MYGP培養(yǎng)基基礎

近年來，國內(nèi)外利用某些細菌特有的酶，選擇相應的作用底物，研制出某些細菌專門用的的顯色培養(yǎng)基，用于細菌的分離鑒別，收到了良好的效果，這種顯色培養(yǎng)基實際上也是鑒別培養(yǎng)基。其基本原理是將色原(或熒光原)與細菌作用底物的結合物加于培養(yǎng)基中，當細菌含有相應酶時，使該結合物分解而顯色(或顯示熒光)。如色原糖苷結合物在糖苷酶作用下分解，使糖苷與色原分離，并顯示顏色；熒光氨基酸結合物(不顯熒光)在氨基肽酶作用下，使氨基酸與熒光物質分離而顯示熒光。常用顯色的色原有α-萘酚、β-萘酚、鄰位硝基酚、對位硝基酚、對硝基苯胺、酚酞、2-氨基4-硝基苯等；常用的熒光物有4-甲基傘形酮(又稱7-羥基4-甲基香豆素)等。目前，顯色培養(yǎng)基已用于多種細菌的分離鑒別培養(yǎng)，如沙門菌、大腸埃希菌、李斯特菌、雙歧桿菌和乳酸桿菌、白色念珠菌等顯色培養(yǎng)基。培養(yǎng)基是用于微生物、細胞、組織等體外培養(yǎng)的營養(yǎng)精制的物質。MYGP培養(yǎng)基基礎

HBS 和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在 Eagle′s（2.2g/L） 中比在 Hanks′（0.35g/L）中高。碳酸氫鈉需用高水平的 CO2 平衡，以維持溶液的 PH 值。Eagle′s 液在空氣水平的CO2中，溶液會變堿，Hanks′液在 CO2 培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織，需要用Eagle′s液，如果只是清洗將要在細胞培養(yǎng)基中儲存的組織，用Hanks′液就可以了。由于大多數(shù)細胞適宜pH為7.2-7.4，偏離此范圍可能對細胞生長將產(chǎn)生有害的影響。但各種細胞對pH的要求也不完全相同，原代培養(yǎng)細胞一般對pH變動耐受差，無限細胞系耐受力強。但總體來說，細胞耐酸性比耐堿性強一些。在配制培養(yǎng)用液時，需要注意一點：新配的培養(yǎng)基在經(jīng)過 0.10um 或 0.22um 濾膜過濾時，溶液的pH 還會向上浮動0.2左右。碳酸氫鈉瓊脂基礎需要控制pH值、溫度、氣氛等因素，以保證培養(yǎng)基的穩(wěn)定性。

按培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分是否完全區(qū)分：1.基本培養(yǎng)基，亦稱“較低限度培養(yǎng)基”。只能滿足微生物野生型菌株生長需要的培養(yǎng)基，稱為基本培養(yǎng)基，是含有營養(yǎng)要求較低成分的合成培養(yǎng)基，常用“[-]”表示。這種培養(yǎng)基往往缺少某些生長因子，所以經(jīng)過誘變過的營養(yǎng)缺陷型菌株不能生長。2.完全培養(yǎng)基，基礎培養(yǎng)基添加血清等物質后，叫完全培養(yǎng)基，也叫（血清）細胞培養(yǎng)基。完全培養(yǎng)基可用來滿足微生物的各種營養(yǎng)缺陷型菌株的生長需要，常以“[+]”表示。3.補充培養(yǎng)基，凡是只能滿足相應的營養(yǎng)缺陷型生長需要的組合培養(yǎng)基，稱為補充培養(yǎng)基，它是在基本培養(yǎng)基中加入該菌株不能合成的營養(yǎng)因子而組成的。根據(jù)在基本培養(yǎng)基中加入的是A或B等營養(yǎng)因子代謝物而分別用[A]或[B]等來表示。

動物細胞培養(yǎng)必需的溶液，平衡鹽水（BSS）：Hanks 液和Earle液是常用的BSS基礎溶液。PH調整液：3.7%、5.6%、7.4%的NaHCO3溶液、HEPES溶液（二羥乙基哌嗪乙烷磺酸）細胞消化液:胰蛋白酶溶液、EDTA溶液、膠原酶溶液。1)青、鏈霉素，每毫升培養(yǎng)液含100U青霉素和100ug鏈霉素。2)卡那霉素：終濃度為50ug/ml培養(yǎng)液。3）制霉菌素：濃度25U/ml，小瓶分裝，每瓶一次用完。常用的動物血清主要有牛血清和馬血清。牛血清分為胎牛血清和犢牛血清，前者來源少，價格高；后者要求剛產(chǎn)下尚未哺乳的小牛，因為哺乳后的小牛血清中可能含有更復雜的成分。血清中已知的成分主要有蛋白質、氨基酸、葡萄糖等。蛋白質主要是白蛋白和球蛋白。好氧菌需要富含氧氣和富含葡萄糖的培養(yǎng)基，而厭氧菌則需要采用無氧培養(yǎng)技術。

還有一些鑒別性培養(yǎng)基，是利用細菌特有的各種酶系統(tǒng)，能分解利用各種特定的糖、醇、氨基酸或其他基質而產(chǎn)酸、產(chǎn)氣、產(chǎn)堿或產(chǎn)生其他可見物質，依此進行細菌的鑒別，例如常用的生化培養(yǎng)基。用于細菌生化特性試驗的培養(yǎng)基特點是在無糖的基礎培養(yǎng)基中加人某種特定的基質，并加人指示劑，細菌在此類培養(yǎng)基中的一系列生化反應結果，均通過指示劑顯示出來。此類培養(yǎng)基為生化反應鑒別培養(yǎng)基。根據(jù)用量又可分為常量生化培養(yǎng)基和微量生化培養(yǎng)基。值得注意的是生化試驗培養(yǎng)基的某些成分受高溫、pH等諸多因素的影響，在配制和使用時，應根據(jù)實際情況嚴格掌握，防止有效成分被破壞，以保障其使用效果。培養(yǎng)基可以分為有機培養(yǎng)基和無機培養(yǎng)基兩類。YMA培養(yǎng)基

常見的培養(yǎng)基有LB培養(yǎng)基，YPD培養(yǎng)基，M9培養(yǎng)基和DMEM培養(yǎng)基等。MYGP培養(yǎng)基基礎

選擇性培養(yǎng)基(selective media) 選擇性培養(yǎng)基含有營養(yǎng)物(增菌劑)和抑菌劑(選擇劑)，標本接種于此類培養(yǎng)基后，由于抑菌劑的選擇性抑制作用，使非目的菌受到不同程度的抑制，更有利于目的菌的增殖或分離。利用選擇性培養(yǎng)基經(jīng)過一定時間的增菌培養(yǎng)，再接種于選擇性鑒別培養(yǎng)基，可以提高目的菌的陽性檢出率。抑菌劑的種類很多，常用的有孔雀綠、燦爛綠、亞硒酸鈉、去氧膽酸鈉、膽鹽、四硫磺酸鈉等。抑菌劑的加入量要適宜、準確，有的劇毒，有的不耐高熱，配制時須特別注意。MYGP培養(yǎng)基基礎

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