溫州濟南鼠尾膠原

膠原蛋白分離提純實驗方案：提取鼠尾膠原蛋白的實驗步驟：1、使用溶解有一定比例胃蛋白酶的酸溶液對初步處理的鼠尾腱進行酶解，持續(xù)一段時間待混合物變成無色、透明、粘稠液體后即可在4℃，5000g的離心力下離心20min，收集上清即為粗制鼠尾膠原蛋白原液。2、將一定濃度的氯化鈉溶液加入其中，持續(xù)攪拌直至白色絮狀沉淀從溶液中析出，繼續(xù)加入氯化銨直至沉淀不在析出為止，4℃，5000g的離心力下離心20min后獲得白色沉淀。沉淀物加入一定濃度的醋酸溶液中溶解。3、將溶解后的鼠尾膠原蛋白溶液繼續(xù)反復(fù)進行鹽析處理，重復(fù)步驟2的過程2~4次。_x005f_x005f_x005f_x000c_鼠尾膠原蛋白經(jīng)SDS-PAGE蛋白質(zhì)電泳。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便，成本低廉。鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細胞中的應(yīng)用。溫州濟南鼠尾膠原

簡介：鼠尾I型膠原蛋白（Collagenfromrattail,TypeI）系采用Birkedal-Hansen方法在無菌下制備，純度達到95%以上，可溶于0.006mol/L乙酸。本品可用于細胞培養(yǎng)皿的包被，特別適合普通細胞培養(yǎng)器皿不易貼壁細胞的培養(yǎng)；也可用于制備三維膠原凝膠，使細胞在模擬的三維環(huán)境中生長。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：1、SDS-PAGE分析純度大于95%。2、無菌檢驗結(jié)果為陰性。3、本品2μg/cm2包被細胞培養(yǎng)皿后培養(yǎng)PC-12細胞，貼壁及生長正常。4、本品濃度1mg/mL，pH7.0時形成具有一定強度的三維膠原凝膠，NIH-3T3細胞在三維凝膠內(nèi)生長正常、PC-12細胞在三維凝膠表面生長正常。廣州正規(guī)鼠尾膠原生產(chǎn)廠家成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細胞的方法，并且制作簡便,成本低廉。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：通過醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的。鼠尾膠原蛋白可用于包被細胞培養(yǎng)器皿，培養(yǎng)一些在普通細胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細胞。也可用于制備三維膠，模擬真實的生長環(huán)境，使細胞在三維環(huán)境中生長。1，在使用鼠膠原蛋白型包被的細胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12細胞的貼壁和生長。1mg/ml濃度以上，pH左右時可形成具有一定強度的三維膠，檢查到NIH-3T3細胞在三維膠內(nèi)正常生長、PC-12細胞在三維膠表面正常生長。使用方法：1、細胞培養(yǎng)器皿的表面包被推薦濃度：1-5ug/cm0.012mg/ml。按以下表格體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用說明：含細胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細胞，并放置于冰浴中。將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入23ul10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后，加入適當(dāng)體積的細胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。手持尾巴，用止血鉗夾住鼠尾的較高，折斷尾骨后拉出尾腱。

鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基和一種天然的黏附劑，可用于細胞培養(yǎng)皿的包被，特別適合普通細胞培養(yǎng)器皿不易貼壁細胞的培養(yǎng)；也可用于制備三維膠原凝膠，使細胞在模擬的三維環(huán)境中生長。制備鼠尾膠原方法：1、取大鼠尾巴洗凈，75%酒精浸泡5分鐘；2、手持尾巴，用止血鉗夾住鼠尾的較高，折斷尾骨后拉出尾腱；3、將尾腱剪斷置于平皿中，生理鹽水浸泡；4、重復(fù)步驟2、3，直至尾腱量夠用；5、吸去生理鹽水，將尾腱稱重（0.5-1克）；6、將尾腱置于平皿內(nèi)剪碎，轉(zhuǎn)移至三角燒瓶中；7、按每克尾腱50ml的比例，加入0.1%醋酸溶液；8、搖晃，使尾腱分散于醋酸溶液中，4℃放置一星期；9、離心，4000轉(zhuǎn)/分，10-15分鐘；10、吸取上清，分裝成小瓶，4℃保存。將黏稠的膠體溶液進行高速冷凍離心處理。重慶鼠尾膠原銷售廠家

鼠尾膠原蛋白的用途很普遍，可用于化妝品，工業(yè)和食品生產(chǎn)等領(lǐng)域。溫州濟南鼠尾膠原

膠原蛋白的功效：1.膠原蛋白可以作為一種補鈣食品，膠原蛋白的特征氨基酸羥基脯氨酸是血漿中運輸鈣到骨細胞的運載工具，骨細胞中的骨膠原是羥基磷灰石的粘合劑，它與羥基磷灰石共同構(gòu)成了骨骼的主體。因此，只要攝入足夠的膠原蛋白，就能保證正常機體鈣質(zhì)的攝入量，膠原蛋白可制成補鈣的保健食品。2.膠原蛋白在人體運動鍛煉的過程中，可以促使身體消耗大量脂肪達到的效果。但需要注意的是膠原蛋白本身是沒有作用的，它只能在運動呢鍛煉是增加脂肪的消耗量。3.膠原蛋白是身體免疫作用中負責(zé)重要功能的阿米巴細胞清掃異物的感知器，因此對預(yù)防疾病很有幫助。可提高免疫機能、克制細胞、活化細胞機能、活化筋骨、治好關(guān)節(jié)炎及酸痛。溫州濟南鼠尾膠原