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在配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)盡量利用廉價(jià)且易于獲得的原料作為培養(yǎng)基成分,特別是在發(fā)酵工業(yè)中,培養(yǎng)基用量很大,利用低成本的原料更體現(xiàn)出其經(jīng)濟(jì)價(jià)值。例如,在微生物單細(xì)胞蛋白的工業(yè)生產(chǎn)過(guò)程中,常常利用糖蜜(制糖工業(yè)中含有蔗糖的廢液)、乳清(乳制品工業(yè)中含有乳糖的廢液)、豆制品工業(yè)廢液及黑廢液(造紙工業(yè)中含有戊糖和己糖的亞硫酸紙漿)等都可作為培養(yǎng)基的原料。再如,工業(yè)上的甲烷發(fā)酵主要利用廢水、廢渣作原料,而在我國(guó)農(nóng)村,已推廣利用人畜糞便及禾草為原料發(fā)酵生產(chǎn)甲烷作為燃料。另外,大量的農(nóng)副產(chǎn)品或制品,如鼓皮、米糠、玉米漿、酵母浸膏、酒糟、豆餅、花生餅、蛋白胨等都是常用的發(fā)酵工業(yè)原料。培養(yǎng)基是一種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)混合物,可以為細(xì)胞提供生長(zhǎng)所需的物質(zhì)。輕唾桿菌肽瓊脂(MSBA)基礎(chǔ)
胰島素(Insulin)作用普遍,包括調(diào)節(jié)脂肪和蛋白質(zhì)的代謝以及促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)等。胰島素功能的發(fā)揮源于其對(duì)細(xì)胞的作用,進(jìn)而引起組織乃至機(jī)體的整體反應(yīng)。一般可將胰島素在細(xì)胞水平的作用分為三大類:代謝作用、促生長(zhǎng)作用、以及代謝和促生長(zhǎng)混合作用。胰島素對(duì)細(xì)胞的代謝調(diào)節(jié)作用主要是通過(guò)其與細(xì)胞膜上的胰島素受體(Insulin receptor, IR)相互作用而介導(dǎo),而胰島素對(duì)細(xì)胞的促生長(zhǎng)作用則是通過(guò)其與細(xì)胞膜上胰島素的樣生長(zhǎng)的因子受體(IGF Receptor, IG)相互作用而介導(dǎo)的。在無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)液中,常添加胰島素來(lái)維持細(xì)胞生長(zhǎng),調(diào)節(jié)細(xì)胞對(duì)葡萄糖、氨基酸和脂肪酸的攝取、利用和貯存,同時(shí)抑制糖原、蛋白質(zhì)和脂肪的分解。Kovacs氏靛基質(zhì)試劑雜質(zhì)會(huì)影響培養(yǎng)基的成分,因此制備培養(yǎng)基時(shí)需要進(jìn)行滅菌。
天然培養(yǎng)基血清種類:目用于組織培養(yǎng)的血清主要是牛血清,培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也用人血清、馬血清等。選擇用牛血清培養(yǎng)細(xì)胞的原因:來(lái)源充足、制備技術(shù)成熟、經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的應(yīng)用考驗(yàn)人們對(duì)其有比較深入的理解。牛血清對(duì)絕大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞都是適合的,但并不排除在培養(yǎng)某種細(xì)胞時(shí)使用其他動(dòng)物血清更合適。牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量比較大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份,具有極為重要的功能。牛血清分為小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。顯然,胎牛血清是品質(zhì)比較高的,因?yàn)樘ヅ_€未接觸外界,血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分較少。
選擇性培養(yǎng)基(selective media) 選擇性培養(yǎng)基含有營(yíng)養(yǎng)物(增菌劑)和抑菌劑(選擇劑),標(biāo)本接種于此類培養(yǎng)基后,由于抑菌劑的選擇性抑制作用,使非目的菌受到不同程度的抑制,更有利于目的菌的增殖或分離。利用選擇性培養(yǎng)基經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的增菌培養(yǎng),再接種于選擇性鑒別培養(yǎng)基,可以提高目的菌的陽(yáng)性檢出率。抑菌劑的種類很多,常用的有孔雀綠、燦爛綠、亞硒酸鈉、去氧膽酸鈉、膽鹽、四硫磺酸鈉等。抑菌劑的加入量要適宜、準(zhǔn)確,有的劇毒,有的不耐高熱,配制時(shí)須特別注意。固體培養(yǎng)基則通過(guò)向液態(tài)培養(yǎng)基中加入凝膠劑來(lái)制成,以便在培養(yǎng)過(guò)程中提供可視化定位細(xì)胞的單元。
細(xì)菌培養(yǎng)基之面粉瓊脂培養(yǎng)基:面粉60g,瓊脂20g,水1000ml把面粉用水調(diào)成糊狀,加水到500ml,放在文火上煮30分鐘。另取500ml水,放入瓊脂,加熱煮沸到溶解后,把兩液調(diào)勻,補(bǔ)充水分,調(diào)整pH值到7.4,分裝,滅菌,備用。微藻培養(yǎng)基,BG-11培養(yǎng)基:NaNO3 1.5g,K2HPO4 ·3H2O0.04g,MgSO4·7H2O0.075g,CaCl2 ·2H2O0.036g Citric Acid (檸檬酸)0.006g,F(xiàn)erric ammonium citrate(檸檬酸鐵銨0.006g,EDTA (dinatrium-salt) 0.001g,Na2CO3 0.02g,A5 + Co solution * (A5溶液1000×)1ml Distilled Water (蒸餾水)919ml。
液體培養(yǎng)基普遍應(yīng)用于微生物菌株的生長(zhǎng)、染色及細(xì)胞背景下的細(xì)胞培養(yǎng)等方面。MIO培養(yǎng)基
培養(yǎng)基中的各種成分會(huì)被微生物不同速率地利用,因此需要在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間點(diǎn)更新培養(yǎng)基以維持細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)。輕唾桿菌肽瓊脂(MSBA)基礎(chǔ)
總體而言,所有微生物生長(zhǎng)繁殖均需要培養(yǎng)基含有碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子、水及能源,但由于微生物營(yíng)養(yǎng)類型復(fù)雜,不同微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求是不一樣的,因此首先要根據(jù)不同微生物的營(yíng)養(yǎng)需求配制針對(duì)性強(qiáng)的培養(yǎng)基。自養(yǎng)型微生物能從簡(jiǎn)單的無(wú)機(jī)物合成自身需要的糖類、脂類、蛋白質(zhì)、核酸、維生素等復(fù)雜的有機(jī)物,因此培養(yǎng)自養(yǎng)型微生物的培養(yǎng)基完全可以(或應(yīng)該)由簡(jiǎn)單的無(wú)機(jī)物組成。例如,培養(yǎng)化能自養(yǎng)型的氧化硫硫桿菌(Thiobacillus thiooxdans)的培養(yǎng)基組成見(jiàn)表3.9。在該培養(yǎng)基配制過(guò)程中并未專門加入其他碳源物質(zhì),而是依靠空氣中和溶于水中的CO2為氧化硫硫桿菌提供碳源。輕唾桿菌肽瓊脂(MSBA)基礎(chǔ)
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