斑馬魚測試技術(shù)

斑馬魚模型既具有體外實(shí)驗(yàn)快速、高效、費(fèi)用低等優(yōu)勢，又具有哺乳類動物實(shí)驗(yàn)預(yù)測性強(qiáng)、可比度高等優(yōu)點(diǎn)，可以有效彌補(bǔ)體外實(shí)驗(yàn)和哺乳類動物實(shí)驗(yàn)之間的巨大生物學(xué)斷層，完善現(xiàn)有藥物研發(fā)體系。將斑馬魚模型魚體外實(shí)驗(yàn)和哺乳動物實(shí)驗(yàn)相結(jié)合，可以從整體上縮短藥物臨床前早期研發(fā)的實(shí)驗(yàn)周期，降低實(shí)驗(yàn)成本，提高實(shí)驗(yàn)預(yù)測的準(zhǔn)確性，進(jìn)而提高藥物研發(fā)效率，降低藥物研發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。全球醫(yī)藥巨頭輝瑞、羅氏、諾華、葛蘭素史克、阿斯利康等都逐漸開始使用斑馬魚技術(shù)進(jìn)行藥物篩選研發(fā)。2009年，斑馬魚藥物毒理學(xué)評價(jià)技術(shù)通過FDA和EMA的GLP認(rèn)證，這標(biāo)志著斑馬魚模型的安全藥理學(xué)和毒理學(xué)評價(jià)結(jié)果可以作為正式材料納入臨床試驗(yàn)申報(bào)資料。斑馬魚可以在體外試驗(yàn)和哺乳動物試驗(yàn)之間起到了很好的效果。斑馬魚測試技術(shù)

【試驗(yàn)計(jì)劃】咱們將受測試斑馬魚分成兩組，分別是正常對照和服用/打針供試品組（供試品經(jīng)過溶解到養(yǎng)魚用水中或打針的方法攝入到斑馬魚體內(nèi)）。服用/打針?biāo)幬镆欢螘r(shí)間后，檢測尾長、彗星長、尾矩和Olive尾矩。能夠看到，服用/打針供試品組斑馬魚細(xì)胞核呈現(xiàn)拖尾。該供試品改變DNA鏈的負(fù)超螺旋結(jié)構(gòu)、空間構(gòu)象，使DNA鏈斷裂、形成類核，終究導(dǎo)致細(xì)胞逝世（壞死、凋亡或自體吞噬）?！军c(diǎn)評結(jié)論】1.經(jīng)過每組30尾斑馬魚的比照試驗(yàn)，服用/打針供試品組的斑馬魚細(xì)胞核呈現(xiàn)顯著拖尾，與正常對照組存在顯著的差別。2.本試驗(yàn)證明了該供試品對斑馬魚有基因毒性。斑馬魚養(yǎng)殖gendanio斑馬魚試驗(yàn)成功驗(yàn)證中藥在體內(nèi)的效果機(jī)理。

令人驚奇的是，這種生活在熱帶的魚還可以“再造”被部分切除的組織，從而為從事修正受損脊髓的研討人員打開了方便之門?，F(xiàn)在，斑馬魚的使用正逐漸拓寬和深化到生命體的多種系統(tǒng)的發(fā)育、功用和疾病的研討中，并用于遺傳學(xué)、藥物學(xué)、毒理學(xué)等諸多方面。在藥品研發(fā)等方面，每年有很多新藥進(jìn)入臨床或者臨床前階段，它們是否對人體有害需要進(jìn)行科學(xué)的安全點(diǎn)評?！皩?shí)驗(yàn)新星”斑馬魚再次擔(dān)當(dāng)重?fù)?dān)，斑馬魚胚胎和幼魚對有害物質(zhì)十分敏感，同時(shí)用藥簡單，只需將藥物放入養(yǎng)殖胚胎的水中或快速打針，用藥量少、測驗(yàn)周期短。

報(bào)告基因選用GFP或RFP，**小啟動子來自斑馬魚gata2基因；將上述載體與體外轉(zhuǎn)錄得到的Tol2轉(zhuǎn)座酶的mRNA共同注射到斑馬魚的單細(xì)胞受精卵中，受精卵長大后成為founder；Founder外交（out-cross）得到F1代胚胎，從中挑選出對于報(bào)告基因具有組織特異性表達(dá)模式的胚胎，拍照記錄后分類培養(yǎng)；F1長大后通過linker-mediatedPCR的方法鑒定對應(yīng)于GFP（或RFP）表達(dá)圖式的Tol2插入位點(diǎn)，并通過與已知基因組數(shù)據(jù)比較，對插入位點(diǎn)進(jìn)行定位與分析；通過外交純化得到轉(zhuǎn)基因魚，直至得到只含有單個(gè)插入品系的轉(zhuǎn)基因魚。斑馬魚在工業(yè)實(shí)驗(yàn)室中常被用作毒理學(xué)檢驗(yàn)。

【試驗(yàn)計(jì)劃】咱們將受測試軟骨熒光斑馬魚分成三組，分別是正常對照組、模型對照組和軟骨修正產(chǎn)品組。其間正常對照組未攝入DXMS，模型對照組與服用軟骨修正產(chǎn)品組都攝入了等量的DXMS（DXMS經(jīng)過溶解到養(yǎng)魚用水中的方法攝入到斑馬魚體內(nèi)）。服用軟骨修正產(chǎn)品組在攝入DXMS的一起攝入硫酸軟骨素之類的軟骨修正產(chǎn)品。服用一段時(shí)間軟骨修正產(chǎn)品后，咱們觀察軟骨熒光的改變。能夠看到，服用軟骨修正產(chǎn)品組的軟骨情況與未攝入DXMS的正常對照組比較類似，沒有明顯的軟骨損害。斑馬魚在藥理學(xué)毒理學(xué)的應(yīng)用。斑馬魚行為分析系統(tǒng)

斑馬魚實(shí)驗(yàn)動物模型。斑馬魚測試技術(shù)

斑馬魚是種模式生物，用來做研究的由于斑馬魚基因與人類基因的相zhi似度達(dá)到87％，這意味著在其身上做藥dao物實(shí)驗(yàn)所得到的結(jié)果在多數(shù)情況下也適用于人體，因此它受到生物學(xué)家的重視。因?yàn)榘唏R魚的胚胎是透明的，所以生物學(xué)家很容易觀察到藥物對其體內(nèi)***的影響。此外，雌性斑馬魚可產(chǎn)卵200枚，胚胎在24小時(shí)內(nèi)就可發(fā)育成形，這使得生物學(xué)家可以在同一代魚身上進(jìn)行不同的實(shí)驗(yàn)，進(jìn)而研究病理演化過程并找到病因。斑馬魚啟發(fā)科學(xué)家斑馬魚是一種體長3至4厘米的熱帶魚，因色彩鮮明的斑紋得名。這種小魚雖然十分常見，卻一直是科學(xué)家關(guān)注的焦點(diǎn)，因?yàn)樗哂凶晕倚迯?fù)破損視網(wǎng)膜的獨(dú)特能力。英國科學(xué)家1日說，他們***發(fā)現(xiàn)，人類視網(wǎng)膜中也擁有類似斑馬魚能夠修復(fù)視網(wǎng)膜的細(xì)胞，并計(jì)劃在5年內(nèi)將研究結(jié)果用于失明患者***，讓他們重見光明。這項(xiàng)研究由英國倫敦大學(xué)學(xué)院眼科學(xué)院和倫敦穆爾菲爾茲眼科醫(yī)院共同發(fā)起。研究人員重點(diǎn)研究斑馬魚視網(wǎng)膜內(nèi)具有干細(xì)胞特征的放射狀膠質(zhì)細(xì)胞，這種細(xì)胞能夠分化為各種不同種類的細(xì)胞。斑馬魚測試技術(shù)

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