河南胰酶常用知識(shí)

品名：0.25%胰蛋白酶溶液，1X分類(lèi)：細(xì)胞消化試劑規(guī)格：100ML用途：消化試劑，如胰蛋白酶，被用于將粘附細(xì)胞從其附著的表面或底物上分離和降解，以及將組織進(jìn)行游離，以開(kāi)展原代細(xì)胞培養(yǎng)。產(chǎn)品包括2種常用濃度的γ照射豬胰蛋白酶（1：250）以及一種新型非哺乳動(dòng)物豬胰蛋白酶替代品，稱為T(mén)hermoScientificHyQTaseTM.HyQTase是一種蛋白水解酶和膠原水解酶的混合超濾溶液，可以快速消化，同時(shí)不損傷細(xì)胞。其非哺乳動(dòng)物配方使它適用于無(wú)血清應(yīng)用，不需要失效或?qū)γ敢种苿４嗽噭┛墒辜?xì)胞被快速分離，形成單細(xì)胞懸浮物，保持高細(xì)胞活力，并使傳代時(shí)的變異減至**小。在消化酶中，胰酶主要用于促進(jìn)消化。河南胰酶常用知識(shí)

    胰蛋白酶**點(diǎn)評(píng)胰蛋白酶能使痰、血凝塊溶化變稀，易于引流排痰，加速創(chuàng)面愈合凈化，促進(jìn)肉芽**增生，而不損傷正常**，臨床上有消消腫功能。[4]胰蛋白酶其他胰蛋白酶細(xì)胞培養(yǎng)胰蛋白酶的作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。不同的**或者細(xì)胞對(duì)胰酶的作用反應(yīng)不一樣。胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān)，在pH為、溫度為37℃時(shí)，胰酶溶液的作用能力**強(qiáng)。使用胰酶時(shí)，應(yīng)把握好濃度、溫度和時(shí)間，以免消化過(guò)度造成細(xì)胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質(zhì)可降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液時(shí)應(yīng)選用不含Ca2+、Mg2+的BSS，如：D-Hanks液。終止消化時(shí)，可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶**劑終止胰酶對(duì)細(xì)胞的作用。1.稱取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液濃度為%，用電子天平準(zhǔn)確稱取粉劑溶入小燒杯中的雙蒸水（若用雙蒸水需要調(diào)PH到左右）或PBS（D-hanks）液中。攪拌混勻，置于4℃內(nèi)過(guò)夜。2.用注射濾器抽濾消毒：配好的胰酶溶液要在超凈臺(tái)內(nèi)用注射濾器（微米微孔濾膜）抽濾**。3.分裝成小瓶于-20℃保存以備使用可！詞條圖冊(cè)更多圖冊(cè)參考資料1.胰蛋白酶．化學(xué)品數(shù)據(jù)庫(kù)[引用日期2017-05-26].***典**會(huì)，***典2010版[M]，北京：**醫(yī)*科技出版社。福建重組胰酶一般多少錢(qián)細(xì)胞培養(yǎng)中胰酶的作用一般是分解脂肪等。

細(xì)胞消化胰酶的配制對(duì)一般細(xì)胞0.25%胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)配方：100mlPBS,0.25g胰酶步驟：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸餾水)2稱胰酶0.25g3加入PBS中，低速攪拌〈4h冰浴中,或者4℃過(guò)夜低速攪拌0.5h冰浴中4調(diào)PH7.45仍在冰浴中6過(guò)濾，分裝，-20℃保存，4℃短期內(nèi)用完tip:低速很重要，機(jī)械攪拌對(duì)酶是一種沖擊，如果起沫，酶就變性了。低溫，防止酶失活對(duì)難消化的細(xì)胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:因?yàn)镋DTA可以絡(luò)合Ca2+，增加消化效力

胰酶操作步驟：

(*供參考) ：1. 吸取培養(yǎng)基，用無(wú)菌的PBS、Hanks液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以除去殘余的血清。2. 加入適量的胰蛋白酶消化液，略蓋過(guò)細(xì)胞即可。根據(jù)細(xì)胞的特性可以增加或減少胰酶用量，室溫放置30秒至2分鐘。（不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同）3. 顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化呈白茫狀；或者用***吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)。4. 此時(shí)吸除胰酶細(xì)胞消化液。加入含血清的完全細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入胰酶細(xì)胞消化液重新消化。 胰酶4℃保存，一年有效；-20℃可保存更長(zhǎng)時(shí)間。

    冰凍保存，但不得反復(fù)凍融。供試品溶液的制備取本品適量，精密稱定，加。測(cè)定法取底物溶液、（pH）1ml，混勻，作為空白。取供試品溶液（預(yù)熱至25℃±℃），立即計(jì)時(shí)并搖勻，使比色池內(nèi)的溫度保持在25℃±℃，照紫外－可見(jiàn)分光光度法（2010年版*典二部附錄ⅣA），在237nm的波長(zhǎng)處，每隔30秒讀取吸光度，共5分鐘，每30秒鐘吸光度的變化率應(yīng)恒定，且恒定時(shí)間不得少于3分鐘。以吸光度為縱坐標(biāo)，時(shí)間為橫坐標(biāo)，作圖，取在3分鐘內(nèi)成直線部分的吸光度，按下式計(jì)算。式中P為每2500胰蛋白酶單位中含糜蛋白酶的量，單位；A2為直線上開(kāi)始的吸光度；A1為直線上終止的吸光度；T為A2至A1讀數(shù)的時(shí)間，分；W為測(cè)定液中含供試品的量，mg;，吸光度每分鐘改變，即相當(dāng)于1個(gè)糜蛋白酶單位。每2500單位胰蛋白酶中不得多于50單位的糜蛋白酶。干燥失重取本品適量，以五氧化二磷為干燥劑，在60℃減壓干燥4小時(shí)，減失重量不得過(guò)（2010年版*典二部附錄ⅧL）。胰蛋白酶效價(jià)測(cè)定底物溶液的制備取N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯鹽酸鹽，加水溶解使成100ml，作為底物原液；取10ml，用磷酸鹽緩沖液（取，pH值為）稀釋成100ml，照紫外－可見(jiàn)分光光度法（2010年版*典二部附錄ⅣA），恒溫于℃±℃，以水作空白。胰蛋白酶水解或胰蛋白酶化是蛋白質(zhì)被胰蛋白酶消化或處理的過(guò)程，因此被稱為胰蛋白酶化。河南胰酶常用知識(shí)

含EDTA的胰酶消化活力會(huì)比不含EDTA的強(qiáng)。河南胰酶常用知識(shí)

    EDTA-胰蛋白酶的配制1、胰酶是，就是說(shuō)，盡量不要用水來(lái)溶，因?yàn)橐３譂B透壓。2、EDTA的工作液溶度是－，根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度自己調(diào)整。EDTA并不是必須的，容易消化的細(xì)胞可不加。EDTA對(duì)細(xì)胞貼壁性有影響，因此使用時(shí)要甚重。如果影響貼壁，但消化時(shí)必須要用，那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后，可離心棄上清，再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，可去除EDTA。如果對(duì)貼壁沒(méi)影響，那么可不離心。3、EDTA的濃度也是質(zhì)量體積比。和胰酶一起溶于PBS。4、注意，血清可終止胰酶的作用，但不能終止EDTA的作用，對(duì)有些細(xì)胞來(lái)說(shuō)，終止消化后的離心是必要的。5、胰酶和EDTA在pH為8左右的時(shí)候**易溶解，在配制時(shí)可先滴幾滴NaOH將pH調(diào)至8，注意，胰酶可使溶液變酸，所以要邊溶邊測(cè)pH，隨時(shí)調(diào)整。注意，不可加過(guò)量NaOH，否則過(guò)堿，細(xì)胞會(huì)受不了。6、胰酶EDTA相對(duì)比較難溶，可用磁力攪拌器，或放入4度冰箱過(guò)夜，待溶解后過(guò)濾除菌。7、可配2－3乘的胰酶，這樣比較節(jié)約時(shí)間和濾器，用的時(shí)候?qū)ι蠝缇鶳BS即可。8、儲(chǔ)存液放在－20度冰箱凍存，使用液放在4度，用的時(shí)候不要放在27度水浴鍋溫浴，因?yàn)檫@樣會(huì)讓胰酶很快失效，使用前放在室溫下一會(huì)，因?yàn)榧拥牧亢苌?，所以一般不?huì)凍壞細(xì)胞。9、消化時(shí)。 河南胰酶常用知識(shí)