徐州貴陽(yáng)鼠尾膠原

鼠尾膠原包被培養(yǎng)板：胎干細(xì)胞在體外可誘導(dǎo)分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞,進(jìn)而形成血管,因而成為血管組織工程理想的種子細(xì)胞來(lái)源之一。目的:探討建立定向誘導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化的方法。方法:在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層上培養(yǎng)人胚胎干細(xì)胞H1,將H1細(xì)胞團(tuán)塊轉(zhuǎn)移到鼠尾膠原包被的培養(yǎng)板,貼壁24-48h后,培養(yǎng)基換為含不同輔助因子和內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)添加劑的EGM-2內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基。結(jié)果與結(jié)論:①在EGM-2內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基誘導(dǎo)下,細(xì)胞逐步表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)記基因VEGFR-2、PECAM1、vWF、CD34、VE-cadherin、GATA-2。②分化細(xì)胞表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)記VE-cadherin、CD31。③分化細(xì)胞具有吞噬低密度脂蛋白功能。說(shuō)明將人胚胎干細(xì)胞接種在鼠尾膠原包被培養(yǎng)板上,通過(guò)EGM-2內(nèi)皮培養(yǎng)體系誘導(dǎo),可直接分化為功能性血管內(nèi)皮細(xì)胞。為研究胞外基質(zhì)對(duì)誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞血管內(nèi)皮細(xì)胞分化的作用以及相關(guān)信號(hào)分子機(jī)制打下了基礎(chǔ)。在冰水浴中將粉碎的鼠尾腱在醋酸溶液中溶脹。徐州貴陽(yáng)鼠尾膠原

鼠尾膠原包被培養(yǎng)板：胎干細(xì)胞在體外可誘導(dǎo)分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞,進(jìn)而形成血管,因而成為血管組織工程理想的種子細(xì)胞來(lái)源之一。目的:探討建立定向誘導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化的方法。方法:在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層上培養(yǎng)人胚胎干細(xì)胞H1,將H1細(xì)胞團(tuán)塊轉(zhuǎn)移到鼠尾膠原包被的培養(yǎng)板,貼壁24-48h后,培養(yǎng)基換為含不同輔助因子和內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)添加劑的EGM-2內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基。結(jié)果與結(jié)論:①在EGM-2內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基誘導(dǎo)下,細(xì)胞逐步表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)記基因VEGFR-2、PECAM1、vWF、CD34、VE-cadherin、GATA-2。②分化細(xì)胞表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)記VE-cadherin、CD31。③分化細(xì)胞具有吞噬低密度脂蛋白功能。說(shuō)明將人胚胎干細(xì)胞接種在鼠尾膠原包被培養(yǎng)板上,通過(guò)EGM-2內(nèi)皮培養(yǎng)體系誘導(dǎo),可直接分化為功能性血管內(nèi)皮細(xì)胞。為研究胞外基質(zhì)對(duì)誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞血管內(nèi)皮細(xì)胞分化的作用以及相關(guān)信號(hào)分子機(jī)制打下了基礎(chǔ)。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄，并且制作簡(jiǎn)便，成本低廉。開(kāi)封鼠尾膠原服務(wù)電話(huà)堿法提取膠原蛋白常用的處理劑為石灰、氫氧化鈉、碳酸鈉等。

鼠尾膠原蛋白：膠原蛋白（Collagen）是結(jié)締組織和內(nèi)臟部位外基質(zhì)的主要成分，但在皮膚、肌腱、骨骼中分布較為普遍。膠原蛋白在結(jié)構(gòu)和遺傳學(xué)上被分為不同類(lèi)型，I型膠原蛋白（Collagen, Type I）結(jié)構(gòu)上是由2個(gè)α1鏈和1個(gè)α2鏈組成的異源多聚體，在37℃中性條件下可形成3股螺旋結(jié)構(gòu)，被普遍用于多種細(xì)胞的培養(yǎng)基質(zhì)，如肝細(xì)胞、纖維細(xì)胞、脊髓神經(jīng)節(jié)、雪旺氏細(xì)胞等。另外，I型膠原蛋白在細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、遷移和組織形態(tài)的發(fā)生等方面也具有重要應(yīng)用。膠原蛋白I（rat tail tendon collagen type I）根據(jù)Birkedal-Hansen方法，經(jīng)過(guò)醋酸（HAc）抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備所得，可用于制備三維膠，模擬細(xì)胞真實(shí)的生長(zhǎng)環(huán)境；也可以用于包被組織培養(yǎng)皿表面，提高細(xì)胞表面粘附性，比如培養(yǎng)角質(zhì)形成細(xì)胞、肝細(xì)胞等原代細(xì)胞。

鼠尾膠原實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：探討應(yīng)用鼠尾膠原在豚鼠前庭毛細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)中的促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁效果。方法制作鼠尾膠原，觀(guān)察全細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)中，自制的鼠尾膠原對(duì)前庭毛細(xì)胞的貼壁黏附作用。結(jié)果無(wú)鼠尾膠原時(shí)，前庭毛細(xì)胞懸浮于外液，不宜封接；有鼠尾膠原時(shí)，前庭毛細(xì)胞貼附于培養(yǎng)皿底壁，易于封接和長(zhǎng)時(shí)間（約8h)的觀(guān)察和記錄。鼠尾膠原對(duì)前庭毛細(xì)胞具有良好的貼壁黏附促進(jìn)作用。結(jié)論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄，并且制作簡(jiǎn)便，成本低廉。結(jié)果無(wú)鼠尾膠原時(shí)，前庭毛細(xì)胞懸浮于外液，不宜封接。

膠原的立體結(jié)構(gòu)與一般的球狀蛋白質(zhì)完全不同，每一條亞基形成一股左手旋轉(zhuǎn)的螺旋，其中每 3個(gè)氨基酸殘基形成一圈螺旋。3 條左手螺旋再扭在一起形成一個(gè)右手大螺旋。這樣的螺旋稱(chēng)為 3股螺旋。小的甘氨酸殘基位于3股螺旋內(nèi)部。3股螺旋式的棒狀膠原分子的大小約是3000×15埃，這些棒狀分子首尾相連，并側(cè)向排列形成膠原微絲（其直徑可從50埃至數(shù)千埃）。膠原分子在兩端及沿軸向每隔 680埃的距離存在極性區(qū)，這些極性區(qū)能和重金屬離子結(jié)合，使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結(jié)構(gòu)。膠原蛋白是脊椎動(dòng)物和無(wú)脊椎動(dòng)物支持結(jié)構(gòu)的主要組成。廈門(mén)鼠尾膠原哪家便宜

吸去生理鹽水，將尾腱稱(chēng)重（0.5-1克）。徐州貴陽(yáng)鼠尾膠原

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng)：三維膠原的制備 鼠尾膠原蛋白 型在濃度1mg/ml 以上， pH 左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,建議成膠濃度 1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于 0.006mol/L 乙酸 中，在成膠過(guò)程中需要加入 0.06體積的 0.1mol/L NaOH 來(lái)中和。 需要的溶液 （均需要無(wú)菌、 預(yù)冷） 10mg/L 酚紅用于pH 指示） 0.1mol/LNaOH，0.1mol/L乙酸(一 般不用)，雙蒸水 200ul鼠尾膠原蛋白 型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入 690ul H2O 12ul0.1mol/L NaOH 12ul0.1mol/LNaOH 加到膠原溶液中， 會(huì)由于 NaOH 不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的 膠原凝結(jié)） 立即混勻。再加入 100ul 10PBS 10培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后 pH 左右，如果PBS 或培養(yǎng)液中沒(méi)有加 酚紅，初次使用時(shí)需要用 pH 試紙測(cè)試)。徐州貴陽(yáng)鼠尾膠原

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