南京昆明細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：物品(PS)物品，比如青霉素和鏈霉素，是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物。這些物品一般對(duì)于真核細(xì)胞無(wú)毒，但陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑增加了細(xì)胞的通透性，使物品可以進(jìn)入細(xì)胞。這降低了細(xì)胞的活性，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低。所以，在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中不能使用物品，甚至在準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染前進(jìn)行細(xì)胞鋪板時(shí)也要避免使用物品。這樣，在轉(zhuǎn)染前也不必潤(rùn)洗細(xì)胞。對(duì)于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，不要在選擇性培養(yǎng)基中使用青霉素和鏈霉素，ICIN選擇性物品的競(jìng)爭(zhēng)性克制劑。另外，為了保證無(wú)血清培養(yǎng)基中細(xì)胞的健康生長(zhǎng)，使用比含血清培養(yǎng)基更少的物品量通過(guò)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化合適的轉(zhuǎn)染條件對(duì)于轉(zhuǎn)染效率的提高很重要。南京昆明細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑

轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：細(xì)胞鋪板密度用于轉(zhuǎn)染的較佳細(xì)胞密度根據(jù)不同的細(xì)胞類型或應(yīng)用而異。一般轉(zhuǎn)染時(shí)，貼壁細(xì)胞密度為70%-90%，懸浮細(xì)胞密度為2×106-4×106細(xì)胞/ml時(shí)效果較好。確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞沒有長(zhǎng)滿或處于靜止期。因?yàn)檗D(zhuǎn)染效率對(duì)細(xì)胞密度很敏感，所以在不同實(shí)驗(yàn)間保持一個(gè)基本的傳代步驟很重要。鋪板細(xì)胞數(shù)目的增加可以增加轉(zhuǎn)染活性和細(xì)胞產(chǎn)量。在三種不同密度進(jìn)行細(xì)胞鋪板的比較表明鋪板密度較高的，CAT活性也較高。得到較高活性所需的LIPOFECTAMINE試劑的量也相應(yīng)增加了。這些結(jié)果說(shuō)明，對(duì)于轉(zhuǎn)染相同量的DNA所需的較佳陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑的量會(huì)因細(xì)胞密度而異。南京昆明細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑由于脂質(zhì)體對(duì)細(xì)胞有一定的毒性，所以轉(zhuǎn)染時(shí)間一般不超過(guò)24小時(shí)。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)染技術(shù)已成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能、調(diào)控基因表達(dá)、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗(yàn)中，其應(yīng)用越來(lái)越***。那么，羅氏都有哪些轉(zhuǎn)染試劑，其優(yōu)勢(shì)都有哪些？圖1.細(xì)胞轉(zhuǎn)染過(guò)程X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑簡(jiǎn)介：X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑是脂質(zhì)和其它成分混合而得的一類多組份試劑，溶于80%乙醇中，經(jīng)0.2μm濾膜過(guò)濾，然后封裝于玻璃小瓶中，適用于細(xì)胞分析的多種實(shí)驗(yàn)。

DNA細(xì)胞轉(zhuǎn)染步驟：1.提前現(xiàn)在細(xì)胞鋪板提前現(xiàn)在將細(xì)胞種植在24孔板中，以轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度在60％左右為宜。2.轉(zhuǎn)染過(guò)程⑴將0.8μg的DNA用25μl無(wú)血清稀釋液稀釋，充分混勻，制成DNA稀釋液。注意：無(wú)血清稀釋液建議采用OPTI-MEM、無(wú)血清DMEM或1640。⑵將2μlEntransterTM-H4000用25μl無(wú)血清稀釋液體稀釋，充分混勻，制成EntransterTM-H4000稀釋液。室溫靜置5分鐘。⑶將EntransterTM-H4000稀釋液分別加入到DNA稀釋液中，充分混勻（可用振蕩器振蕩或用加樣器吹吸10次以上），室溫靜置15分鐘。轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備完成。⑷將轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入到含細(xì)胞和完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器上，輕柔混勻。注意：①對(duì)本試劑，采用含血清的全培養(yǎng)基有助于提升轉(zhuǎn)染效率。②完全培養(yǎng)基可加物品。建議選擇50%~80%區(qū)間密度進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染。

如何有效提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)效率：1.選擇高效的轉(zhuǎn)染方法不同轉(zhuǎn)染試劑有不同的轉(zhuǎn)染方法，但大多大同小異。轉(zhuǎn)染時(shí)應(yīng)跟據(jù)具體轉(zhuǎn)染試劑推薦的方法，但也要注意，因不同實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的細(xì)胞性質(zhì)不同，質(zhì)粒定量差異，操作手法上的差異等，其轉(zhuǎn)染效果可能不同，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的具體條件來(lái)確定較佳轉(zhuǎn)染條件。2.確保所構(gòu)建載體的質(zhì)量。轉(zhuǎn)染載體的構(gòu)建（細(xì)菌載體，質(zhì)粒DNA，RNA，PCR產(chǎn)物，寡核苷酸等）也影響轉(zhuǎn)染結(jié)果。細(xì)菌載體對(duì)特定宿主細(xì)胞傳染效率較高，但不同細(xì)菌載體有其特定的宿主，有的還要求特定的細(xì)胞周期，如逆轉(zhuǎn)錄細(xì)菌需侵染分裂期的宿主細(xì)胞，此外還需考慮一些安全問(wèn)題（如基因污染）。除載體構(gòu)建外，載體的形態(tài)及大小對(duì)轉(zhuǎn)染效率也有不同的影響，如前面提到的超螺旋及線性DNA對(duì)瞬時(shí)和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的影響。如果基因產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞有毒性作用，轉(zhuǎn)染也很難進(jìn)行，因此選擇組成或可調(diào)控，強(qiáng)度合適的啟動(dòng)子也很重要，同時(shí)做空載體及其它基因的相同載體構(gòu)建的轉(zhuǎn)染正對(duì)照可排除毒性影響的干擾。轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備①將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。貴陽(yáng)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品介紹

大部分細(xì)胞可以在無(wú)血清培養(yǎng)基中幾個(gè)小時(shí)內(nèi)保持健康。南京昆明細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑

轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：培養(yǎng)基中的物品物品，比如青霉素和鏈霉素，是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物。這些物品一般對(duì)于真核細(xì)胞無(wú)毒，但陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑增加了細(xì)胞的通透性，使物品可以進(jìn)入細(xì)胞。這降低了細(xì)胞的活性，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低。所以，在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中不能使用物品，甚至在準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染前進(jìn)行細(xì)胞鋪板時(shí)也要避免使用物品。這樣，在轉(zhuǎn)染前也不必潤(rùn)洗細(xì)胞。對(duì)于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，不要在選擇性培養(yǎng)基中使用青霉素和鏈霉素，因?yàn)檫@些物品是GENETICIN選擇性物品的競(jìng)爭(zhēng)性克制劑。南京昆明細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑