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來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-08-29

原代細(xì)胞的培養(yǎng)和維持:1.消化培養(yǎng)法2.懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法對(duì)于懸浮生長的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。3.部位培養(yǎng)部位培養(yǎng)是指從供體取得部位或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),部位培養(yǎng)可保持部位組織的相對(duì)完整性,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。應(yīng)用于大規(guī)模藥物篩選,越來越多地用于更可靠地研究生命科學(xué)。昆明原代細(xì)胞分離試劑盒廠家推薦

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原代細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)及作用:1.細(xì)胞壁(CellWall)【動(dòng)物細(xì)胞沒有】位于植物細(xì)胞的外層,是一層透明的薄壁。它主要是由纖維素和果膠組成的,孔隙較大,物質(zhì)分子可以自由透過。細(xì)胞壁對(duì)細(xì)胞起著支持和保護(hù)的作用。2.細(xì)胞膜(CellMembrane)細(xì)胞壁的內(nèi)側(cè)緊貼著一層極薄的膜,叫做細(xì)胞膜。這層由蛋白質(zhì)分子和磷脂雙層分子組成的薄膜,水和氧氣等小分子物質(zhì)能夠自由通過,而某些離子和大分子物質(zhì)則不能自由通過,因此,它除了起著保護(hù)細(xì)胞內(nèi)部的作用以外,還具有控制物質(zhì)進(jìn)出細(xì)胞的作用:既不讓有用物質(zhì)任意地滲出細(xì)胞,也不讓有害物質(zhì)輕易地進(jìn)入細(xì)胞上海唐山原代細(xì)胞分離試劑盒原代細(xì)胞來源于或是新近死亡的供體,通過機(jī)械或酶方法解離獲得。

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原代細(xì)胞的幾大特點(diǎn):1、生命的起源原代細(xì)胞人體起源一個(gè)單細(xì)胞受精卵(*代干細(xì)胞),經(jīng)歷卵裂(干細(xì)胞持續(xù)擴(kuò)增,增加細(xì)胞數(shù)量)、胚層出現(xiàn)(干細(xì)胞開始分化出功能細(xì)胞)、組織部位形成(功能細(xì)胞的有序排列)及胚后發(fā)育這樣一個(gè)連續(xù)過程。2、維持人體動(dòng)態(tài)平衡的種子細(xì)胞人體通過干細(xì)胞化來實(shí)現(xiàn)細(xì)胞更新。成年并不意味著細(xì)胞增殖和細(xì)胞分化的結(jié)束,而仍然存在著受調(diào)控的組織更新過程。在一些組織中,如骨髓、表皮等,新細(xì)胞可不斷地產(chǎn)生,以補(bǔ)充因分化而衰老、死亡的細(xì)胞。干細(xì)胞的增殖保持著機(jī)體內(nèi)細(xì)胞的動(dòng)態(tài)平衡。

原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng):a.細(xì)胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性。b.細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L。c.培養(yǎng)基可用Eagle(MEMCorning10-010-CVR)或DMEM(Corning10-013-CVR)培養(yǎng)。d.胎牛血清濃度為10%-80%。e.應(yīng)在37℃5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。f.在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂浮。g.待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液。h.用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。必須保持細(xì)胞的懸浮狀態(tài)??梢酝ㄟ^增加培養(yǎng)液的黏度來幫助細(xì)胞呈懸浮狀態(tài)。

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原代細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng):由于每種原代細(xì)胞培養(yǎng)的條件迥異,而且每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都摸索出自己的培養(yǎng)條件,而對(duì)于一個(gè)特定的組織塊,所用培養(yǎng)條件不一樣,得出的所需細(xì)胞族群就不一樣,因?yàn)槊糠N組織塊都含有不同種類的細(xì)胞群,而每一種細(xì)胞群在所選定的培養(yǎng)條件下(比如所選蛋白分解酶的種類和條件,細(xì)胞因子的種類,基礎(chǔ)培養(yǎng)基的種類或者是培養(yǎng)時(shí)間長短)都會(huì)得出不同的結(jié)果。由于各實(shí)驗(yàn)室采取不同的培養(yǎng)條件,即使是同一塊心組織就有可能造成A實(shí)驗(yàn)室獲得30%的心肌細(xì)胞,70%其他種類細(xì)胞,而B實(shí)驗(yàn)室卻能獲得70%所需心肌細(xì)胞,30%為成纖維、脂肪等種類。這樣的話,即使是做同一項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn),就有可能得出相反的科學(xué)結(jié)論。因此,早在2004年,美國科學(xué)界就質(zhì)疑之前以原代細(xì)胞為主的科研文章,并同時(shí)提出原代細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)的概念盡快使接種的細(xì)胞貼壁,是決定培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵。上海正規(guī)原代細(xì)胞分離試劑盒哪家好

原代培養(yǎng)的分離細(xì)胞在初次接觸體外環(huán)境時(shí),它們之間會(huì)互相影響。昆明原代細(xì)胞分離試劑盒廠家推薦

原代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室常規(guī)步驟為:1)將動(dòng)物組織從機(jī)體中取出并消毒除去存留在組織上的細(xì)菌、細(xì)菌、等污染源,這些污染源將會(huì)所需培養(yǎng)的原代細(xì)胞凋亡、停止生長和繁殖直至死亡,因此整個(gè)原代細(xì)胞培養(yǎng)過程中較全在無菌狀態(tài)下進(jìn)行。2)將組織塊在選定的蛋白酶溶液中浸泡20-30分鐘,通常在37C水浴里進(jìn)行,而蛋白酶的選定取決于部位組織和所需細(xì)胞的類型,比如成骨、肌肉、心、肝等就需要用胰蛋白酶才能解而出單個(gè)細(xì)胞,但是對(duì)于腦組織和乳腺等軟組織,就只能用分解能力較弱的膠原蛋白酶,以免損傷分散出來的單個(gè)細(xì)胞。3)將分散而成的單個(gè)細(xì)胞置于合適的培養(yǎng)基(含有特殊細(xì)胞生長因子、添加劑以及血清,或者無血清培養(yǎng)基)中培養(yǎng),使細(xì)胞得以生存、生長和繁殖,整個(gè)過程都是在無菌情況下操作昆明原代細(xì)胞分離試劑盒廠家推薦

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