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來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-10-08

外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法,這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,由于微泡和外泌體沒(méi)有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn),也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過(guò)濾離心,這種操作簡(jiǎn)單、省時(shí),不影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不足的問(wèn)題。三是密度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高,但是前期準(zhǔn)備工作繁雜,耗時(shí),量少。外泌體檢測(cè)作為一種新型的液體活檢熱點(diǎn)技術(shù)已被許多臨床科研機(jī)構(gòu)普遍地應(yīng)用于一些病癥和疾病的無(wú)創(chuàng)診斷。形成了一種全新的細(xì)胞間信息傳遞系統(tǒng),影響細(xì)胞的生理狀態(tài)并與多種疾病的發(fā)生與進(jìn)程密切相關(guān)。廣州外泌體提取試劑廠家直銷

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外泌體(Exosomes)是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡(ExtracellularVesicles,EVs),其大小為30-150nm,具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),含有豐富的內(nèi)含物(包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等),參與細(xì)胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,包括血液、唾液、尿液、乳汁等,同時(shí)也存在于組織樣本中,如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。腦組織分離方法簡(jiǎn)述:將腦組織剪成薄片,放入離心管中加上消化液進(jìn)行消化,經(jīng)水浴、反復(fù)輕輕上下顛倒,再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中,混勻,置于冰上。再進(jìn)行一系列的差速超速離心過(guò)程,包括除雜、濾膜過(guò)濾、超離等。較后用PBS重懸外泌體,用重懸后的外泌體進(jìn)行下面的透射電鏡(TEM)、納米粒徑追蹤分子(NTA)和markerWB鑒定。來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中徐州外泌體提取試劑廠家直銷外泌體提?。簶颖镜恼扯扰c分離的外泌體純度有顯著的相關(guān)性。

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外泌體(Exosome)是由細(xì)胞分泌而來(lái)的微小囊泡,直徑約為30-200nm,密度在1.13-1.21g/ml,具有杯狀形態(tài)、雙層膜結(jié)構(gòu),天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和細(xì)胞培養(yǎng)基等生物體液中。包括瘤細(xì)胞在內(nèi)幾乎所有類型的細(xì)胞(免疫細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、干細(xì)胞),都可以產(chǎn)生并釋放exosome。Exosome內(nèi)含有與細(xì)胞來(lái)源相關(guān)的蛋白質(zhì)rRNA和microRNA,Exosome可通過(guò)細(xì)胞膜受體直接受體細(xì)胞,也可運(yùn)輸?shù)鞍踪|(zhì)、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA,甚至細(xì)胞器進(jìn)入受體細(xì)胞,參與細(xì)胞間通訊。Exosome在免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)、血管生成、凋亡、凝血和廢物處理等生理過(guò)程發(fā)揮關(guān)鍵作用,不同細(xì)胞來(lái)源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同,可作為多種疾病的早期診斷標(biāo)記物,也能作為靶向藥物的載體進(jìn)行疾病

1983年,外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn),1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,參與細(xì)胞間通訊,對(duì)外泌體的研究興趣日益增長(zhǎng),無(wú)論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。如何高效地提取外泌體是實(shí)現(xiàn)這項(xiàng)新興液體活檢技術(shù)臨床常規(guī)化應(yīng)用的關(guān)鍵外泌體的提取有超速離心、試劑盒、超濾法、蔗糖密度梯度離心等,然而各種方法均有其利弊。

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外泌體項(xiàng)目獲批學(xué)科方向:從統(tǒng)計(jì)來(lái)看,與前年相似外泌體立項(xiàng)集中的領(lǐng)域還是一些病癥學(xué),近年來(lái)外泌體發(fā)表的文章也絕大部分與其在一些病癥的形成,耐藥性,檢測(cè)等方面有關(guān)。例如2019年發(fā)表在MolecularCancer(IF=10.679)上的文章表明外泌體FMR1-AS1通過(guò)TLR7/NFκB/c-My信號(hào)通路在女性食管ai中促進(jìn)維持ai癥干細(xì)胞樣細(xì)胞的動(dòng)態(tài)平衡。發(fā)表在JournalofExperimental&ClinicalCancerResearch(IF=5.646)上的一篇文章發(fā)現(xiàn)外泌體轉(zhuǎn)運(yùn)p-STAT3可促進(jìn)結(jié)直腸ai細(xì)胞獲得性5-FU耐藥性。發(fā)表在Cancers(IF=6.162)上的一篇文章則研究了腹腔灌洗液中細(xì)胞外囊泡相關(guān)的miRNA作為子宮內(nèi)膜ai分子標(biāo)志物的可能性。此外,在神經(jīng)系統(tǒng)和精神疾病,中醫(yī)學(xué)及其他領(lǐng)域也有不少外泌體相關(guān)項(xiàng)目中標(biāo)。外泌體提取試劑直銷價(jià)外泌體檢測(cè)作為一種新型的液體活檢熱點(diǎn)技術(shù)已被許多臨床科研機(jī)構(gòu)普遍地應(yīng)用于一些病癥和疾病的無(wú)創(chuàng)診斷同時(shí)對(duì)超速離心機(jī)的設(shè)備要求以及操作程序的培訓(xùn)較大提高了提取成本。寧波正規(guī)外泌體提取試劑廠家批發(fā)價(jià)

使用可截留100KD分子量的膜,通過(guò)離心截留上清中的外泌體,截留完成后。廣州外泌體提取試劑廠家直銷

人體內(nèi)多種細(xì)胞及體液均可分泌外泌體,包括內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞、血小板、平滑肌細(xì)胞等。當(dāng)其由宿主細(xì)胞被分泌到受體細(xì)胞中時(shí),外泌體可通過(guò)其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來(lái)調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊主要通過(guò)以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細(xì)胞膜蛋白結(jié)合,進(jìn)而靶細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路。二是在細(xì)胞外基質(zhì)中,外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合,從而細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路。有報(bào)道稱一些外泌體膜上蛋白在其來(lái)源細(xì)胞膜上未能檢測(cè)出。三是外泌體膜可以與靶細(xì)胞膜直接融合,非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA。廣州外泌體提取試劑廠家直銷