fù)合物。
10. 后續(xù)分析：對(duì)洗脫的蛋白質(zhì)進(jìn)行進(jìn)一步分析，如Western Blot.
11. 對(duì)照實(shí)驗(yàn)：設(shè)計(jì)適當(dāng)?shù)恼龑?duì)照和負(fù)對(duì)照，以評(píng)估實(shí)驗(yàn)的特異性和敏感性。
免疫沉淀IP技術(shù)選瓊脂糖珠還是磁珠？杭州IP免疫沉淀磁珠原理

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免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation, IP）是一種用于研究蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)復(fù)合物組成以及特定蛋白質(zhì)的表達(dá)和純化的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。
基本原理
免疫沉淀技術(shù)基于抗體與特定蛋白質(zhì)（抗原）之間的特異性相互作用。通過使用針對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)的特異性抗體，可以從含有多種蛋白質(zhì)的復(fù)雜樣本中捕獲并富集目標(biāo)蛋白質(zhì)。
免疫沉淀技術(shù)有多種類型，包括：
1. 個(gè)別免疫沉淀法（Individual IP）
2. 免疫共沉淀法（Co-IP）
3. 染色質(zhì)免疫沉淀法（ChIP）
4. RNA免疫沉淀法（RIP）
近年來，免疫沉淀技術(shù)在固相支持物的選擇上有了很大進(jìn)步。磁性微珠因其操作簡(jiǎn)便、快速和自動(dòng)化程度高而逐漸取代了傳統(tǒng)的瓊脂糖樹脂。
免疫沉淀磁珠哪個(gè)公司好用免疫沉淀技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)？

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免疫沉淀是利用抗體特異性反應(yīng)純化富集目的蛋白的一種方法?？贵w與細(xì)胞裂解液或表達(dá)上清中相應(yīng)的蛋白結(jié)合后，再與蛋白A/G（ProteinA/G）或二抗偶聯(lián)的珠子（agarose或Sepharose）孵育，通過離心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗體-目的蛋白復(fù)合物，沉淀經(jīng)過洗滌后，重懸于電泳上樣緩沖液，煮沸5-10min，在高溫及還原劑的作用下，抗原與抗體解離，離心收集上清，上清中包括抗體、目的蛋白和少量的雜蛋白。免疫沉淀是一種生物學(xué)技術(shù)，它利用抗體的特異性結(jié)合特性來富集和分離混合物中的特定蛋白質(zhì)。這種技術(shù)是研究蛋白質(zhì)表達(dá)、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)修飾和蛋白質(zhì)功能的強(qiáng)大工具。

“免疫沉淀”一般是指采用固定在固相支持物上的結(jié)合蛋白，進(jìn)行小規(guī)模的蛋白質(zhì)親和純化的實(shí)驗(yàn)。更確切地說，IP是采用固定在微珠支持物(一般是瓊脂糖樹脂)上的特定抗體，從復(fù)雜的混合物中，純化單一抗原的實(shí)驗(yàn)。固定化蛋白質(zhì)復(fù)合物的組裝既可以分步進(jìn)行，也可以一步完成。

常見的加樣順序：抗體和樣本(如細(xì)胞裂解物)一起孵育，然后加入親和微珠，用于捕獲抗體-抗原復(fù)合物。也可以將抗體和微珠(通過抗體結(jié)合蛋白，如蛋白A、G或A/G等，直接或間接結(jié)合抗體)先進(jìn)行孵育，然后再加入含有抗原的樣本。當(dāng)抗原、抗體和固相支持物產(chǎn)生結(jié)合以后，充分洗滌微珠，再采用適當(dāng)?shù)南疵摼彌_液從支持物上洗脫抗原。
免疫沉淀技術(shù)RIP的應(yīng)用有哪些？

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RIP技術(shù)的優(yōu)勢(shì)在于：
1. 特異性：利用特異性抗體，可以精確地捕獲目標(biāo)RNA結(jié)合蛋白及其相互作用的RNA。
2. 應(yīng)用場(chǎng)景多：適用于研究RNA結(jié)合蛋白、miRNA、lncRNA等非編碼RNA與蛋白質(zhì)的相互作用。
3. 技術(shù)結(jié)合：RIP后的RNA可以用于多種下游分析，如qPCR、測(cè)序等，為研究RNA的功能和調(diào)控提供了重要信息。
RIP技術(shù)的限制包括：
1. 抗體質(zhì)量：需要高質(zhì)量的特異性抗體，否則可能得到假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果。
2. 非特異性結(jié)合：可能存在非特異性結(jié)合問題，需要仔細(xì)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和對(duì)照來控制。
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免疫沉淀純化所得抗原純度低是什么原因？杭州IP免疫沉淀磁珠原理

免疫沉淀技術(shù)RIP（RNA Immunoprecipitation，RNA免疫沉淀）的實(shí)驗(yàn)方法基于以下幾個(gè)關(guān)鍵步驟：
1. 細(xì)胞裂解：首先，細(xì)胞或組織樣本被裂解，以釋放細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)和RNA復(fù)合物。
2.抗體特異性結(jié)合：裂解后的樣本中加入針對(duì)特定RNA結(jié)合蛋白的抗體。這些抗體能夠特異性地識(shí)別并結(jié)合到目標(biāo)蛋白。
3. 免疫復(fù)合物形成：抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合后，形成抗體-蛋白質(zhì)-RNA復(fù)合物。
4. 親和介質(zhì)捕獲：使用蛋白A或蛋白G結(jié)合的珠子（如瓊脂糖或磁性珠子）來捕獲這些抗體-蛋白質(zhì)-RNA復(fù)合物。蛋白A或蛋白G能夠與抗體的Fc部分結(jié)合，從而拉下與之結(jié)合的復(fù)合物。
5. 洗滌：捕獲的復(fù)合物被洗滌以去除未特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)和RNA。
6. RNA分離和分析：從珠子上洗脫或消化復(fù)合物，分離出RNA，并進(jìn)行進(jìn)一步的分析，如qPCR、Northern blot或高通量測(cè)序（RNA-Seq）。
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標(biāo)簽： 免疫沉淀 支原體