寧波正規(guī)鼠尾膠原廠家直銷(xiāo)

鼠尾膠原，是一種天然培養(yǎng)基，它具有促進(jìn)體外培養(yǎng)細(xì)胞(特別是上皮細(xì)胞)貼壁的作用，同時(shí)也是一種天然的黏附劑，當(dāng)我們需要在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)放置小玻片，制備細(xì)胞爬片時(shí)，可在瓶底涂一層膠原，再放上小玻片，自然干燥后小玻片就固定于培養(yǎng)瓶之中。有點(diǎn)學(xué)術(shù)了，聽(tīng)不懂···貼壁，有什么意義？分散的單一細(xì)胞培養(yǎng)能夠比較理想地反映細(xì)胞的具體生物特性。選擇合適的培養(yǎng)基，可以解決培養(yǎng)中細(xì)胞脫落和細(xì)胞重聚的現(xiàn)象。鼠尾膠原，是一種細(xì)胞支持物，它是細(xì)胞外基質(zhì)的主要成份，可直接或間接參與細(xì)胞的附著。鼠尾I型膠原蛋白系采用方法在無(wú)菌下制備，純度達(dá)到95%以上，可溶于0.006mol/L乙酸。本品可用于細(xì)胞培養(yǎng)皿的包被，特別適合普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿不易貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)；也可用于制備三維膠原凝膠，使細(xì)胞在模擬的三維環(huán)境中生長(zhǎng)。鼠尾膠原醋酸溶解：制備成濃度為0.1%的溶液。寧波正規(guī)鼠尾膠原廠家直銷(xiāo)

一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法：1.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物，成透明澄清黏稠溶液；在冰水浴中，調(diào)節(jié)pH = 6.5，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出，4°C沉淀10小時(shí)，去除上清液，去除上清液，絮狀溶液高速冷凍離心處理，收集沉淀； 2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸再次溶液溶解沉淀物，成透明澄清黏稠溶液，冰水浴中，調(diào)節(jié)PH = 6.5 ;溶液依次通過(guò)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂、陰離子交換樹(shù)脂進(jìn)行脫鹽處理； (8)將脫鹽后的膠原蛋白溶液，-40至-20°C預(yù)凍2?4小時(shí)，然后真空冷凍干燥，凍干產(chǎn)品經(jīng)進(jìn)一步處理得到含水率在3%以下的膠原蛋白微粉，滅菌、包裝，得到成品膠原蛋白粉末。無(wú)錫正規(guī)鼠尾膠原銷(xiāo)售廠家鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細(xì)胞中的應(yīng)用。

提取鼠尾腱膠原工藝的優(yōu)化：?jiǎn)我蛩胤治?膠原提取率在一定參數(shù)范圍內(nèi)隨浸提時(shí)間、乙酸濃度及料液比的增加而增加。正交試驗(yàn),鼠尾腱膠原提取的較佳工藝參數(shù)為浸提時(shí)間72h、乙酸濃度0.5mol·L-1、料液比為1∶40。SDS-PAGE電泳顯示,樣品為Ⅰ型膠原,單寧酸沉淀實(shí)驗(yàn)顯示膠原降解程度低,傅里葉紅外光譜顯示膠原結(jié)構(gòu)完整。樣品氨基酸含量測(cè)定符合膠原蛋白的成分特征。中性膠原溶液在37℃時(shí)能夠形成固態(tài)膠原凝膠,膠原凝膠經(jīng)過(guò)碳化二亞胺(EDC)交聯(lián)后,掃描電鏡下顯示內(nèi)部相互連接,構(gòu)成孔徑適中的蜂窩狀多孔結(jié)構(gòu)。結(jié)論:成功建立并優(yōu)化鼠尾腱膠原蛋白的提取工藝,得出浸提時(shí)間、乙酸濃度及料液比等因素的較佳工藝參數(shù),有效提高了鼠尾腱膠原的提取效率。

鼠尾膠原蛋白提取、分離、純化方法的建立及鑒定：通過(guò)對(duì)鼠尾進(jìn)行剝離獲得鼠尾腱,用Tris-HCl緩沖液、胃蛋白酶處理獲得鼠尾膠原蛋白原液、反復(fù)使用氯化鈉溶液進(jìn)行分級(jí)鹽析、醋酸溶液復(fù)溶進(jìn)行鼠尾膠原蛋白的純化.超純水透析除去無(wú)機(jī)鹽類(lèi)獲得純化的鼠尾膠原蛋白。通過(guò)SDS-PAGE蛋白質(zhì)電泳、氨基酸含量分析等技術(shù)手段鑒定.結(jié)果 本研究建立的方法可以獲得高純度的鼠尾膠原蛋白,純度達(dá)到電泳純.與國(guó)外進(jìn)口的商業(yè)化鼠尾膠原蛋白產(chǎn)品相比無(wú)差異。研究了提取、分離、純化參數(shù)對(duì)得率、純度的影響,建立了較優(yōu)的鼠尾膠原蛋白提取條件，胃蛋白酶用量:1∶500,酶解時(shí)間:72 h,鹽析濃度:2 mol/L,提取所用酸溶液:0.05 mol/L醋酸溶液.結(jié)論 為鼠尾膠原蛋白的擴(kuò)大化生產(chǎn)提供了合適的工藝參數(shù),為大量獲得鼠尾膠原蛋白并進(jìn)行更深層次的功效方面研究提供了理論支持和實(shí)踐基礎(chǔ)。探討應(yīng)用鼠尾膠原在豚鼠前庭毛細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)中的促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁效果。

鼠尾膠原膠凝程序：膠原蛋白I按以下步驟使其pH達(dá)到堿性時(shí)凝膠。1）將無(wú)菌5cm左右的紗布海綿貼在150mm培養(yǎng)皿的蓋子上來(lái)制備氨蒸氣室。用氫氧化銨使紗布飽和，把蓋子放在150mm的培養(yǎng)皿上，暫放置一邊。2）將膠原蛋白I均勻涂布在要包被物的表面上，厚度可以根據(jù)需要改變，膠原蛋白I（50-100μL）足以涂覆22mm的蓋玻片。 對(duì)于直徑100mm的培養(yǎng)皿，每個(gè)加入約6mL; 對(duì)于60mm培養(yǎng)皿添加約2.3mL，對(duì)于35mm培養(yǎng)皿添加約1mL。3）將涂有膠原蛋白的蓋玻片或帶有蓋子的培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)移到氨蒸氣室并暴露三分鐘。4）在無(wú)菌蒸餾水中（35mm培養(yǎng)皿加5mL，60mm培養(yǎng)皿加10mL等）浸泡涂布的蓋玻片或培養(yǎng)皿30min。吸取原蒸餾水并加0.5-1.0mL無(wú)菌蒸餾水，放置在層流罩中過(guò)夜。5）吸出蒸餾水，用含血清的平衡鹽緩沖液溶液代替并保存在2-8°C。稱(chēng)取胃蛋白酶加入到膠原溶脹液中。徐州鄭州鼠尾膠原

鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上，pH 7左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度三維膠。寧波正規(guī)鼠尾膠原廠家直銷(xiāo)

鼠尾膠原在心肌細(xì)胞氧化損傷中的保護(hù)作用：膠原蛋白具有抗氧化作用，但既往在實(shí)驗(yàn)室主要將鼠尾膠原用于促進(jìn)細(xì)胞貼壁和支架構(gòu)建，對(duì)于其抗氧化作用目前尚無(wú)相關(guān)研究。目的：探討鼠尾膠原對(duì)過(guò)氧化氫導(dǎo)致離體心肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用。方法：將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細(xì)胞隨機(jī)接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿（實(shí)驗(yàn)組）和普通培養(yǎng)皿（對(duì)照組）中，并且均用0，10，100μmol/L H2O2誘導(dǎo)。24 h后，以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細(xì)胞的形態(tài)，應(yīng)用MTT 比色法檢測(cè)心肌細(xì)胞存活率，TUNEL 法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡形態(tài)，流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡率，黃嘌呤氧化酶法檢測(cè)超氧化物歧化酶活力，硫代巴比妥比色法檢測(cè)丙二醛水平，Western-Blot 檢測(cè)凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表達(dá)。寧波正規(guī)鼠尾膠原廠家直銷(xiāo)