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銅綠假單胞菌含有O抗原(菌體抗原)以及H抗原(鞭毛抗原)。O抗原包含兩種成分:一種是其外膜蛋白,為保護(hù)性抗原;另一種是脂多糖,有特異性。O抗原可用以分型。銅綠假單胞菌的標(biāo)本采集,分別來自不同影響部位的各種標(biāo)本,包括血液、尿液、痰標(biāo)本、膿汁、穿刺液等。還包括來自醫(yī)院環(huán)境中的各種標(biāo)本如水、空氣、物體表面采樣等。通過染色鏡檢,銅綠假單胞菌為革蘭陰性桿菌,菌體大小(1.5~5.0)um×寬(0.5~1)um,細(xì)長且長短不一,有時呈球桿狀或線狀,成對或短鏈狀排列。菌體的一端有單鞭毛,無芽胞,無莢膜。銅綠假單胞菌的標(biāo)本采集,分別來自不同影響部位的各種標(biāo)本。巴氏芽孢桿菌菌株
對銅綠假單胞桿菌的復(fù)蘇,要先準(zhǔn)備一個茶缸或1000毫升的燒壞,內(nèi)裝2/3杯37攝氏度的溫水。從液氮中取出凍存管、迅速置于溫水中并不斷攪動。使凍存管中的凍存物在1分鐘之內(nèi)融化。打開凍存管,將細(xì)胞懸液吸到離心管中。1000rpm離心10分鐘,棄去上清液。沉淀加10毫升培養(yǎng)液,吹打均勻,再離心10分鐘,棄上清液。加適當(dāng)培養(yǎng)基后將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中,37攝氏度培養(yǎng),第二天觀察生長情況。器材通常為液氮罐、凍存管(塑料螺口凍存管或安瓿瓶)、離心管、吸管、離心機(jī)等。試劑通常為0.25%胰酶、培養(yǎng)基、含保護(hù)劑的培養(yǎng)基(即凍存液)。凍存液配制是培養(yǎng)基加入甘油或DSMO,使其終濃度達(dá)5—20%。保護(hù)劑的種類和用量視不同細(xì)胞而不同。配好后4攝氏度下保存。魯?shù)劓溍咕昕莶菅挎邨U菌單個細(xì)胞0.7~0.8×2~3微米,著色均勻。
有些銅綠假單胞桿菌的保藏方法,如濾紙保藏法、液氮保藏法和冷凍干燥保藏法等均需使用保護(hù)劑來制備細(xì)胞懸液,以防止因冷凍或水分不斷升華對細(xì)胞的損害。保護(hù)性溶質(zhì)可通過氫和離子鍵對水和細(xì)胞所產(chǎn)生的親和力來穩(wěn)定細(xì)胞成分的構(gòu)型。保護(hù)劑有牛乳、血清、糖類、甘油、二甲亞砜等。銅綠假單胞桿菌的多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性、退火、延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成模板DNA經(jīng)加熱至93攝氏度左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結(jié)合,為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備。
根據(jù)大腸桿菌在染上過程中能否產(chǎn)生腸毒的能力,可將大腸桿菌分為兩大類:即產(chǎn)腸有毒的大腸桿菌和非產(chǎn)腸有毒的大腸桿菌。產(chǎn)腸有毒的大腸桿菌是人和多種動物的任何染上性腹瀉的重要病原,鑒定產(chǎn)腸有毒的大腸桿菌主要是測定所分離大腸桿菌分泌的腸毒的類型。除此之外,也可以根據(jù)大腸桿菌產(chǎn)生腸毒的能力,結(jié)合其對不同腸毒的敏感性,而將大腸桿菌分型,稱為腸毒型。產(chǎn)腸毒的大腸桿菌進(jìn)入機(jī)體后,定植在小腸上皮細(xì)胞的表面,不損傷小腸上皮細(xì)胞也不侵入粘膜,而是通過產(chǎn)生的腸毒而引起腹瀉。大腸桿菌有不耐熱的腸毒和耐熱的腸毒兩種,均由質(zhì)粒編碼。根據(jù)所產(chǎn)生的大腸桿菌腸毒類型,可將產(chǎn)腸有毒的大腸桿菌細(xì)分為LT株、ST株(只產(chǎn)生一種,LT或ST)及LT/ST株(能產(chǎn)生兩種腸毒)。大腸桿菌可以發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣。
大腸桿菌檢測方法:ATP生物發(fā)光法:在近些年的發(fā)展過程中,生物發(fā)光技術(shù)應(yīng)用很廣,是一種比較快速的檢測微生物的技術(shù)。在活性細(xì)胞中,ATP是其常見的能量代謝產(chǎn),可以提供細(xì)胞生理活動過程中所需的能量。并且,該技術(shù)可以在生物體內(nèi)可以在一定范圍內(nèi)保持一定的含量。食品中的大腸桿菌檢測技術(shù)可以采用熒光光度的方法,因?yàn)樯矬w發(fā)光的原因是有熒光素酶的作用,產(chǎn)生了發(fā)光的效果。該物質(zhì)來源于北美的螢火蟲體內(nèi),可以催化熒光素的氧化作用,不過,該物質(zhì)性質(zhì)不穩(wěn)定,可以對熒光進(jìn)行快速分解。另外,該檢測技術(shù)結(jié)果獲得過程是非常快的,并且該設(shè)備攜帶方便,十分適用于現(xiàn)場檢測。在銅綠假單胞菌中,噬菌體分型所應(yīng)用的噬菌體現(xiàn)有24株,分型率達(dá)90%。唾液乳桿菌水楊素亞種菌株
銅綠假單胞菌存在的重要條件是潮濕的環(huán)境。巴氏芽孢桿菌菌株
葡萄球菌屬因其聚成葡萄串一樣而得名。是常見的化膿性球菌。醫(yī)務(wù)人員帶菌率高達(dá)70%以上。而且可能是耐藥性菌株,可成為院內(nèi)傳染的重要傳染源。葡萄球菌呈球形或橢圓形。直徑約0.5--1μm。經(jīng)常以葡萄串狀排列,有時可能散在、成雙、短鏈狀存在。沒有鞭毛、沒有芽孢,體外培養(yǎng)一般不形成莢膜,在體內(nèi)卻可形成莢膜。革蘭染色呈陽性。衰老、死亡、被吞噬細(xì)胞吞噬、青霉素等藥物作用下,菌體可革蘭染色陰性。葡萄球菌對營養(yǎng)要求不高,普通培養(yǎng)基生長良好。需氧或兼性厭氧。在18--40℃均可生長。耐鹽性強(qiáng)。在含有10%氯化鈉培養(yǎng)基中能生長,可用高鹽培養(yǎng)基分離菌種。普通瓊脂平板上形成圓形,表面光滑濕潤,不透明菌落。典型菌株產(chǎn)生脂溶性的金黃色的色素而使菌落呈金黃色。在血瓊脂平板上,因金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生溶素,在菌落周圍形成明顯的透明溶血環(huán)。巴氏芽孢桿菌菌株
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