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有些銅綠假單胞桿菌的保藏方法,如濾紙保藏法、液氮保藏法和冷凍干燥保藏法等均需使用保護劑來制備細(xì)胞懸液,以防止因冷凍或水分不斷升華對細(xì)胞的損害。保護性溶質(zhì)可通過氫和離子鍵對水和細(xì)胞所產(chǎn)生的親和力來穩(wěn)定細(xì)胞成分的構(gòu)型。保護劑有牛乳、血清、糖類、甘油、二甲亞砜等。銅綠假單胞桿菌的多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性、退火、延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成模板DNA經(jīng)加熱至93攝氏度左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結(jié)合,為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備。SHBCC D24670 瑞士乳桿菌R0052 Lactobacillus helveticus 嬰幼兒食品添加益生菌 乳酸桿菌培養(yǎng)基 .艾丁湖鹽盒菌菌株
銅綠假單胞菌對化學(xué)藥物的抵抗力比一般革蘭氏陰性菌強大。1:2000的洗必太,度米芬和新潔爾滅,1:5000的消毒凈在5分鐘內(nèi)均可將其殺死。0.5-1%醋酸也可迅速使其死亡。有些菌株對磺胺,鏈霉素,氯霉素敏感,但極易產(chǎn)生耐藥性。青霉素對此菌無效,但慶大霉素和多粘菌素B,E,氨基甙類、頭胞類等抗生養(yǎng)素作用較明顯。聯(lián)合用藥可減少耐藥菌株的產(chǎn)生。銅綠假單胞菌是院內(nèi)影響的常見病原菌,所以消毒措施對預(yù)防影響有重要作用。由于銅綠假單胞菌菌型多,與毒力有關(guān)的物質(zhì)也有多種,因此理想的菌苗仍在研制之中。銅綠假單胞菌對抗抵菌藥物主要存在產(chǎn)生抗生養(yǎng)素滅活酶或抗生養(yǎng)素修飾酶;改變抗抵菌藥物作用的靶位,從而逃避抗抵菌藥物的抗抵菌作用;膜屏障與主動外排,限制藥物達到其作用靶位。形成生物膜。溶血葡萄球菌枯草芽孢桿菌能夠很好的分解池中殘餌、糞便、有機物等,具有很強的清理水中垃圾小顆粒的作用。
銅綠假單胞桿菌離心的目的是兩個,去除DMSO,去除死細(xì)胞,這個是標(biāo)準(zhǔn)流程,但對一般人來說,把握不好離心轉(zhuǎn)速和時間,轉(zhuǎn)的不夠活細(xì)胞沉底的少,細(xì)胞就全被扔掉了,轉(zhuǎn)過了活細(xì)胞會受壓過大,死亡。此外在操作過程中容易污染,所以不推薦。另一種說法為細(xì)胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO),DMSO對細(xì)胞有一定的毒副作用,所以須將離心后的液體前倒凈,且一定倒干凈。關(guān)于細(xì)胞貼壁少的問題,凍存細(xì)胞解凍時1毫升細(xì)胞液要加10毫升-15m培養(yǎng)液,而培養(yǎng)基越少細(xì)胞越容易貼附。復(fù)蘇細(xì)胞分裝的問題,試驗中復(fù)蘇1管細(xì)胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,分裝過多,細(xì)胞濃度過低,不利于細(xì)胞的貼壁。
銅綠假單胞菌的生長對營養(yǎng)要求不高。對有正常菌群存在的臨床標(biāo)本或采自環(huán)境中的標(biāo)本應(yīng)接種選擇性培養(yǎng)基如麥康凱瓊脂培養(yǎng)基(MAC);對無正常菌群存在的臨床標(biāo)本如血液、腦脊液、穿刺液等可接種普通全營養(yǎng)型培養(yǎng)基(如TSA、PCA、營養(yǎng)瓊脂}或血瓊脂培養(yǎng)基、銅綠假單胞菌培養(yǎng)基。普通瓊脂培養(yǎng)基上生長18~24h可以見到扁平、濕潤的菌落,該菌所產(chǎn)生的帶熒光的水溶性青膿素與綠膿素相結(jié)合將使得培養(yǎng)基呈亮綠色;在血瓊脂平板上生長時可以見到在菌落的周圍有溶血環(huán),菌落呈金屬光澤;在銅綠假單胞菌培養(yǎng)基上呈藍綠色或者紅褐色菌落,365nm紫外燈下顯熒光。如果是在液體培養(yǎng)基中則呈渾濁狀生長,在液體表面形成菌落,而在培養(yǎng)基底部細(xì)菌的生長不良??莶菅挎邨U菌能夠促使土壤中的有機質(zhì)分解成腐殖質(zhì),刺激作物生長。
在BP平板上,金黃色葡萄球菌的典型菌落特征是呈圓形,表面光滑、凸起、濕潤、菌落直徑為2mm~3mm,顏色呈灰黑色至黑色,有光澤,常有淺色(非白色)的邊緣,周圍繞以不透明圈(沉淀),其外常有一清晰帶。當(dāng)用接種針觸及菌落時具有黃油樣黏稠感。有時可見到不分解脂肪的菌株,除沒有不透明圈和清晰帶外,其他外觀基本相同。從長期貯存的冷凍或脫水食品中分離的菌落,其黑色常較典型菌落淺些,且外觀可能較粗糙,質(zhì)地較干燥。在血平板上,形成菌落較大,圓形、光滑凸起、濕潤、金黃色(有時為白GB4789.10—20163色),菌落周圍可見完全透明溶血圈。在銅綠假單胞菌中,綠膿素的生物合成是以群體效應(yīng)來調(diào)控??际消}紅菌
銅綠假單胞菌含有O抗原(菌體抗原)以及H抗原(鞭毛抗原)。艾丁湖鹽盒菌菌株
銅綠假單胞桿菌(綠膿桿菌)常見問題有細(xì)胞漂浮,培養(yǎng)瓶不開封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察,如細(xì)胞大部分又貼回瓶底,表明細(xì)胞活力正常,剩余漂浮的細(xì)胞可以離心去掉,留10毫升培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察,細(xì)胞生長至匯合度百分之八十,進行消化傳代;如細(xì)胞還是不貼壁,將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶,原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),中間注意觀察。取銅綠假單胞桿菌細(xì)胞的過程中注意帶好防凍手套,護目鏡。關(guān)于這一點,在使用過程中尤為重要,細(xì)胞凍存管可能漏入液氮,解凍時凍存管中的氣溫急劇上升,可導(dǎo)致炸裂。艾丁湖鹽盒菌菌株
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