堿性瓊脂

細(xì)胞培養(yǎng)液(liquid of culture cellulae) 是指用于各種目的的體外培養(yǎng)、保存、運(yùn)輸活組織及細(xì)胞的液體，實(shí)質(zhì)為人工模擬體內(nèi)生長的營養(yǎng)環(huán)境，使細(xì)胞在此環(huán)境中有生長和繁殖的能力。由于其成分?jǐn)?shù)量明確并可通過調(diào)節(jié)某一種成分來觀察被研究對象的各種生物學(xué)改變，被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)科的研究。細(xì)胞培養(yǎng)液的組成成分主要有水、氨基酸、維生素、碳水化合物、無機(jī)離子、生長因子等，這些成分必須通過嚴(yán)格挑選，嚴(yán)格測試后方可使用，所用的水必須達(dá)到2級試驗(yàn)用水(CB/T 6682-1992)，所用的器皿必須清潔無污并進(jìn)行高壓滅菌或干烤去熱源處理。細(xì)菌類培養(yǎng)基則包括馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基、麥芽瓊脂培養(yǎng)基等等。堿性瓊脂

不同類型微生物生長對氧化還原電位（F）的要求不一樣，一般好氧性微生物在F值為+0.1V以上時可正常生長，一般以+0.3—+0.4V為宜，厭氧性微生物只能在F值低于+0.1V條件下生長，兼性厭氧微生物在F值為+0.1V以上時進(jìn)行好氧呼吸，在+0.1V以下時進(jìn)行發(fā)酵。F值與氧分壓和pH有關(guān)，也受某些微生物代謝產(chǎn)物的影響。在pH相對穩(wěn)定的條件下，可通過增加通氣量（如振蕩培養(yǎng)、攪拌）提高培養(yǎng)基的氧分壓，或加入氧化劑，從而增加F值；在培養(yǎng)基中加入抗壞血酸、硫化氫、半胱氨酸、谷胱甘肽、二硫蘇糖醇等還原性物質(zhì)可降低F值。賴氨酸培養(yǎng)基（LYS）培養(yǎng)基的pH值需要根據(jù)不同微生物的生長適應(yīng)范圍進(jìn)行調(diào)節(jié)。

選擇性培養(yǎng)基是指根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基。其功能是使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌，從而提高該菌的篩選效率。酵母菌富集培養(yǎng)基：葡萄糖5%，尿素0.1%，硫化銨0.1%，磷酸二氫鉀0.25%，磷酸氫二鈉0.05%，七水合硫酸鎂0.1%，七水合硫酸鐵0.01%，酵母膏0.05%，孟加拉紅0.003%，pH4.5。富集好氧自生固氮菌：甘露醇1%，磷酸二氫鉀0.02%，七水合硫酸鎂0.02%，氯化鈉0.02%，二水合硫酸鈣0.01%，碳酸鈣0.5%

在培養(yǎng)基中加入 HEPES 有何好處?培養(yǎng)基中常用的緩沖體系是碳酸氫鹽，它可提供營養(yǎng)，但卻在生理 pH 條件下會降低緩沖能力。而HEPES 是一種很強(qiáng)的緩沖劑，能使細(xì)胞培養(yǎng)基在 pH7.2-7.6 條件下緩沖能力增強(qiáng)。HEPES溶液：是一種弱酸，中文名字是羥乙基哌秦乙硫磺酸，主要作用是防止培養(yǎng)基pH迅速變動。在開放式培養(yǎng)條件下，觀察細(xì)胞時培養(yǎng)基脫離了 5%CO2 的環(huán)境，CO2 氣體迅速逸出，pH迅速升高，若加了HEPES，此時可以維持 pH7.0 左右。一般在進(jìn)行克隆化培養(yǎng)時要添加HEPES。神經(jīng)細(xì)胞原代培養(yǎng)的過程中能用到。培養(yǎng)基是細(xì)胞和微生物生長所需的基本營養(yǎng)物質(zhì)和環(huán)境條件。

在配制培養(yǎng)基時應(yīng)盡量利用廉價(jià)且易于獲得的原料作為培養(yǎng)基成分，特別是在發(fā)酵工業(yè)中，培養(yǎng)基用量很大，利用低成本的原料更體現(xiàn)出其經(jīng)濟(jì)價(jià)值。例如，在微生物單細(xì)胞蛋白的工業(yè)生產(chǎn)過程中，常常利用糖蜜（制糖工業(yè)中含有蔗糖的廢液）、乳清（乳制品工業(yè)中含有乳糖的廢液）、豆制品工業(yè)廢液及黑廢液（造紙工業(yè)中含有戊糖和己糖的亞硫酸紙漿）等都可作為培養(yǎng)基的原料。再如，工業(yè)上的甲烷發(fā)酵主要利用廢水、廢渣作原料，而在我國農(nóng)村，已推廣利用人畜糞便及禾草為原料發(fā)酵生產(chǎn)甲烷作為燃料。另外，大量的農(nóng)副產(chǎn)品或制品，如鼓皮、米糠、玉米漿、酵母浸膏、酒糟、豆餅、花生餅、蛋白胨等都是常用的發(fā)酵工業(yè)原料。培養(yǎng)基是一種供養(yǎng)分離的微生物和生物樣品的營養(yǎng)物質(zhì)基質(zhì)。MY培養(yǎng)基

孟德爾-韋伯利法可以計(jì)算培養(yǎng)基的可利用能量。堿性瓊脂

動物細(xì)胞培養(yǎng)必需的溶液，平衡鹽水（BSS）：Hanks 液和Earle液是常用的BSS基礎(chǔ)溶液。PH調(diào)整液：3.7%、5.6%、7.4%的NaHCO3溶液、HEPES溶液（二羥乙基哌嗪乙烷磺酸）細(xì)胞消化液:胰蛋白酶溶液、EDTA溶液、膠原酶溶液。1)青、鏈霉素，每毫升培養(yǎng)液含100U青霉素和100ug鏈霉素。2)卡那霉素：終濃度為50ug/ml培養(yǎng)液。3）制霉菌素：濃度25U/ml，小瓶分裝，每瓶一次用完。常用的動物血清主要有牛血清和馬血清。牛血清分為胎牛血清和犢牛血清，前者來源少，價(jià)格高；后者要求剛產(chǎn)下尚未哺乳的小牛，因?yàn)椴溉楹蟮男∨Ｑ逯锌赡芎懈鼜?fù)雜的成分。血清中已知的成分主要有蛋白質(zhì)、氨基酸、葡萄糖等。蛋白質(zhì)主要是白蛋白和球蛋白。堿性瓊脂

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