昆明鼠尾膠原生產廠家

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：三維膠原的制備鼠尾膠原蛋白型在濃度1mg/ml以上，pH左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中，在成膠過程中需要加入0.06體積的0.1mol/LNaOH來中和。需要的溶液（均需要無菌、預冷）10mg/L酚紅用于pH指示）0.1mol/LNaOH，0.1mol/L乙酸(一般不用)，雙蒸水200ul鼠尾膠原蛋白型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入690ulH2O12ul0.1mol/LNaOH12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結）立即混勻。再加入100ul10PBS10培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要用pH試紙測試)。制備鼠尾膠原：吸取上清，分裝成小瓶，4℃保存。昆明鼠尾膠原生產廠家

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：通過醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的。鼠尾膠原蛋白可用于包被細胞培養(yǎng)器皿，培養(yǎng)一些在普通細胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細胞。也可用于制備三維膠，模擬真實的生長環(huán)境，使細胞在三維環(huán)境中生長。1，在使用鼠膠原蛋白型包被的細胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12細胞的貼壁和生長。1mg/ml濃度以上，pH左右時可形成具有一定強度的三維膠，檢查到NIH-3T3細胞在三維膠內正常生長、PC-12細胞在三維膠表面正常生長。使用方法：1、細胞培養(yǎng)器皿的表面包被推薦濃度：1-5ug/cm0.012mg/ml。按以下表格體積加到相應的培養(yǎng)器皿中。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便，成本低廉。寧波正規(guī)鼠尾膠原廠家供應鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便。

鼠尾膠原蛋白的提取方法：1.一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法，其特征在于，包括以下步驟:(1)將無組織纖維、脂肪和多糖殘留的鼠尾腱，真空冷凍干燥備用；(2)凍干鼠尾腱經低溫凍干粉碎至200?400目；(3)在冰水浴中將粉碎的鼠尾腱在醋酸溶液中溶脹，鼠尾腱與醋酸的固液比為I克:10mL?I克:120mL，期間不斷攪拌，防止凍結成塊，得到膠原溶脹液；(4)稱取胃蛋白酶加入到膠原溶脹液中，鼠尾腱與蛋白酶質量比為50:I?100:1，在4°C，48?74小時酶解，期間間歇性攪拌。

鼠尾膠原：含細胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）準備好懸浮于培養(yǎng)液的細胞，并放置于冰浴中。將200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結），立即混勻。再加入23μL10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中（混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要測定pH值）。加入760μL的細胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后，加入適當體積的細胞培養(yǎng)液，轉移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。本品在室溫下pH中性時可迅速成膠，在操作過程中要盡量保持低溫。保存條件4℃保存，切勿凍存，有效期一年。建立利用自制的鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細胞的方法。

鼠尾膠原實驗應用：探討應用鼠尾膠原在豚鼠前庭毛細胞膜片鉗實驗中的促進毛細胞貼壁效果。方法制作鼠尾膠原，觀察全細胞膜片鉗實驗中，自制的鼠尾膠原對前庭毛細胞的貼壁黏附作用。結果無鼠尾膠原時，前庭毛細胞懸浮于外液，不宜封接；有鼠尾膠原時，前庭毛細胞貼附于培養(yǎng)皿底壁，易于封接和長時間（約8h)的觀察和記錄。鼠尾膠原對前庭毛細胞具有良好的貼壁黏附促進作用。結論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便，成本低廉。取大鼠尾巴洗凈，75%酒精浸泡5分鐘。蘇州鼠尾膠原廠家批發(fā)價

使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結構。昆明鼠尾膠原生產廠家

鼠尾膠原醋酸溶解：1．將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。2．建議將溶液轉移到擰口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經發(fā)現該方法會導致丟失蛋白。3．稀釋一定數量的膠原溶液。4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結合數小時或者2-8度過夜。昆明鼠尾膠原生產廠家