鄭州正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家批發(fā)價(jià)

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-11-17

細(xì)胞轉(zhuǎn)染簡(jiǎn)介:轉(zhuǎn)染,是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入,轉(zhuǎn)染目前已成為實(shí)驗(yàn)室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因?qū)儆谕ㄟ^(guò)物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的范例;化學(xué)介導(dǎo)方法很多,如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽(yáng)離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù);生物介導(dǎo)方法,有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染,和現(xiàn)在比較多見(jiàn)的各種細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。理想細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法,應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點(diǎn)。細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù),是目前轉(zhuǎn)染效率較高的方法,同時(shí)具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢(shì)。但是,細(xì)菌轉(zhuǎn)染方法的準(zhǔn)備程序復(fù)雜,常常對(duì)細(xì)胞類型有很強(qiáng)的選擇性,在一般實(shí)驗(yàn)室中很難普及。其它物理和化學(xué)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法,則各有其特點(diǎn)。對(duì)于轉(zhuǎn)染相同量的DNA所需的較佳陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑的量會(huì)因細(xì)胞密度而異。鄭州正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家批發(fā)價(jià)

鄭州正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家批發(fā)價(jià),細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑

細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率影響因素:1.細(xì)胞密度一般來(lái)說(shuō),當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到60%~80%時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染可以取得較高的轉(zhuǎn)染效率,過(guò)低或過(guò)高都會(huì)影響轉(zhuǎn)染效果。2.細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)這點(diǎn)非常關(guān)鍵,很多時(shí)候傳代次數(shù)太少或者太多都將導(dǎo)致細(xì)胞對(duì)轉(zhuǎn)染試劑敏感度的改變。因此,為了提高轉(zhuǎn)染效率以及轉(zhuǎn)染穩(wěn)定性、降低細(xì)胞毒性,應(yīng)盡量使用適度傳代的細(xì)胞系,并在不同次實(shí)驗(yàn)時(shí)保持細(xì)胞傳代次數(shù)的一致性。3.細(xì)胞種類不同細(xì)胞種類的細(xì)胞在做轉(zhuǎn)染時(shí)所需要的轉(zhuǎn)染體系是不同的,不能一種體系用在所有類型細(xì)胞的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。重慶正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑推薦廠家這會(huì)導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細(xì)胞行為的變化。

鄭州正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家批發(fā)價(jià),細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑

細(xì)胞轉(zhuǎn)染為什么不能加血清:不同的細(xì)胞及轉(zhuǎn)染試劑要求轉(zhuǎn)染的條件是不同的。較好是在靠前次實(shí)驗(yàn)前做一個(gè)預(yù)實(shí)驗(yàn),比如:HeLa,293,CHO,COS7,MCF-7,HepG2等細(xì)胞,是否加血清,對(duì)不同的細(xì)胞是有不同的影響的,有些細(xì)胞是可以有血清的,有些加血清就會(huì)受影響。轉(zhuǎn)染后在6小時(shí)左右較好換液且換為有血清的培養(yǎng)基,其一因?yàn)槠胀ㄞD(zhuǎn)染試劑對(duì)細(xì)胞的毒性作用大,其二可降低因血清的缺乏引起的細(xì)胞的死亡。轉(zhuǎn)染時(shí)不加血清是防止血清的干擾作用,轉(zhuǎn)染后可適時(shí)加入。加入過(guò)早會(huì)引起未轉(zhuǎn)染細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)生長(zhǎng),過(guò)晚會(huì)引起較多細(xì)胞死亡??蓪?shí)時(shí)觀察1/5細(xì)胞變圓的時(shí)候加入血清。

轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng):培養(yǎng)基中的物品物品,比如青霉素和鏈霉素,是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物。這些物品一般對(duì)于真核細(xì)胞無(wú)毒,但陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑增加了細(xì)胞的通透性,使物品可以進(jìn)入細(xì)胞。這降低了細(xì)胞的活性,導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低。所以,在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中不能使用物品,甚至在準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染前進(jìn)行細(xì)胞鋪板時(shí)也要避免使用物品。這樣,在轉(zhuǎn)染前也不必潤(rùn)洗細(xì)胞。對(duì)于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,不要在選擇性培養(yǎng)基中使用青霉素和鏈霉素,因?yàn)檫@些物品是GENETICIN選擇性物品的競(jìng)爭(zhēng)性克制劑。另外,為了保證無(wú)血清培養(yǎng)基中細(xì)胞的健康生長(zhǎng),使用比含血清培養(yǎng)基更少的物品量。大多數(shù)已建立的細(xì)胞系都是非整倍體,原代培養(yǎng)包括了表達(dá)不同基因組合的細(xì)胞的混合物。細(xì)胞培養(yǎng)在實(shí)驗(yàn)室中保存數(shù)月和數(shù)年后會(huì)經(jīng)歷突變,總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化,這會(huì)導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細(xì)胞行為的變化。如果隨時(shí)間發(fā)現(xiàn)這種變化,融化一管新鮮的細(xì)胞可能會(huì)恢復(fù)原先的轉(zhuǎn)染活性。比如,新鮮融化的NIH3T3細(xì)胞比傳代8次的細(xì)胞表現(xiàn)出更高的轉(zhuǎn)染效率,融化細(xì)胞的進(jìn)一步傳代并沒(méi)有降低轉(zhuǎn)染效率。因此,如果觀察到轉(zhuǎn)染效率降低,可以試著轉(zhuǎn)染新鮮培養(yǎng)的細(xì)胞以恢復(fù)較佳結(jié)果在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒中往往都含有一個(gè)報(bào)告基。

鄭州正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家批發(fā)價(jià),細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑

如何提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)效率:優(yōu)化細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)密切觀察您的細(xì)胞;確保它們狀態(tài)良好。在開始轉(zhuǎn)染細(xì)胞之前,先制定一個(gè)適當(dāng)?shù)姆N板方案,使細(xì)胞密度從轉(zhuǎn)染開始到結(jié)束都保持較佳狀態(tài)。增加成功幾率—細(xì)胞是轉(zhuǎn)染過(guò)程中的一個(gè)關(guān)鍵元素,它可以是影響結(jié)果的一致性和質(zhì)量的較重要的變量。此外,還常用促有絲分裂刺激物(如,細(xì)菌轉(zhuǎn)化,生長(zhǎng)因子,條件培養(yǎng)基,以及滋養(yǎng)細(xì)胞)來(lái)活化原代培養(yǎng)細(xì)胞。貼壁細(xì)胞相比較懸浮細(xì)胞—在轉(zhuǎn)染效率方面貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞之間的差異明顯。天生趨于懸浮的細(xì)胞(如HL60,Jurkat)非常難以轉(zhuǎn)染。相反,天生為貼壁的細(xì)胞(如HEK,CHO)則可適應(yīng)懸浮生長(zhǎng)的條件。必須通過(guò)對(duì)藥物的抗性篩選進(jìn)行擴(kuò)增或通過(guò)表型變化進(jìn)行鑒定。蕪湖正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪家便宜

來(lái)指示細(xì)胞中目標(biāo)基因是否存在,這樣的報(bào)告基因一般可以在轉(zhuǎn)染后一兩天內(nèi)檢測(cè)到。鄭州正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家批發(fā)價(jià)

細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的方法有哪些:1..電穿孔法。通過(guò)短暫的高電場(chǎng)電脈沖處理細(xì)胞,沿細(xì)胞膜的電壓差異會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞膜的暫時(shí)穿孔。DNA被認(rèn)為是穿過(guò)孔擴(kuò)散到細(xì)胞內(nèi)的。電脈沖和場(chǎng)強(qiáng)的優(yōu)化對(duì)于成功的轉(zhuǎn)染非常重要,因?yàn)檫^(guò)高的場(chǎng)強(qiáng)和過(guò)長(zhǎng)的電脈沖時(shí)間會(huì)不可逆地傷害細(xì)胞膜而裂解細(xì)胞。理論上說(shuō)電穿孔法可用于各種細(xì)胞,且不需要另外采購(gòu)特殊試劑,但需要昂貴的電轉(zhuǎn)儀。此法每次轉(zhuǎn)染需要更多的細(xì)胞和DNA,因?yàn)榧?xì)胞的死亡率高。每種細(xì)胞電轉(zhuǎn)的條件都需要進(jìn)行多次優(yōu)化。2.細(xì)菌介導(dǎo)的傳染。傳染需要將目的基因克隆到特定的細(xì)菌體系中,經(jīng)過(guò)包裝細(xì)胞的包裝得到改造后的細(xì)菌,再進(jìn)行傳染。優(yōu)點(diǎn)是轉(zhuǎn)染效率特別高,尤其是難以轉(zhuǎn)染的原代細(xì)胞、細(xì)胞。缺點(diǎn)是構(gòu)建細(xì)菌周期長(zhǎng),環(huán)節(jié)多,易出錯(cuò),費(fèi)用也高。鄭州正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家批發(fā)價(jià)