重慶市藥物安全評(píng)價(jià)公司

由于硬骨魚和人類在骨骼發(fā)育過程中的基因、信號(hào)通路有高度同源性，而且與其他的動(dòng)物模型相比，斑馬魚具有個(gè)體小適合高通量化學(xué)篩選、幼魚身體透明易于觀察骨骼發(fā)育的特點(diǎn)，所以近年來以斑馬魚為模型的骨骼研究逐漸成為這一領(lǐng)域的熱點(diǎn)。斑馬魚從前向后的脊椎發(fā)育過程是非連續(xù)的，而是分成兩個(gè)不同的區(qū)域：前域（包括第3塊椎骨）和后域（包括第4-31塊椎骨）。將斑馬魚脊椎骨鈣化過程分成兩個(gè)不同區(qū)域是基于第2和第3椎骨的出現(xiàn)晚于第4椎骨。我們利用斑馬魚骨骼發(fā)育的規(guī)律，攝入生長(zhǎng)發(fā)育促進(jìn)劑的斑馬魚脊椎骨發(fā)育會(huì)加快。脊椎骨染色應(yīng)用與鈣特異性結(jié)合的熒光染料（呈綠色），經(jīng)熒光顯微鏡觀察脊椎骨的數(shù)量。斑馬魚模型評(píng)價(jià)基因毒性。重慶市藥物安全評(píng)價(jià)公司

隨著電子產(chǎn)品的大量使用，用眼的時(shí)間和強(qiáng)度已遠(yuǎn)超過去，用眼過度引起一系列視力問題。研究表明，高度近視、視網(wǎng)膜疾病、白內(nèi)障、眼干燥關(guān)節(jié)綜合征均與眼細(xì)胞凋亡相關(guān)。斑馬魚的眼部血管結(jié)構(gòu)跟人非常相似，斑馬魚視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)也跟人高度相似。用霉酚酸嗎啉乙酯可以誘發(fā)斑馬魚眼細(xì)胞凋亡，模擬人的眼部疾病。用特異性熒光染色（呈綠色），患有眼疾的斑馬魚眼細(xì)胞凋亡較正常斑馬魚明顯增多，在熒光顯微鏡下可以觀察到。我們將受測(cè)試斑馬魚分成三組，分別是正常對(duì)照組、模型對(duì)照組和藥物組。其中正常對(duì)照組未攝入霉酚酸嗎啉乙酯，模型對(duì)照組與服用眼保護(hù)劑組都攝入了等量的霉酚酸嗎啉乙酯（霉酚酸嗎啉乙酯通過溶解到養(yǎng)魚用水中的方式攝入到斑馬魚體內(nèi)）。眼保護(hù)劑組在攝入霉酚酸嗎啉乙酯的同時(shí)攝入藍(lán)莓葉黃素酯之類的眼保護(hù)劑。服用一段時(shí)間眼保護(hù)劑后，我們對(duì)斑馬魚整體做凋亡細(xì)胞特異性染色，觀察細(xì)胞凋亡，同時(shí)制作成病理切片觀察眼部的病理結(jié)構(gòu)變化。藥品功效檢驗(yàn)斑馬魚實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?藥物、化妝品功效評(píng)價(jià)。

我們將受測(cè)試斑馬魚分成三組，分別是正常對(duì)照組、模型對(duì)照組和服用免疫調(diào)節(jié)劑組。其中正常對(duì)照組未注射長(zhǎng)春瑞濱，模型對(duì)照組與服用免疫調(diào)節(jié)劑組都注射了等量的長(zhǎng)春瑞濱（長(zhǎng)春瑞濱通過靜脈注射的方式攝入到斑馬魚體內(nèi)）。服用免疫調(diào)節(jié)劑組在注射長(zhǎng)春瑞濱后攝入異丙肌苷等免疫調(diào)節(jié)劑。服用一段時(shí)間免疫調(diào)節(jié)劑后，我們觀察斑馬魚T細(xì)胞熒光強(qiáng)度變化?？梢钥吹剑庖哒{(diào)節(jié)劑組T細(xì)胞熒光強(qiáng)度與未注射長(zhǎng)春瑞濱的正常對(duì)照組比較相似，沒有出現(xiàn)明顯的T細(xì)胞減少情況。

腸道消化是食物在消化道中分解的過程，包括機(jī)械性消化（通過消化道肌肉搜索將食物與消化液混合并向消化道遠(yuǎn)端推送）和化學(xué)性消化（通過消化腺分泌的消化酶將大分子分解為小分子物質(zhì)的過程）。腸道內(nèi)的消化液包括胰脂肪酶、胰蛋白酶、胰淀粉酶等。在受精后的26-126h，斑馬魚腸道的管腔形成，內(nèi)胚層分化出連續(xù)的有功能的腸道上皮。斑馬魚腸道肌肉發(fā)達(dá)，可分為兩層平滑肌，有利于食物的蠕動(dòng)消化。通過特異性的檢測(cè)試劑盒檢測(cè)OD值，可以量化斑馬魚體內(nèi)胰脂肪酶和胰蛋白酶含量。藥物臨床前研究實(shí)驗(yàn)。

斑馬魚消化道的解剖結(jié)構(gòu)和細(xì)胞結(jié)構(gòu)與人類消化道相似，具有同心圓層的內(nèi)上皮、結(jié)締組織、環(huán)狀肌肉和外縱肌層。三硝基苯磺酸（TNBS）的乙醇溶液造模法屬于正常免疫系統(tǒng)下的半抗原誘導(dǎo)性模型，當(dāng)TNBS的乙醇溶液灌腸時(shí)，乙醇作為有機(jī)溶劑溶解腸粘膜表面的黏液，暫時(shí)性破壞腸粘膜屏障，使TNBS和腸組織蛋白結(jié)合形成完全抗原，導(dǎo)致腸黏膜免疫系統(tǒng)針對(duì)該抗原的遲發(fā)性變化反應(yīng)，并造成腸黏膜的損傷。杯狀細(xì)胞是黏蛋白的主要來源，其數(shù)量和形態(tài)反應(yīng)腸粘膜的健康狀況，是腸粘膜異常的敏感指標(biāo)。由于斑馬魚通體透明的特點(diǎn)，有兩種方法檢測(cè)結(jié)腸炎的防治作用。1.觀察腸腔面積的變化，2.通過特異性染料（呈藍(lán)色）對(duì)腸道的杯狀細(xì)胞染色，通過觀察杯狀細(xì)胞數(shù)量來判斷腸粘膜的損傷情況。評(píng)價(jià)疏肝解酒酒精性脂肪肝防治功效。體外實(shí)驗(yàn)對(duì)其藥效進(jìn)行評(píng)價(jià)

斑馬魚模型評(píng)價(jià)胃腸道毒性。重慶市藥物安全評(píng)價(jià)公司

蛋黃粉中60%為脂類，用蛋黃粉喂食斑馬魚，可以使斑馬魚血液中的脂肪含量快速升高，從而建立斑馬魚血脂高癥模型。經(jīng)過油紅O特異性脂肪染色（與組織內(nèi)甘油三酯等脂肪滴結(jié)合呈橘紅色），血脂高斑馬魚血管內(nèi)肉眼可見明顯的脂質(zhì)聚積，通過靜脈注射，可見熒光標(biāo)記膽固醇的積累。我們?cè)u(píng)價(jià)斑馬魚降低血脂功效有4個(gè)指標(biāo)：1.斑馬魚血脂表型圖；2.斑馬魚總甘油三脂含量；3.斑馬魚膽固醇表型圖；4.斑馬魚總膽固醇含量。1.經(jīng)過每組30尾斑馬魚的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，服用降脂產(chǎn)品組的血脂聚積情況與模型對(duì)照組比較明顯減少。2.本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了阿托伐他汀鈣、辛伐他汀、洛伐他汀類降脂產(chǎn)品具有明顯的降脂降膽固醇作用。重慶市藥物安全評(píng)價(jià)公司