深圳細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑直銷廠家

具有細(xì)胞毒性極低、轉(zhuǎn)染后細(xì)胞存活率高，生成可信任的生理學(xué)相關(guān)數(shù)據(jù)。2.操作簡便、節(jié)省時間，只需對X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行簡單稀釋，再與質(zhì)粒DNA共同孵育，即可直接向細(xì)胞添加反應(yīng)混合物(有無血清均可)。3.對于常用細(xì)胞無需進(jìn)行費時費力的優(yōu)化工作。X-tremeGENEHPDNA轉(zhuǎn)染試劑簡介：X-tremeGENEHPDNA轉(zhuǎn)染試劑是一種高效的無動物源成分的低毒轉(zhuǎn)染試劑，兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基，可用于轉(zhuǎn)染各類真核細(xì)胞(包括昆蟲細(xì)胞)以及多種難轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。優(yōu)勢：直到外源基因在細(xì)胞分裂過程中因各種因素丟失為止。深圳細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑直銷廠家

細(xì)胞轉(zhuǎn)染為什么不能加血清：傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染試劑一般會增加細(xì)胞的通透性，這樣會把血清中的成分帶入細(xì)胞，造成細(xì)胞毒性。陽離子脂質(zhì)體，轉(zhuǎn)染的過程是帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞。血清中含有大量的蛋白質(zhì)，在轉(zhuǎn)染過程中，帶負(fù)電的蛋白質(zhì)可能干擾陽離子脂質(zhì)體對核酸的吸附，影響轉(zhuǎn)染效率。同時，也會將血清中的蛋白帶入細(xì)胞，引發(fā)細(xì)胞毒性，故不能有血清轉(zhuǎn)染。這些轉(zhuǎn)染試劑要求在轉(zhuǎn)染前換無血清培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)染后4-6h在更換成有血清培養(yǎng)基，這其實是為了減輕轉(zhuǎn)染造成的細(xì)胞毒性和轉(zhuǎn)染效率的降低。正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑報價轉(zhuǎn)染試劑與細(xì)胞不匹配細(xì)胞轉(zhuǎn)染較適合的不是原代細(xì)胞。

影響轉(zhuǎn)染試驗的因素：細(xì)胞狀態(tài)變化：（1）轉(zhuǎn)染試劑與細(xì)胞不匹配細(xì)胞轉(zhuǎn)染較適合的不是原代細(xì)胞，也不是傳代很多次的細(xì)胞。這是因為細(xì)胞培養(yǎng)在實驗室中保存數(shù)月和數(shù)年后會經(jīng)歷突變，總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化。這會導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細(xì)胞行為的變化。較適合轉(zhuǎn)染的細(xì)胞是經(jīng)過幾次傳代后達(dá)到對數(shù)生長期的細(xì)胞，細(xì)胞生長旺盛，較容易轉(zhuǎn)染。（2）把握時機(jī)沒錯！轉(zhuǎn)染也有適當(dāng)?shù)臅r機(jī)，相比較非分裂細(xì)胞——分裂細(xì)胞往往要比靜止細(xì)胞更易于攝取并表達(dá)外源DNA。因此對大多數(shù)轉(zhuǎn)染操作而言，細(xì)胞都在轉(zhuǎn)染當(dāng)天或前現(xiàn)在種板。同樣重要的是細(xì)胞在種板進(jìn)行轉(zhuǎn)染時不應(yīng)處于過度生長的狀態(tài)，如細(xì)胞數(shù)量過多，互相疊加，營養(yǎng)物質(zhì)耗竭，代謝廢物積聚，轉(zhuǎn)染率低下也是很正常的！

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項：1.細(xì)胞鋪板密度用于轉(zhuǎn)染的較佳細(xì)胞密度根據(jù)不同的細(xì)胞類型或應(yīng)用而異。因轉(zhuǎn)染試劑對細(xì)胞有毒害作用，細(xì)胞太少，容易死。一般轉(zhuǎn)染時，貼壁細(xì)胞密度為70%-90%，懸浮細(xì)胞密度為2-4×106細(xì)胞/ml，確保轉(zhuǎn)染時細(xì)胞沒有長滿或處于靜止期。因為轉(zhuǎn)染效率對細(xì)胞密度很敏感，所以在不同實驗間保持一個基本的傳代步驟很重要。鋪板細(xì)胞數(shù)目的增加可以增加轉(zhuǎn)染活性和細(xì)胞產(chǎn)量。細(xì)胞的融合度必須要達(dá)到90%才能做啟動子的選擇獲得高轉(zhuǎn)染活性所需選擇的啟動子依賴于選用的細(xì)胞系和要表達(dá)的蛋白。CMV啟動子在大多數(shù)細(xì)胞類型中可以獲得高表達(dá)活性。同其他啟動子，如SV40和RSV(勞斯肉瘤細(xì)菌)相比，在BHK-21中其活性較高。這三種細(xì)菌啟動子在T細(xì)胞來源的細(xì)胞系，如Jurkat中組成表達(dá)水平較低。轉(zhuǎn)染后在培養(yǎng)基中加入PHA-L和PMA可以啟動Jurkat細(xì)胞中CMV啟動子，而單PMA就足以啟動KG1和K562(人骨髓瘤白細(xì)胞)中的CMV啟動子。SV40啟動子的表達(dá)在含有大T抗原(存在于COS-1和COS-7)時會提高，因為大T抗原可以刺激染色體外的合成。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細(xì)胞中。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的原理、操作步驟以及小技巧：一、脂質(zhì)體(Liposome)轉(zhuǎn)染方法原理脂質(zhì)體作為體內(nèi)和體外輸送載體的工具，已經(jīng)研究的十分普遍，中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA，借助脂質(zhì)膜將DNA導(dǎo)入細(xì)胞膜內(nèi)。帶正電的陽離子脂質(zhì)體，DNA并沒有預(yù)先包埋在脂質(zhì)體中，而是帶負(fù)電的DNA自動結(jié)合到帶正電的脂質(zhì)體上，形成DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物，從而吸附到帶負(fù)電的細(xì)胞膜表面，經(jīng)過內(nèi)吞被導(dǎo)入細(xì)胞。優(yōu)點:與其它方法相比，有較高的效率和較好的重復(fù)性，它適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細(xì)胞中，是目前條件下較方便的轉(zhuǎn)染方法之一果觀察到轉(zhuǎn)染效率降低，可以試著轉(zhuǎn)染新鮮培養(yǎng)的細(xì)胞以恢復(fù)較佳結(jié)果。開封正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家直銷

在瞬時轉(zhuǎn)染質(zhì)粒中往往都含有一個報告基。深圳細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑直銷廠家

細(xì)胞轉(zhuǎn)染操作方法：轉(zhuǎn)染，是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因?qū)儆谕ㄟ^物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的范例；化學(xué)介導(dǎo)方法很多，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù)；生物介導(dǎo)方法，有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染，和現(xiàn)在比較多見的各種細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。理想細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點。細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)，是目前轉(zhuǎn)染效率較高的方法，同時具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢。但是，細(xì)菌轉(zhuǎn)染方法的準(zhǔn)備程序復(fù)雜，常常對細(xì)胞類型有很強(qiáng)的選擇性，在一般實驗室中很難普及。深圳細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑直銷廠家